南京市發(fā)現(xiàn)感染札幌病毒致老年人腹瀉

李 偉 祁 賢 吳 培 付建光 謝國(guó)祥 張洪英

(南京市疾病預(yù)防控制中心，江蘇 南京 210003)

·其 他·

南京市發(fā)現(xiàn)感染札幌病毒致老年人腹瀉

李 偉 祁 賢1吳 培2付建光1謝國(guó)祥 張洪英

(南京市疾病預(yù)防控制中心，江蘇 南京 210003)

目的 探討應(yīng)用分子生物學(xué)檢測(cè)老年人腹瀉病因的臨床評(píng)價(jià)。方法 隨機(jī)收集2011年1～6月在南京某醫(yī)院腹瀉門診就診并臨床診斷病毒性腹瀉的60歲以上老年人的糞便20份，對(duì)諾如病毒、札幌病毒、輪狀病毒、腸腺病毒和星狀病毒進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷進(jìn)行比對(duì)，用于指導(dǎo)用藥和治療。結(jié)果 20份隨機(jī)樣中共檢測(cè)到13份陽性，其中有5份諾如病毒，4份輪狀病毒，2份腸腺病毒，1份星狀病毒，1份札幌病毒，病毒感染陽性率高達(dá)65%，加上由于技術(shù)原因不能檢測(cè)到的病毒，該結(jié)果說明臨床判斷的準(zhǔn)確性很高。結(jié)論 確定病原后采取支持療法，病人康復(fù)，避免了抗生素的使用。另外，札幌病毒感染老年人致腹瀉在南京是首次報(bào)道。

腹瀉，札幌病毒，輪狀病毒，諾如病毒,腸腺病毒，星狀病毒

病毒性腹瀉的研究日益增多，包括輪狀病毒、諾如病毒等〔1〕。成年人的腹瀉病原研究表明，成年人病毒性腹瀉的病原有輪狀病毒、諾如病毒、星狀病毒和腸腺病毒〔2〕，其臨床特點(diǎn)有別于其他感染性腹瀉，尤其是諾如病毒感染者〔3〕。根據(jù)病毒性腹瀉的臨床特點(diǎn)，本文收集了半年的年齡>60歲的老年人樣本進(jìn)行檢測(cè)，以期觀察病原學(xué)檢測(cè)與該臨床特點(diǎn)的相符程度以及對(duì)指導(dǎo)用藥的意義。

1 材料和方法

1.1 臨床樣本的收集 隨機(jī)收集2011年1～6月在南京某醫(yī)院腹瀉門診就診并臨床診斷病毒性腹瀉的60歲以上老年人的糞便20份，用一次性采樣器具，糞便盒編號(hào)后帶回實(shí)驗(yàn)室24 h內(nèi)檢測(cè)。

1.2 分子生物學(xué)檢測(cè)及測(cè)序分析 核酸提取和熒光定量PCR按照本實(shí)驗(yàn)室建立的方法進(jìn)行〔4,5〕：用ABI核酸提取儀對(duì)糞便樣本進(jìn)行核酸提取，然后用ABI 7500熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒為TaqMan Probe Reaction Mix(ABI)，分析軟件為SDSv1.3.2版本。反應(yīng)條件為反轉(zhuǎn)錄50℃30 min，變性95℃10 min，擴(kuò)增45個(gè)循環(huán)，95℃10 s，55℃ 40 s，55℃ 40 s時(shí)收集熒光。判斷標(biāo)準(zhǔn)：Ct值≤37且有對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線的為擴(kuò)增陽性，Ct值>37且有對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線需重復(fù)實(shí)驗(yàn)后仍有增長(zhǎng)曲線的為擴(kuò)增陽性，無對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線的為擴(kuò)增陰性。經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè)陽性的病毒核酸經(jīng)同樣一對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，不加探針，PCR產(chǎn)物送到公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果在美國(guó)國(guó)家生物中心網(wǎng)站進(jìn)行序列比對(duì)，比對(duì)庫(kù)包括四個(gè)庫(kù)所有的序列庫(kù)GenBank+EMBL+DDBJ+PDB，利用生物學(xué)軟件(MEGA 5.0)根據(jù)序列同源性繪制進(jìn)化樹，比對(duì)氨基酸及核苷酸同源性。

1.3 病原檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷的比較 對(duì)臨床診斷結(jié)果與病原檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。以病原學(xué)檢測(cè)為準(zhǔn)，計(jì)算臨床診斷的準(zhǔn)確率。

2 結(jié) 果

2.1 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果及其意義 經(jīng)過分子生物學(xué)檢測(cè)，20份老年人腹瀉的病原有13份陽性，其中有5份諾如病毒，4份輪狀病毒，2份腸腺病毒，1份星狀病毒，1份札幌病毒，病毒陽性率高達(dá)65%；加上由于技術(shù)原因不能檢測(cè)到的病毒，該結(jié)果說明臨床診斷的準(zhǔn)確性很高，至少65%。由于確定了病原，醫(yī)生采取微生物制劑結(jié)合支持療法，3～5 d后病人康復(fù)，避免了抗生素的使用，減輕了病人的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。

2.2 病原測(cè)序結(jié)果分析 經(jīng)過測(cè)序，熒光定量PCR的13份陽性有10份獲得測(cè)序結(jié)果，測(cè)序序列片段在網(wǎng)上序列庫(kù)比對(duì)結(jié)果都正確。其中一份札幌病毒感染的病人為73歲女性，由于是南京市第1例病原學(xué)確診的老年人病例，本文對(duì)病毒序列進(jìn)行進(jìn)一步的進(jìn)化樹分析，如圖1所示，本次調(diào)查病例(Sapovirus/ZD01/Jiangsu/2011)的序列位于G1.2分支，同G1.2分支上的其他三株之間核酸同源性為94.4%～97.3%，氨基酸同源性為94.9%～100%。

分支處的數(shù)字是Bootstrap 檢驗(yàn)的可信度;標(biāo)尺值0.02代表單位長(zhǎng)度內(nèi)核苷酸差異水平

3 討 論

病毒性腹瀉在感染性腹瀉中的比例日趨升高，對(duì)不同的人群都很重要，尤其是兒童和老人，常成為主要受害者。但是病原學(xué)檢測(cè)除了費(fèi)用的問題外，還需要時(shí)間的等待，有很多醫(yī)院尚沒有開展相應(yīng)的檢驗(yàn)項(xiàng)目。所以，如果能提高臨床診斷準(zhǔn)確率，在一定程度上將有助于提高疾病的治療效率，尤其對(duì)于有基礎(chǔ)疾病的老人和免疫尚未成熟的兒童。本研究表明，提高病毒性腹瀉的臨床診斷準(zhǔn)確率是可能的，而且是可行的。這不但有助于降低治療費(fèi)用和風(fēng)險(xiǎn)，而且有助于提高治愈率。

關(guān)于病毒性腹瀉的病原研究主要集中在輪狀病毒和諾如病毒，對(duì)于札幌病毒的研究不多，暗示札幌病毒是一種不常見的病原體。人類札幌病毒，原名札幌樣病毒，是單股正鏈RNA病毒，屬于杯狀病毒科。該科包括四個(gè)病毒屬，札幌病毒屬、諾如病毒屬、兔出血熱病毒屬和囊病毒屬，分別包括札幌病毒，諾如病毒(或稱諾瓦克病毒)，兔出血癥病毒和貓杯狀病毒。札幌病毒是兒童和成人腸胃炎的病原體，分為5基因型組(GⅠ～GⅤ)，其中GⅠ， GⅡ ， GⅣ和GⅤ感染人類，GⅢ感染豬。GⅠ可以分為GⅠ.1，GⅠ.2，GⅠ.3，其中GⅠ.2是一種新出現(xiàn)的亞型，近年來，在歐洲GⅠ.2亞型札幌病毒引起了一些散發(fā)病例和幾起暴發(fā)事件，感染的病例不僅僅是兒童，還有成年人。札幌病毒引起的暴發(fā)事件的增加同樣與GⅠ.2的出現(xiàn)有關(guān)〔6,7〕。

由于關(guān)于札幌病毒的研究不多，因此很難得出有關(guān)發(fā)病率、總體患病率的結(jié)論。然而，大多數(shù)研究表明，札幌病毒感染在幼兒比成人更頻繁，而且兒童幾乎總是發(fā)生在5歲以下〔8〕。方肇寅等〔9〕報(bào)道了我國(guó)嬰幼兒札幌病毒導(dǎo)致的腹瀉，許可等〔10〕、李曉樂等〔11〕、林謙等〔12〕報(bào)道南京腹瀉兒童中檢測(cè)到札幌病毒的感染，羅璇等〔13〕和陳冬梅等〔14〕也分別報(bào)道了蘭州和北京腹瀉兒童感染的札幌病毒。本研究報(bào)道的是南京1例73歲女性感染札幌病毒而致腹瀉的檢測(cè)和治療。進(jìn)化樹結(jié)果顯示，該病毒株屬于GⅠ.2亞型札幌病毒，與國(guó)外的相關(guān)研究結(jié)果一致〔7〕，GⅠ.2亞型不僅可以感染兒童還可以感染成年人。該病毒所導(dǎo)致的胃腸炎似乎比輪狀病毒的癥狀較輕，但是在體質(zhì)較弱的老年人來說，應(yīng)該引起高度重視，今后是否出現(xiàn)該亞型札幌病毒的暴發(fā)事件有待進(jìn)一步的流行學(xué)和病原學(xué)的檢測(cè)。

1 李學(xué)軍,陳 茜,任建莎,等. 病毒性腹瀉的流行病學(xué)研究進(jìn)展〔J〕. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2013;40(12):2341-3.

2 吳 培,張 群,秦燕萍,等. 經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)成人感染性腹瀉的流行病學(xué)特點(diǎn)〔J〕. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011;21(18):3886-8.

3 吳 培,張 群,秦燕萍,等.成年人諾如病毒性腹瀉臨床特點(diǎn)及防控對(duì)策〔J〕.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2011;45(12):1124-5.

4 張洪英,祁 賢,華玲慧,等. 導(dǎo)致幼兒嘔吐的病原學(xué)檢測(cè)〔J〕. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2013;40(6):1128-30.

5 付建光,祁 賢,吳 斌,等. 病毒性胃腸炎的病原學(xué)檢測(cè)〔J〕. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2012;39(23):6288-9.

6 Wu FT,Oka T,Takeda N,etal. Acute gastroenteritis caused by GI/2 sapovirus,Taiwan,2007〔J〕. Emerg Infect Dis,2008;14(7):1169-71.

7 Svraka S,Vennema H,van der Veer B,etal. Epidemiology and genotype analysis of emerging sapovirus-associated infections across Europe〔J〕.J Clin Microbiol,2010;48(16):2191-8.

8 Hansman GS,Oka T,Katayama K,etal. Human sapoviruses:genetic diversity,recombination,and classification〔J〕. Rev Med Virol,2007;17(2):133-41.

9 方肇寅,謝華萍,呂紅霞,等. 1999-2005 年我國(guó)嬰幼兒人杯狀病毒腹瀉研究〔J〕. 病毒學(xué)報(bào),2007;23(1):9-15.

10 許 可,張雪峰,李 亮,等. 南京地區(qū)人感染杯狀病毒的病原學(xué)檢測(cè)〔J〕. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào),2008;24(10):937-40.

11 李曉樂,李丹地,程衛(wèi)霞,等. 南京地區(qū)嬰幼兒杯狀病毒感染的分子流行病學(xué)研究〔J〕. 中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2012;21(1):14-7.

12 林 謙,金 玉,周進(jìn)蘇,等. 2009至2010年南京兒童醫(yī)院5歲以下兒童病毒性腹瀉分子流行病學(xué)特點(diǎn)〔J〕.中國(guó)循證兒科雜志,2012;7(1):31-6.

13 羅 璇,金 玉,李宇寧,等. 蘭州地區(qū)5歲以下嬰幼兒病毒性腹瀉的分子流行病學(xué)研究〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2011;25(1):36-8.

14 陳冬梅,張 又,錢 淵,等. 北京地區(qū)嬰幼兒人類杯狀病毒感染狀況及型別分析〔J〕. 中華兒科雜志,2002;40(7):398-401.

〔2014-03-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

The aged with diarrhea infected with Sapporo virus in Nanjing

LI Wei，QI Xian，WU Pei,etal.

Nanjing Municipal Center of Disease Control and Prevention，Nanjing 210003，Jiangsu，China

Objective To analyze the cause of diarrhea in the elderly,and to provide data for the treatment of age-related diarrhea.Methods From January 2011 to June 2011 in a hospital in Nanjing,20 fecal samples were randomly collected from outpatients who were clinical diagnosis of viral diarrhea in the elderly. Norovirus,sapporo virus,rotavirus,intestinal adenovirus and astrovirus were detected by molecular biology and the detection results were compared with the clinical diagnosis and were used to guide medication and treatment.Results 13 samples were detected positive out of 20 random samples,of which 5 norovirus,4 sapporo virus,2 intestinal adenovirus,1 astrovirus,1 sapporo virus,and virus-positive rate as high as 65%.Conclusions Supportive therapy should be applied to the patient after pathogenic determination and the patient are recovered without using antibiotics. In addition,this is the first report that the Sapporo virus infection-induced diarrhea in the elderly in Nanjing.

Diarrhea；Sapporo virus；Rotavirus；Norovirus；Intestinal adenovirus； Astrovirus

國(guó)家科技支撐計(jì)劃(No.2011BAK21B00)；南京市科技發(fā)展重點(diǎn)項(xiàng)目(No.ZKX09033)

張洪英(1972-)，女，主任技師，博士，主要從事疾病預(yù)防控制研究。

李 偉(1984-)，男，碩士，主要從事疾病預(yù)防控制研究。

R512.5

A

1005-9202(2015)12-3359-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.080

1 江蘇省疾病預(yù)防控制中心

2 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院