胃腺癌術(shù)后組織中癌胚抗原相關(guān)黏附分子、基質(zhì)金屬蛋白酶-14表達(dá)特征及對血管生成的促進(jìn)作用

馬金華 王麗娟 馬金蘭 馬金祥

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科1病區(qū)，青海 西寧 810000)

胃腺癌術(shù)后組織中癌胚抗原相關(guān)黏附分子、基質(zhì)金屬蛋白酶-14表達(dá)特征及對血管生成的促進(jìn)作用

馬金華 王麗娟 馬金蘭1馬金祥2

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科1病區(qū)，青海 西寧 810000)

目的 檢測胃腺癌術(shù)后組織中癌胚抗原相關(guān)黏附分子(CEACAM)6和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-14的表達(dá)，探討其與血管內(nèi)皮標(biāo)志物白細(xì)胞分化抗原(CD)34陽性的微血管密度(MVD)的相關(guān)性。方法 以胃腺癌術(shù)后組織85例作為觀察組，選擇77例距腫物邊緣>3 cm的切端為正常的胃黏膜組織作為對照組，應(yīng)用免疫組化方法檢測CEACAM6、MMP-14和CD34的表達(dá)。結(jié)果 觀察組中CEACAM6、MMP-14的陽性率、MVD值均明顯高于對照組。觀察組中CEACAM6、MMP-14的陽性率、MVD值與最大徑線、壞死、脈管浸潤相關(guān)，MMP-14與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。線性相關(guān)分析顯示CEACAM6和MVD 、MMP-14和MVD呈正相關(guān)。結(jié)論 胃腺癌中CEACAM6、MMP-14陽性率及MVD值均增高，不僅可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，還可以在一定程度上判斷腫瘤的生物學(xué)行為。CEACAM6、MMP-14可能與胃腺癌的血管生成有一定作用。

胃腺癌；CEACAM6；MMP-14；微血管密度；血管生成

基因和蛋白表達(dá)失調(diào)是胃腺癌重要的促進(jìn)因素。近來學(xué)者關(guān)注胃腺癌間質(zhì)血管生成對腫瘤的促進(jìn)作用，并相繼發(fā)現(xiàn)對血管生成的相關(guān)影響因素〔1〕。癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子(CEACAM)6為免疫球蛋白超家族的重要成員，是非特異性的交叉抗原，在致癌因子的誘導(dǎo)下，CEACAM6的表達(dá)可以升高，引起腫瘤細(xì)胞增生和細(xì)胞增殖活性的提高〔2,3〕?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-14是MMPs家族的經(jīng)典成員，對細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用已得到學(xué)者的認(rèn)可，目前人們也發(fā)現(xiàn)其對血管生成有一定作用〔4〕。本實(shí)驗(yàn)關(guān)注胃腺癌中CEACAM6、MMP-14，表達(dá)與CD34陽性的微血管密度(MVD)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2013年12月我院確診為胃腺癌患者的臨床資料及術(shù)后蠟塊作為觀察組，共85例，其中男44例，女41例；年齡47～86歲，平均64.4歲。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療，均符合WHO中關(guān)于胃腺癌的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)醫(yī)師再次閱片證實(shí)。選擇77例距腫物邊緣>3 cm的切端正常胃黏膜組織(經(jīng)病理學(xué)醫(yī)師確診)作為對照組，其中男40例，女37例；年齡50～80歲，平均62.5歲。兩組一般資料無明顯差異。

1.2 CEACAM6、MMP-14和CD34的檢測方法 CEACAM6、MMP-14和CD34試劑均為0.1 ml的濃縮液。正式實(shí)驗(yàn)前依不同比例進(jìn)行稀釋并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最理想的配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。正式實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化SP法、DAB顯色。操作均由病理科同一主管技師完成，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定 CEACAM6、MMP-14的陽性部位是細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒認(rèn)定為陽性細(xì)胞。選擇腫瘤細(xì)胞密集的5個400倍視野，計數(shù)陽性率。以≥5%為陽性，<5%為陰性。CD34標(biāo)記腫瘤間質(zhì)的血管內(nèi)皮細(xì)胞，選擇連續(xù)的細(xì)胞叢或分支狀連續(xù)的內(nèi)皮細(xì)胞定為性血管，選取5個400倍視野，取平均值為MVD。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組中CEACAM6、MMP-14表達(dá)陽性率、MVD的比較 觀察組中CEACAM6和MMP-14表達(dá)陽性率、MVD均明顯高于對照組。見表1。

表1 兩組中CEACAM6、MMP-14陽性表達(dá)率、MVD的比較〔n(%)〕

2.2 觀察組中CEACAM6、MMP-14陽性率、MVD在不同臨床特征分組中的比較 觀察組中CEACAM6、MMP-14的陽性率、MVD值與最大徑線、壞死、脈管浸潤相關(guān)，MMP-14還與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。見表2。

表2 觀察組中CEACAM6、MMP-14表達(dá)陽性率、MVD在不同臨床特征分組中的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中CEACAM6、MMP-14陽性率、MVD相關(guān)性分析 CEACAM6和MVD(r=0.52,P=0.019 7)、MMP-14和MVD(r=0.49,P=0.040 8)呈正相關(guān)。

3 討 論

胃腺癌是惡性上皮性腫瘤，在生物學(xué)和遺傳學(xué)上具有多樣性，病因?qū)W上也存在多種因素，其特征是具有廣泛的形態(tài)學(xué)異質(zhì)性，表面為不同形式的結(jié)構(gòu)和生長方式、細(xì)胞分化和組織發(fā)生〔5,6〕。胃腺癌是富于血管的惡性腫瘤，在胃腺癌病變發(fā)展過程中間質(zhì)血管生成較多，當(dāng)腫瘤快速生長過程中，新生血管明顯，為腫瘤組織提供氧和營養(yǎng)物質(zhì)〔7〕。CD34是血管內(nèi)皮的重要標(biāo)記蛋白，其標(biāo)記血管的特異性強(qiáng)，可以常規(guī)應(yīng)用于腫瘤血管生成的研究中。CEACAM6相對分子量為90～95 kD，在腫瘤的表達(dá)失調(diào)后也可以引起細(xì)胞間黏附作用的下調(diào)，使腫瘤細(xì)胞易于脫離原發(fā)灶，進(jìn)入脈管，或經(jīng)過溶解的細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)移〔8,9〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為CEACAM6是原癌基因，主要通過結(jié)合相關(guān)蛋白，特征性地識別靶基因DNA序列中的E盒序列，并與其相結(jié)合，調(diào)節(jié)基因的激活，使轉(zhuǎn)錄功能增強(qiáng)〔10,11〕。CEACAM6促進(jìn)腫瘤血管生成的作用可能更趨于多元性〔12〕。CEACAM6被激活后，可促進(jìn)腫瘤內(nèi)及腫瘤周邊血管的新生，加速腫瘤的生長，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。褚潔等〔13〕在乳腺癌中檢測CEACAM6和MMP-2的表達(dá)，同時關(guān)注二者對血管生成的價值，發(fā)現(xiàn)二者均可以有效促進(jìn)CD34陽性的血管生成，并認(rèn)為CEACAM6和MMP-2可能還參與腫瘤相關(guān)蛋白的水解級聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。MMP-14在發(fā)揮作用時常激活其他成員，主要是活化細(xì)胞表面的MMP-2和MMP-9，MMP-14 還可以降解細(xì)胞外基質(zhì)的纖維支架〔14,15〕，有較強(qiáng)的溶纖維蛋白活性，參與內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、血管內(nèi)皮的增殖及纖維蛋白的侵襲過程〔16,17〕。

本實(shí)驗(yàn)提示CEACAM6、MMP-14是促進(jìn)腫瘤發(fā)生的重要因素，也提示腫瘤中存在著較多的血管生成。CEACAM6、MMP-14參與腫瘤的生長、腫瘤性凋亡和壞死、脈管浸潤的過程中，也提示CEACAM6、MMP-14參與腫瘤的進(jìn)展。壞死是惡性腫瘤的特征，也是致瘤因素對局部組織破壞的直接體現(xiàn)，CEACAM6、MMP-14的增高使腫瘤細(xì)胞對局部破壞能力增強(qiáng)，器官結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯變化。MMP-14是腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要誘導(dǎo)因素。CEACAM6、MMP-14高表達(dá)參與腫瘤間質(zhì)的血管新生。CEACAM6和MMP-14均可以促進(jìn)CD34陽性的MVD高表達(dá)，此時血管生成活躍，管腔形成增多，局部組織血液供應(yīng)量更多，腫瘤的失控性增生明顯，異常增殖加速，同時也為腫瘤細(xì)胞無限制生長提供了重要營養(yǎng)基礎(chǔ)。CEACAM6和MMP-14也可以促進(jìn)血管生成相關(guān)因子分泌，如促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)，使促進(jìn)腫瘤發(fā)生的相關(guān)基因活化，此時血管內(nèi)皮增殖明顯〔18,19〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為腫瘤的血管生成活躍時，可以在腫瘤血管周圍由固有血管形成出芽性改變，形成新生血管〔20〕，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。

綜上，胃腺癌中CEACAM6、MMP-14陽性率及MVD值均增高，不僅可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，還可以在一定程度上判斷腫瘤的生物學(xué)行為。CEACAM6、MMP-14可能與胃腺癌血管生成有一定作用。

1 劉愛東,宋旭東,張宏偉,等.胃腺癌中PTEN、VEGF的表達(dá)和Ki67增殖指數(shù)關(guān)系的研究〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014;23(24):2644-6.

2 Farina A,Dumonceau JM,Antinori P,etal.Bile carcinoembryonic cell adhesion molecule 6(CEAM6)as a biomarker of malignant biliary stenoses〔J〕.Biochim Biophys Acta,2014;1844(5):1018-25.

3 Zhao ZS,Li L,Wang HJ,etal.Expression and prognostic significance of CEACAM6,ITGB1,and CYR61 in peripheral blood of patients with gastric cancer〔J〕.J Surg Oncol,2011;104(5):525-9.

4 Radziwon-Balicka A,Ramer C,Moncada de la Rosa C,etal.Angiostatin inhibits endothelial MMP-2 and MMP-14 expression:a hypoxia specific mechanism of action〔J〕.Vasc Pharmacol,2013;58(4):280-91.

5 李澤鋒.S100A4和CEACAM6在胃腺癌中的表達(dá)及對血管生成的作用〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2013;33(21):5301-2.

6 劉愛東,宋旭東,李 雙,等.胃腺癌中nm23、P53的表達(dá)與Ki67增殖指數(shù)關(guān)系的研究〔J〕.西南國防醫(yī)藥,2014;24(11):1186-8.

7 張運(yùn)強(qiáng),李建芳,計 俊,等.胃癌癌胚抗原相關(guān)粘附分子6表達(dá)上調(diào)并促進(jìn)其遷移和侵襲〔J〕.外科理論與實(shí)踐,2013;18(1):37-9.

8 Duxbury MS,Matros E,Clancy T,etal.CEACAM6 is a novel biomarker in pancreatic adenocarcinoma and PanIN lesions〔J〕.Ann Surg,2005;241(3):491-6.

9 Keenan JI,Hooper EM,Tyrer PC,etal.Influences of enteral nutrition upon CEACAM6 expression by intestinal epithelial cells〔J〕.Innate Immun,2014;20(8):848-56.

10 Zhang Y,Zang M,Li J,etal.CEACAM6 promotes tumor migration,invasion,and metastasis in gastric cancer〔J〕.Acta Biochim Biophys Sin,2014;46(4):283-90.

11 Zang M,Zhang B,Zhang Y,etal.CEACAM6 promotes gastric cancer invasion and metastasis by inducing epithelial-mesenchymal transition via PI3K/AKT signaling pathway〔J〕.PLoS One,2014;9(11):e112908.

12 Chen J,Li Q,An Y,etal.CEACAM6 induces epithelial-mesenchymal transition and mediates invasion and metastasis in pancreatic cancer〔J〕.Int J Oncol,2013;43(3):877-85.

13 褚 潔,王 欣.乳腺癌組織中MMP-2和CEACAM6對血管生成作用的研究〔J〕.臨床軍醫(yī)雜志,2014;42(5):529-30.

14 周 良,馬 海,楊紅春.結(jié)腸腺癌中MMP-14和VEGF的表達(dá)及意義〔J〕.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2011;17(4):465-6.

15 涂燕君,陳 軍,劉昌盛,等.侵襲性垂體腺瘤MRI表達(dá)與MMP-9、MMP-14、VEGF表達(dá)的相關(guān)性研究〔J〕.武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2010;31(5):671-5.

16 Roebuck MM,Helliwell TR,Chaudhry IH,etal.Matrix metalloproteinase expression is related to angiogenesis and histologic grade in spindle cell soft tissue neoplasms of the extremities〔J〕.Am J Clin Pathol,2005;123(3):405-14.

17 Munkert A,Helmchen U,Kemper MJ,etal.Characterization of the transcriptional regulation of the human MT1-MMP gene and association of risk reduction for focal-segmental glomerulosclerosis with two functional promoter SNPs〔J〕.Nephrol Dial Transplant,2009;24(3):735-42.

18 Ganguly K,Sharma AV,Reiter RJ,etal.Melatonin promotes angiogenesis during protection and healing of indomethacin-induced gastric ulcer:role of matrix metaloproteinase-2〔J〕.J Pineal Res,2010;49(2):130-40.

19 Rullman E,Rundqvist H,Wagsater D,etal.A single bout of exercise activates matrix metalloproteinase in human skeletal muscle〔J〕.J Appl Physiol,2007;102(6):2346-51.

20 賈長河,王文玉,任 穎,等.重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液佐治晚期胃癌的療效及對血清中血管內(nèi)皮生長因子、S100A4和癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子的影響〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(1):208-9.

〔2013-11-17修回〕

(編輯 苑云杰)

馬金華(1973-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科疾病研究。

R73

A

1005-9202(2015)12-3318-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.060

1 青海大學(xué)附屬醫(yī)院腎病內(nèi)科 2 青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院外科總論教研室