• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    苯系物對仿刺參catalase基因表達及酶活性的影響

    2015-06-05 09:51:44高士博王擺董穎高杉蔣經(jīng)偉孫紅娟殷旭旺周遵春
    生態(tài)毒理學(xué)報 2015年2期
    關(guān)鍵詞:苯系系物刺參

    高士博,王擺,董穎,高杉,蔣經(jīng)偉,孫紅娟,殷旭旺,周遵春,*

    1. 大連海洋大學(xué),大連 116023 2. 遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院,大連 116023

    苯系物對仿刺參catalase基因表達及酶活性的影響

    高士博1,2,王擺2,#,董穎2,高杉2,蔣經(jīng)偉2,孫紅娟2,殷旭旺1,周遵春2,*

    1. 大連海洋大學(xué),大連 116023 2. 遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院,大連 116023

    以仿刺參(Apostichopus japonicus)為受試生物,采用半靜水式試驗方法,設(shè)置3種不同濃度(1/5、1/25、1/125的96 h-LC50)的苯、甲苯、乙基苯、鄰-二甲苯、間-二甲苯和對-二甲苯處理健康仿刺參,檢測仿刺參過氧化氫酶(CAT)基因在呼吸樹、腸組織中的表達和酶活性變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):在各苯系物處理組的仿刺參呼吸樹和腸組織中,cat基因的轉(zhuǎn)錄表達變化顯著;苯、甲苯、乙基苯、鄰-二甲苯對呼吸樹中CAT活性具有誘導(dǎo)作用,其中乙基苯的誘導(dǎo)倍數(shù)最高,為12.0~19.8倍;6種苯系物對腸組織中CAT活性具有抑制作用,抑制程度大小順序為:鄰-二甲苯>乙基苯>對-二甲苯>甲苯>間-二甲苯>苯。表明苯系物對仿刺參呼吸樹、腸具有氧化脅迫作用,可能造成2種組織的氧化損傷。相關(guān)性分析表明:苯系物處理后,仿刺參腸組織中cat mRNA相對表達倍數(shù)與CAT活性變化呈顯著正相關(guān);仿刺參腸和呼吸樹中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化呈顯著正相關(guān)。以上結(jié)果為苯系物對仿刺參的生物毒性評價提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    苯系物(BTEX);仿刺參;氧化損傷;過氧化氫酶(CAT);呼吸樹;腸

    苯系物(BTEX)中的苯(Benzene)是已知的致癌物,甲苯(Toluene)和乙基苯(Ethyl benzene)具有致畸致突變作用,二甲苯(Xylene)具有致畸作用[1]。苯系物作為全球生產(chǎn)和使用最為廣泛的50種化合物之一,由于海上石油開發(fā)、石油運輸,海洋溢油及沿海石油化工企業(yè)的迅猛發(fā)展,造成苯系物入海量增加,具有較高生物毒性的苯系物引發(fā)的近岸海洋生態(tài)危害日益引起社會和學(xué)者廣泛關(guān)注。苯系物是石油中水溶性單環(huán)芳烴的重要組分[2-3],據(jù)報道,巴西福塔拉薩沿岸表層海水6種苯系物的平均含量為4.86 μg·L-1[4]。浙江舟山潮間帶沉積物中二甲苯含量曾經(jīng)高達40.24~124.45 mg·kg-1,造成近岸海洋底棲環(huán)境苯系物污染[5]。因此,研究近岸海洋環(huán)境中苯系物對海洋底棲生物的影響十分必要。仿刺參(Apostichopus japonicus)是黃、渤海重要底棲生物類群,主要攝食底泥中細菌、底棲硅藻和有機質(zhì)碎屑[6-7],作為我國重要海水增養(yǎng)殖品種之一,其生物學(xué)數(shù)據(jù)基本完備、并且取材方便,是海洋底棲環(huán)境污染物生物毒性評價的理想受試生物。

    生物體應(yīng)對污染物脅迫造成生物體內(nèi)超氧自由基(·O2·-)產(chǎn)生速率上升和H2O2含量增加而導(dǎo)致的氧化脅迫或氧化損傷主要表現(xiàn)為抗氧化酶對活性氧的清除能力[8-9]。生物體內(nèi)存在多種抗氧化酶系統(tǒng),其中,過氧化氫酶(Catalase, CAT)是一種重要的抗氧化酶,能將生物體內(nèi)H2O2轉(zhuǎn)化為H2O和O2,通過清除過量的H2O2保護組織細胞免遭生物體病變和環(huán)境脅迫造成的氧化損傷[10-12],可作為指示污染物脅迫的重要生理生化指標[13-14]。前期研究發(fā)現(xiàn)苯系物導(dǎo)致仿刺參體內(nèi)脂質(zhì)過氧化損傷[15]。仿刺參的過氧化氫酶基因(cat)編碼500個氨基酸,蛋白分子量56.56 kDa,屬于單功能酶,在仿刺參抗氧化和免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用,其表達存在組織差異,在腸中表達量最高,呼吸樹次之,體壁中表達量最低[16]。因此,本文選擇仿刺參為受試生物,研究6種苯系物對仿刺參呼吸樹、腸組織中cat基因表達及酶活性的影響,為開展苯系物對海洋底棲生物毒性評價提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法(Materials and methods)

    1.1 儀器與試劑

    儀器:Mx3005pTM實時熒光定量PCR儀(美國Stratagene),NanoPhotometer微量核酸蛋白分析儀(德國Implen),多功能酶標儀(瑞士Tecan),CT15RE型臺式微量高速離心機(日本Hitachi)。

    藥品和試劑:組織RNA常溫保存液(TaKaRa),Trizol試劑(TaKaRa),PrimeScriptTMRT reagent Kit (TaKaRa),SYBR PrimeScriptTMRT-PCR Kit II (TaKaRa),過氧化氫酶(CAT)測試盒(南京建成),苯、甲苯、乙基苯、鄰-二甲苯、間-二甲苯、對-二甲苯和二甲基亞砜(DMSO)均為分析純(中國國藥有限公司)。

    1.2 仿刺參的處理及取樣

    仿刺參(A. japonicus)為遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院引育種中心培育的幼參,體重(10±2) g,馴養(yǎng)1周后,選取健康幼參用于試驗。

    6種苯系物的處理濃度設(shè)置為1/5、1/25和1/125的96 h-LC50(見表1),分別對應(yīng)苯(B1、B2、B3)、甲苯(T1、T2、T3)、乙基苯(E1、E2、E3)、鄰-二甲苯(O1、O2、O3)、間-二甲苯(M1、M2、M3)、對-二甲苯(P1、P2、P3)處理組,同時設(shè)置空白對照組(C),各處理組設(shè)置3個平行。配置1 000倍母液,在玻璃缸中配制15 L實驗溶液,每個缸中加5~6只幼參,試驗條件:水溫15 ℃,鹽度30,pH 8.0,間斷性充氧,確保溶解氧大于4.5 mg·L-1,避光。根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,取各處理組12 h的仿刺參3只,于冰上取仿刺參呼吸樹、腸組織樣品,RNA樣品放于RNA保存液(TaKaRa),4 ℃過夜,-20 ℃保存?zhèn)溆?,蛋白樣品放?.1 mol·L-1PBS緩沖液,-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    表1 6種苯系物濃度設(shè)置(mg·L-1)Table 1 Concentration gradients of six BTEXs experimental treatments (mg·L-1)

    Trizol法分別提取仿刺參呼吸樹、腸組織的總RNA,電泳檢測RNA的完整性,微量核酸蛋白分析儀檢測RNA的純度和濃度。

    1.3 實時定量PCR

    仿刺參呼吸樹、腸組織中cat mRNA實時定量PCR參照高杉等實驗方法[16-17]。分別取各處理組和空白對照組呼吸樹、腸組織900 ng總RNA用PrimeScriptTMRT reagent Kit (TaKaRa)進行反轉(zhuǎn)錄。使用Mx3005pTM實時熒光定量PCR儀,采用SYBR PrimeScriptTMRT-PCR Kit II進行實時定量PCR。

    cat基因的引物序列:

    cat-F:5’-GTGAAGTTCTACACAGAGGATGGCA-3’;

    cat-R:5’-CTTCT GGGTGTGGATGAAACTGG-3’。

    內(nèi)參基因Cytb的引物序列:

    Cytb-F:5’-TGAGCCGCAAC AGTAATC-3’;

    Cytb-R:5’-AAGGGAAAAGGAAGTGAAAG-3’。

    反應(yīng)條件:95 ℃,30 s;95 ℃,10 s,55 ℃,25 s,72 ℃,25 s,40個循環(huán)。采用384 v.2 (REST) 軟件計算仿刺參呼吸樹、腸組織中cat mRNA相對表達倍數(shù)[17]。

    1.4 仿刺參呼吸樹、腸CAT活性測定

    仿刺參呼吸樹、腸組織CAT活性測定采用南京建成生物研究所的CAT測試盒測定。

    CAT (U·mg-1prot)活性定義為:每毫克組織蛋白酶分解1 μmol的H2O2的量為一個活性單位(U)。

    1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    采用SPSS 17.0 軟件,在P=0.05的置信水平對cat mRNA相對表達倍數(shù)變化和CAT活性變化情況進行ANOVA分析,并用Origin 7.5軟件作圖(在以下柱形圖中,*,**分別表示:與對照相比,P<0.05,P<0.01)。SPSS 17.0 軟件對仿刺參呼吸樹、腸組織中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化與CAT活性進行相關(guān)性分析(表中*表示相關(guān)性顯著,P<0.05)。

    圖1 苯系物對仿刺參呼吸樹cat mRNA相對表達倍數(shù)變化的影響Fig. 1 The effects of BTEXs on the relative fold changes of cat mRNA in A. japonicus respiratory tree

    2 結(jié)果(Results)

    2.1 苯系物對仿刺參呼吸樹cat mRNA相對表達倍數(shù)變化及CAT活性的影響

    6種苯系物對仿刺參呼吸樹cat mRNA相對表達倍數(shù)變化的影響見圖1。各濃度苯系物處理組的呼吸樹cat mRNA表達倍數(shù)變化顯著。苯、對-二甲苯處理組的呼吸樹cat mRNA表達顯著下調(diào),呈顯著劑量-效應(yīng)關(guān)系,其中,高濃度苯處理組的下調(diào)倍數(shù)為35.7倍;而甲苯、乙基苯、鄰-二甲苯、間-二甲苯與呼吸樹cat mRNA表達倍數(shù)變化呈現(xiàn)非單調(diào)性劑量—效應(yīng)關(guān)系。其中,高濃度鄰-二甲苯處理組的呼吸樹cat mRNA表達顯著上調(diào),上調(diào)倍數(shù)為1.3倍,中、低濃度的極顯著下調(diào),下調(diào)倍數(shù)分別為6.5、29.4倍;與之相反,高濃度甲苯、乙基苯、間-二甲苯處理組的呼吸樹cat mRNA表達顯著下調(diào),下調(diào)倍數(shù)分別為1.1、1.7、4.1倍,中、低濃度處理組的極顯著上調(diào),中濃度甲苯處理組的上調(diào)倍數(shù)為6.2倍。

    6種苯系物對仿刺參呼吸樹CAT活性的影響結(jié)果見圖2。與對照相比,苯系物對仿刺參呼吸樹CAT活性主要表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用。各濃度苯、甲苯和乙基苯處理組呼吸樹CAT活性顯著上升,隨著處理濃度升高,CAT活性增強,呈顯著劑量-效應(yīng)關(guān)系,其中乙基苯的誘導(dǎo)倍數(shù)最高,為12.0~19.8倍。

    2.2 苯系物對仿刺參腸cat mRNA相對表達倍數(shù)變化及CAT活性的影響

    6種苯系物對仿刺參腸cat mRNA相對表達倍數(shù)變化的影響結(jié)果見圖3。各濃度苯系物處理組的腸cat mRNA表達倍數(shù)變化顯著,均表現(xiàn)為非單調(diào)性的劑量-效應(yīng)關(guān)系。高濃度苯和對-二甲苯處理組的腸cat mRNA表達極顯著上調(diào),上調(diào)倍數(shù)分別為9.8倍和11.4倍,中、低濃度苯和對-二甲苯處理組腸cat mRNA表達極顯著下調(diào);各濃度甲苯處理組腸catmRNA表達極顯著上調(diào),上調(diào)倍數(shù)在1.9~18.8倍之間;高、中濃度乙基苯處理組腸cat mRNA表達顯著下調(diào),低濃度乙基苯處理組的極顯著上調(diào),上調(diào)倍數(shù)為31.3倍;各濃度鄰-二甲苯處理組腸cat mRNA表達極顯著下調(diào),下調(diào)倍數(shù)在6.4~52.6倍之間;高濃度間-二甲苯處理組腸cat mRNA表達極顯著下調(diào),下調(diào)倍數(shù)為1.7倍,中濃度處理組的極顯著上調(diào),上調(diào)倍數(shù)為2.0倍。

    6種苯系物對仿刺參腸CAT活性的影響結(jié)果見圖4。苯系物對仿刺參腸CAT活性具有抑制作用。與對照組相比,高濃度乙基苯處理組腸CAT活性下降了75.21%;各濃度鄰-二甲苯和對-二甲苯處理組腸CAT活性顯著下降,鄰-二甲苯對腸CAT活性抑制率為48.75%~70.17%;對-二甲苯對腸CAT活性抑制率為35.31%~67.11%。6種苯系物對腸CAT活性抑制程度順序為:鄰-二甲苯>乙基苯>對-二甲苯>甲苯>間-二甲苯>苯。

    圖2 苯系物對仿刺參呼吸樹CAT活性的影響Fig. 2 The effects of BTEXs on the CAT activities of A. japonicus respiratory tree

    圖4 苯系物對仿刺參腸CAT活性的影響Fig. 4 The effects of BTEXs on the CAT activities of A. japonicus intestine

    2.3 仿刺參腸、呼吸樹cat mRNA相對表達倍數(shù)變化與CAT活性相關(guān)性分析

    6種苯系物處理后,仿刺參腸、呼吸樹cat mRNA相對表達倍數(shù)變化與CAT活性的相關(guān)性見表2。苯系物處理后,仿刺參腸組織中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化與CAT活性變化呈顯著正相關(guān);仿刺參腸和呼吸樹中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化呈顯著正相關(guān);而呼吸樹中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化與CAT活性變化,腸組織中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化與呼吸樹CAT活性變化之間均無顯著相關(guān)性。

    3 討論(Discussion)

    污染物脅迫可促使機體細胞的酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)反應(yīng),通過還原產(chǎn)生活性氧和氧自由基,造成生物體內(nèi)活性氧含量增加,打破生物體內(nèi)活性氧代謝平衡,如不及時清除會導(dǎo)致氧化損傷[18]。生物體內(nèi)存在2種活性氧清除機制,即酶清除系統(tǒng)和非酶清除系統(tǒng)[8]。CAT是酶清除系統(tǒng)的重要組分,能將細胞內(nèi)H2O2催化分解為H2O和O2,避免細胞、組織遭受氧化損傷。目前,污染物對生物CAT活性及其基因表達的影響研究主要集中于重金屬、持久性有機污染物[8-9, 19-21],而有關(guān)苯系物對海洋生物CAT活性及其基因表達的影響尚未見報道。本研究中,經(jīng)過6種苯系物處理后,仿刺參呼吸樹、腸組織中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化呈不同程度的上調(diào)或下調(diào);與對照組相比,6種苯系物對呼吸樹CAT活性主要表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用,對腸CAT活性表現(xiàn)為抑制作用,表明苯系物造成仿刺參呼吸樹和腸組織的氧化脅迫。這與前期相關(guān)研究結(jié)論相似,6種苯系物處理導(dǎo)致仿刺參體腔液中丙二醛含量顯著變化,引起仿刺參體內(nèi)脂質(zhì)過氧化損傷[15]。陳蕓燕等[22〗研究發(fā)現(xiàn),2.30 mg·L-1亞硝酸氮可以誘導(dǎo)仿刺參體壁CAT活性增加,11.50和57.50 mg·L-1亞硝酸氮顯著抑制體壁CAT活性,表現(xiàn)為非單調(diào)性劑量-效應(yīng)關(guān)系。氨氮脅迫可導(dǎo)致仿刺參氧化損傷,降低其免疫力,增加細菌的易感性[23]。本文實驗結(jié)果表明,6種苯系物處理造成仿刺參體內(nèi)呼吸樹、腸2種組織的氧化脅迫和氧化損傷。

    表2 仿刺參腸、呼吸樹cat mRNA相對表達倍數(shù)變化與CAT活性的相關(guān)性Table 2 Correlation between relative fold changes of cat mRNA and CAT activity in A. japonicus respiratory tree and intestine

    在仿刺參不同組織中,cat基因在腸組織中表達量最高,呼吸樹次之[16]。而呼吸樹CAT活性卻高于腸的[24]。苯系物處理后,腸中cat mRNA相對表達倍數(shù)變化程度略大于呼吸樹中的,苯系物對呼吸樹CAT活性影響表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用,對腸CAT活性影響表現(xiàn)為抑制作用。仿刺參腸管壁由粘膜層、粘膜下層、肌層和外膜組成,富含蛋白酶、脂酶、非特異性脂酶和堿性磷酸酶[25],主要消化攝食的底泥、硅藻、微生物和有機碎屑;呼吸樹由泄殖腔壁分出的兩支樹枝狀分管,由體腔上皮、肌肉血腔和內(nèi)皮層組成,通過泄殖腔泵水、排水進行體內(nèi)外的氣體交換[26-27]。苯系物對仿刺參cat mRNA相對表達量和CAT活性影響的組織差異可能與苯系物進入仿刺參暴露途徑以及呼吸樹、腸的生物學(xué)結(jié)構(gòu)和功能有關(guān)。

    苯系物處理后,仿刺參呼吸樹cat mRNA相對表達倍數(shù)變化和CAT活性呈現(xiàn)不同的變化趨勢;腸的cat mRNA相對表達倍數(shù)變化和CAT活性呈相似的變化趨勢。CAT的抗氧化能力是在其基因轉(zhuǎn)錄成mRNA,再表達合成蛋白質(zhì),并形成一定的空間結(jié)構(gòu)后才能發(fā)揮作用[8]。Gon?alves-Soares等[28]研究發(fā)現(xiàn),100 μg·kg-1微囊藻(Microcystis aeruginosa)毒素導(dǎo)致凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)CAT活性顯著上升,為空白對照組的1.5倍,而cat基因表達卻顯著下調(diào),為對空白照組的0.26倍。Li等[29]研究發(fā)現(xiàn)3~24 mg·kg-1呋喃西林暴露,導(dǎo)致海洋纖毛蟲—扇形游仆蟲(Euplotes vannus) 的CAT活性與cat基因轉(zhuǎn)錄水平呈現(xiàn)不同動態(tài)變化趨勢。污染物脅迫后cat轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平不同變化趨勢,可能與污染物脅迫導(dǎo)致cat基因翻譯后蛋白的氧化修飾有關(guān),氧化的CAT蛋白可能是特異的過氧化物氧化蛋白酶的攻擊目標[30]。通過比較發(fā)現(xiàn)仿刺參2種組織cat基因轉(zhuǎn)錄水平對苯系物處理的響應(yīng)比CAT活性水平的更為敏感。這與Li等[29]研究結(jié)論相似,呋喃西林脅迫后,扇形游仆蟲cat基因轉(zhuǎn)錄水平比CAT活性水平更敏感。Trasvia-Arenas等[31]研究發(fā)現(xiàn),缺氧脅迫和再充氧條件下凡納濱對蝦鰓組織中cat基因轉(zhuǎn)錄水平比CAT活性變化更為敏感。

    不同苯系物處理后,仿刺參呼吸樹和腸組織中cat mRNA相對表達倍數(shù)和CAT活性變化,表現(xiàn)為不同類型的劑量-效應(yīng)關(guān)系,即單調(diào)的正相關(guān)性或負相關(guān)性,及非單調(diào)的相關(guān)性。瞿建宏等[21]研究發(fā)現(xiàn)羅非魚肝臟組織CAT活性與苯酚暴露濃度之間存在劑量-效應(yīng)正相關(guān)性,而肌肉組織CAT活性與苯酚之間表現(xiàn)為非單調(diào)的劑量-效應(yīng)關(guān)系。陳蕓燕等[22]研究報道亞硝酸氮暴露與仿刺參體壁CAT活性表現(xiàn)為非單調(diào)性劑量-效應(yīng)關(guān)系。Li等[29]研究發(fā)現(xiàn)呋喃西林暴露與扇形游仆蟲的CAT活性呈非單調(diào)性劑量效應(yīng)關(guān)系,而與cat mRNA相對表達量呈劑量效應(yīng)正相關(guān)性。有關(guān)污染物脅迫后,海洋無脊椎動物cat基因轉(zhuǎn)錄和CAT活性動態(tài)變化趨勢的分子機制尚有待于深入研究和探討。

    苯、甲苯、乙基苯和二甲苯屬于非極性麻醉型化合物,其毒性可以用辛醇—水分配系數(shù)(log Kow)確定[32-34]。苯系物對仿刺參急性致死作用表現(xiàn)為二甲苯>乙基苯>甲苯>苯,與苯系物log Kow值呈顯著的相關(guān)性。前期研究發(fā)現(xiàn),6種苯系物對球等鞭金藻(Isochrysis galbana)和新月菱形藻(Nitzschia closterium)生長抑制作用與其log Kow值有較好的相關(guān)性[35]。范亞維等[33]和周啟星等[34]研究發(fā)現(xiàn),甲苯、乙基苯和二甲苯對斑馬魚(Brachydanio rerio)、大型溞(Daphnia magna)和霍甫水絲蚓(Limnodrilus hoffmeisteri)急性致死作用與3種苯系物log Kow值呈顯著的相關(guān)性。而6種苯系物log Kow值與仿刺參2種組織cat基因轉(zhuǎn)錄、CAT活性之間不存在顯著的相關(guān)性。在亞致死濃度下,苯系物對仿刺參的氧化脅迫作用可能是導(dǎo)致仿刺參死亡的因素之一。

    [1] 李學(xué)峰, 周啟星. BTEX的環(huán)境質(zhì)量標準研究進展[J]. 生態(tài)學(xué)雜志, 2011, 30(2): 369-375

    Li X F, Zhou Q X. Environmental quality standard of BTEX: A review [J]. Chinese Journal of Ecology, 2011, 30(2): 369-375 (in Chinese)

    [2] Mazzeo D E C, Fernandes T C C, Marin-Morales M A. Cellular damages in the Allium cepa test system, caused by BTEX mixture prior and after biodegradation process [J]. Chemosphere, 2011, 85(1): 13-18

    [3] 白紅妍, 韓彬, 陳軍輝, 等. 靜態(tài)頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法快速測定海水中13種苯系物[J]. 色譜, 2012, 30(5): 474-479

    Bai H Y, Han B, Chen J H, et al. Rapid determination of benzene series in seawater by gas chromatography- mass spectrometry with static headspace extraction [J]. Chinese Journal of Chromatography, 2012, 30(5): 474-479 (in Chinese)

    [4] Cavalcante R M, de Andrade M V F, Marins R V, et al. Development of a headspace-gas chromatography (HS-GC-PID-FID) method for the determination of VOCs in environmental aqueous matrices: Optimization, verification and elimination of matrix effect and VOC distribution on the Fortaleza Coast, Brazil [J]. Microchemical Journal, 2010, 96(2): 337-343

    [5] 朱四喜, 周唯, 楊紅麗, 等. 浙江舟山潮間帶沉積物中二甲苯的檢測[J]. 廣東化工, 2010, 37(2): 125-127

    Zhu S X, Zhou W, Yang L H, et al. Determination of xylene in interdial sediments in Zhoushan, Zhejiang Province [J]. Guangdong Chemical Industry, 2010, 37(2): 125-127 (in Chinese)

    [6] 張寶琳, 孫道元, 吳耀泉. 靈山島淺海巖礁區(qū)刺參(Apostichopus japonicus)食性初步分析[J]. 海洋科學(xué), 1995, 3: 11-13

    Zhang B L, Sun D Y, Wu Y Q, et al. Preliminary analysis on the feeding habit of Apostichopus japonicus in the Rocky Coast Water off Lingshan Island [J]. Marine Science, 1995, 3: 11-13 (in Chinese)

    [7] 劉曉威, 姜森顥, 周一兵, 等. 大連地區(qū)仿刺參養(yǎng)殖池塘底棲硅藻生產(chǎn)狀況的周年變化研究[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2013, 31(11): 679-682

    Liu X W, Jiang S H, Zhou Y B, et al. Annual changes in production of benthic diatoms in sea cucumber Apostichopus japonicus culture ponds in Dalian [J]. Fiheries Science, 2013, 31(11): 679-682 (in Chinese)

    [8] 趙士誠, 孫靜文, 馬有志, 等. 鎘對玉米幼苗活性氧代謝, 超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性及其基因表達的影響[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 41(10): 3025-3032

    Zhao S C, Sun J W, Ma Y Z, et al. Effects of cadmium on reactive oxygen species metabolism, activities and gene expressions of superoxide dismutase and catalase in maize (Zea Mays) seedling [J]. Scientia Agricultura Sinica, 2008, 41(10): 3025-3032 (in Chinese)

    [9] 羅立新, 孫鐵珩, 靳月華. 鎘脅迫下小麥葉中超氧陰離子自由基的積累[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 1998, 18(5): 495-499

    Luo L X, Sun T H, Jin Y H. Accumulation of superoxide radical in wheat leaves under cadmium stress [J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 1998, 18(5): 495-499 (in Chinese)

    [10] Ho Y S, Xiong Y, Ma W, et al. Mice lacking catalase develop normally but show difntial sensitivity to oxidant tissue injury [J]. The Journal of Biological Chemistry, 2004, 279: 32804-32812

    [11] Bai J, Rodriguez A M, Melendez J A, et al. Overexpression of catalase in cytosolic or mitochondrial compartment protects HepG2 cells against oxidative injury [J]. Journal of Biological Chemistry, 1999, 274(37): 26217-26224

    [12] Bai J, Cederbaum A I. Catalase protects HepG2 cells from apoptosis induced by DNA-damaging agents by accelerating the degradation of p53 [J]. Journal of Biological Chemistry, 2003, 278(7): 4660-4667

    [13] Roma L P, Bosqueiro J R, Cunha D A, et al. Protection of insulin-producing cells against toxicity of dexamethasone by catalase overexpression [J]. Free Radical Biology and Medicine, 2009, 47(10): 1386-1393

    [14] Chi Z, Liu R, Zhang H. Potential enzyme toxicity of oxytetracycline to catalase [J]. Science of the Total Environment, 2010, 408(22): 5399-5404

    [15] 姜北, 劉薇, 周遵春, 等. 苯系物對仿刺參體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2014, 33(1): 15-21

    Jiang B, Liu W, Zhou Z Z, et al. Effects of benzene, toluene, ethyl benzene, and xylene (BTEX) on lipid peroxidation in sea cucumber Apostichopus japonicus [J]. Fiheries Science, 2014, 33(1): 15-21 (in Chinese)

    [16] 高杉, 周遵春, 董穎, 等. 仿刺參過氧化氫酶基因全長 cDNA 的克隆及表達分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報, 2014, 16(2): 127-134

    Gao S, Zhou Z Z, Dong Y, et al. Full-length cDNA cloning and expression analysis of catalase gene from sea cucumber (Apostichopus japonicus) [J]. Journal of Agricultural Science and Technology, 2014, 16(2): 127-134 (in Chinese)

    [17] Sun H, Zhou Z, Dong Y, et al. Identification and expression analysis of two Toll-like receptor genes from sea cucumber (Apostichopus japonicus) [J]. Fish & Shellfish Immunology, 2013, 34(1): 147-158

    [18] Winston G W, Di Giulio R T. Prooxidant and antioxidant mechanisms in aquatic organisms [J]. Aquatic Toxicology, 1991, 19(2): 137-161

    [19] 趙元鳳, 呂景才. 鎘污染對鰱魚超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性的影響[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報, 2002, 10(3): 267-271

    Zhao Y F, Lv J C. Effect of cadmium on activities of superoxide dismutase and catalase in Aristchthys nobilis [J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2002, 10(3): 267-271 (in Chinese)

    [20] Romero-Puertas M C, Corpas F J, Rodríguez-Serrano M, et al. Differential expression and regulation of antioxidative enzymes by cadmium in pea plants [J]. Journal of Plant Physiology, 2007, 164(10): 1346-1357

    [21] 瞿建宏, 陳家長, 胡庚東, 等. 苯酚脅迫下羅非魚組織中過氧化氫酶與谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶的動態(tài)變化[J]. 生態(tài)環(huán)境, 2006, 15(4): 687-692

    Qu J H, Chen J C, Hu G Q, et al. Dynamic changes of catalase and glutathione-S-transferase in the different tissues of tilapia exposed to phenol [J]. Ecology and Environment, 2006, 15(4): 687-692 (in Chinese)

    [22] 陳蕓燕, 田相利, 于曉, 等. 亞硝酸氮脅迫對刺參體壁非特異性免疫能力及 HSP70 表達的影響[J]. 中國海洋大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2013, 43(11): 35-42

    Chen Y Y, Tian X L, Yu X, et al. Effect of nitrite stress on non-specific immune response and HSP70 expression of sea cucumber Apostichopus japonicus [J]. Periodical of Ocean University of China, 2013, 43(11): 35-42 (in Chinese)

    [23] 劉洪展, 鄭風榮, 孫修勤, 等. 氨氮脅迫對刺參幾種免疫酶活性的影響[J]. 海洋科學(xué), 2012, 36(8): 47-52

    Liu H Z, Zhen F R, Sun X Q, et al. Effect of exposure to ammonia nitrogen stress on immune enzyme of holothurian Apostichopus japonicus [J]. Marine Science, 2012, 36(8): 47-52 (in Chinese)

    [24] Zang Y, Tian X, Dong S, et al. Growth, metabolism and immune responses to evisceration and the regeneration of viscera in sea cucumber, Apostichopus japonicus [J]. Aquaculture, 2012, 358: 50-60

    [25] 崔龍波, 董志寧. 仿刺參消化系統(tǒng)的組織學(xué)和組織化學(xué)研究[J]. 動物學(xué)雜志, 2000, 35(6): 2-4

    Cui L B, Dong Z N. Histological and histochemical studies on the digestive system of Apostichopus japonicus [J]. Chinese Journal of Zoology, 2000, 35(6): 2-4 (in Chinese)

    [26] 劉曉云, 包振民, 范瑞青, 等. 刺參呼吸樹的超微結(jié)構(gòu)觀察與研究[J]. 海洋科學(xué), 2005, 29(12): 25-30

    Liu X Y, Bao Z M, Fan R Q, et al. Ultrastructural observation and study on the respiratory trees of Apostichopus japonicus [J]. Marine Science, 2005, 29(12): 25-30 (in Chinese)

    [27] 王吉橋, 田相利. 刺參養(yǎng)殖生物學(xué)新進展[M]. 北京: 海洋出版社, 2012: 22, 225-236

    [28] Gon?alves-Soares D, Zanette J, Yunes J S, et al. Expression and activity of glutathione-S-transferases and catalase in the shrimp Litopenaeus vannamei inoculated with a toxic Microcystis aeruginosa strain [J]. Marine Environmental Research, 2012, 75: 54-61

    [29] Li J, Zhou L, Lin X, et al. Characterizing dose-responses of catalase to nitrofurazone exposure in model ciliated protozoan Euplotes vannus for ecotoxicity assessment: Enzyme activity and mRNA expression [J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2014, 100: 294-302

    [30] Romero-Puertas M C, Palma J M, Gómez M, et al. Cadmium causes the oxidative modification of proteins in pea plants [J]. Plant, Cell & Environment, 2002, 25(5): 677-686

    [32] Schultz T W, Sinks G D, Bearden A P. QSAR in Aquatic Toxicology: A Mechanism of Action Approach Comparing Toxic Potency to Pimephales promelas, Tetrahymena pyriformis, and Vibrio fischeri [M]. Taylor & Francis, 1998: 51-109

    [33] 范亞維, 周啟星, 王媛媛, 等. 水體BTEX 污染對大型溞和霍普水絲蚓的毒性效應(yīng)及水環(huán)境安全評價[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2009, 29(7): 1485-1490

    Fan Y W, Zhou Q X, Wang Y Y, et al. Toxic effects of BTEX in water on Daphnia magna and Limnodrilus hoffmeisteri and safety assessment of the aquatic environment [J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2009, 29(7): 1485-1490 (in Chinese)

    [34] 范亞維, 周啟星. 水體甲苯、乙苯和二甲苯對斑馬魚的毒性效應(yīng)[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報, 2009, 4(1): 136-141

    Fan Y W, Zhou Q X. Toxic effects of toluene, ethylbenzene and xylene in waters on zebrafish Brachydanio rerio [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2009, 4(1): 136-141 (in Chinese)

    [35] 王擺, 高士博, 董穎. 6 種苯系物對球等鞭金藻和新月菱形藻的生長抑制[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報, 2014, 9(2): 233-238

    Wang B, Gao S B, Dong Y, et al. Inhibitory effect of six kinds of BTEXs on growth of the chrysophyceae Isochrysis galbana and the diatom Nitzschia closterium [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2014, 9(2): 233-238 (in Chinese)

    The Effects of BTEXs on thecatalaseGene Expression and Catalase Activities in Respiratory Tree and Intestine of Sea CucumberApostichopusjaponicus

    Gao Shibo1,2, Wang Bai2,#, Dong Ying2, Gao Shan2, Jiang Jingwei2, Sun Hongjuan2, Yin Xuwang1, Zhou Zunchun2,*

    1. Dalian Ocean University, Dalian 116023, China 2. Liaoning Ocean and Fisheries Science Research Institute, Dalian 116023, China

    5 September 2014 accepted 2 December 2014

    The present study is aimed to evaluate the effects of BTEXs on the activities of catalase (CAT) and relative fold changes of cat gene in respiratory tree and intestine of sea cucumber Apostichopus japonicus. Three different concentrations (1/5, 1/25, 1/125 of 96-LC50) of benzene, toluene, ethyl benzene, o-, m-, p-xylene were selected to treat the healthy sea cucumber individuals using semi-static water experimental method. The results showed that the fold changes of cat gene in respiratory tree and intestine were remarkably changed in different BTEXs treatment groups. The activities of CAT in respiratory tree were induced in benzene, toluene, ethyl benzene and o-xylene treatment groups, and the highest relative folds (12.0~19.8 fold) were found in ethyl benzene treatment group. The activities of CAT in intestine were inhibited in BTEXs treatment groups, and the activities in descending order were o-xylene, ethyl benzene, p-xylene, toluene, m-xylene and benzene treatment groups. This suggested that BTEXs have oxidative stress on the respiratory tree and intestine of A. japonicus, and might have oxidative damage on the two tissues. Correlation analysis showed that CAT activities was remarkably positive correlated with the relative fold changes of cat gene in intestine, which was also remarkably positive correlated with that of respiratory tree. These results will provide the basic data for toxic assessment of BTEXs on the sea cucumber A. japonicus.

    BTEX; Apostichopus japonicus; oxidative damage; CAT; respiratory tree; intestine

    海洋公益性行業(yè)科研經(jīng)費專項項目(201205012-7);大連市科學(xué)技術(shù)基金(2012J21DW029);遼寧省海洋與漁業(yè)廳項目(201301)

    高士博(1987-),男,碩士,研究方向為海洋生態(tài)毒理學(xué),E-mail: 392083670@qq.com;

    *通訊作者(Corresponding author), E-mail: zunchunz@hotmail.com

    10.7524/AJE.1673-5897.20140905001

    2014-09-05 錄用日期:2014-12-02

    1673-5897(2015)2-297-09

    Q89; X55

    A

    周遵春(1967-),男,海洋生物學(xué)博士,研究員,主要研究方向海洋生物學(xué),發(fā)表學(xué)術(shù)論文80余篇。

    王擺(1981-),男,海洋生物學(xué)博士,副研究員,主要研究方向為海洋生態(tài)毒理學(xué),發(fā)表學(xué)術(shù)論文20余篇。

    # 共同通訊作者(Co-corresponding author),E-mail: wangbai1980@hotmail.com

    高士博, 王擺, 董穎, 等. 苯系物對仿刺參catalase基因表達及酶活性的影響[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報, 2015, 10(2): 297-305

    Gao S B, Wang B, Dong Y, et al. The effects of BTEXs on the catalase gene expression and catalase activities in respiratory tree and intestine of sea cucumber Apostichopus japonicus [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2015, 10(2): 297-305(in Chinese)

    猜你喜歡
    苯系系物刺參
    蜂窩活性炭吸/脫附苯系物性能及水汽的影響
    室內(nèi)污染物苯系物危害現(xiàn)狀及防治措施
    夏眠的刺參
    夏眠的刺參
    氣相色譜法測定固定污染源有組織廢氣中的苯系物
    光照對白刺參、青刺參和紫刺參生長、消化及免疫的影響
    室內(nèi)空氣中苯系物的溶劑解吸氣相色譜法測定
    固相萃取/在線熱解吸-氣相色譜法分析水樣中苯系物
    化工行業(yè)苯系物接觸作業(yè)人員職業(yè)健康狀況分析
    仿刺參生殖腺營養(yǎng)成分分析
    av卡一久久| 中文字幕免费在线视频6| 免费观看的影片在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美精品国产亚洲| 欧美成人a在线观看| 欧美3d第一页| 亚洲欧美成人精品一区二区| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲内射少妇av| 一级毛片我不卡| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲最大成人中文| 国产不卡一卡二| 一个人免费在线观看电影| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲天堂国产精品一区在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久这里只有精品中国| 97热精品久久久久久| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 精品国产三级普通话版| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 色综合站精品国产| 久久精品国产亚洲网站| av在线亚洲专区| 国产黄色免费在线视频| 搡老乐熟女国产| 人妻少妇偷人精品九色| 中文字幕av在线有码专区| 在线观看av片永久免费下载| or卡值多少钱| 亚洲成人一二三区av| 中文资源天堂在线| 亚洲成人中文字幕在线播放| 在线观看免费高清a一片| 一级av片app| 亚洲人成网站在线观看播放| av播播在线观看一区| 国产高清国产精品国产三级 | 一区二区三区免费毛片| av黄色大香蕉| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲伊人久久精品综合| 免费观看的影片在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 日本av手机在线免费观看| 国产乱来视频区| 天堂网av新在线| 黄色一级大片看看| www.色视频.com| 毛片一级片免费看久久久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 午夜福利视频精品| videos熟女内射| h日本视频在线播放| 亚洲乱码一区二区免费版| 日本黄大片高清| .国产精品久久| 99久久精品一区二区三区| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩精品青青久久久久久| 夫妻午夜视频| 国产亚洲一区二区精品| 少妇高潮的动态图| 国产不卡一卡二| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲av不卡在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 黄片wwwwww| 搡老妇女老女人老熟妇| 一级av片app| 看免费成人av毛片| 99久久中文字幕三级久久日本| 97热精品久久久久久| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲电影在线观看av| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日日啪夜夜撸| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 午夜精品国产一区二区电影 | 午夜福利高清视频| 免费大片18禁| 国产在线一区二区三区精| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久久久久伊人网av| 国产在视频线精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 91av网一区二区| 亚洲国产精品成人综合色| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲av二区三区四区| 草草在线视频免费看| 精品久久久久久久末码| 国产淫语在线视频| 久久99蜜桃精品久久| 日本免费a在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 观看美女的网站| 如何舔出高潮| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 在线免费十八禁| 可以在线观看毛片的网站| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品一区在线观看国产| 久久国内精品自在自线图片| 一级二级三级毛片免费看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品一二三区在线看| 久久精品国产亚洲网站| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 黄色配什么色好看| 国产精品无大码| 久久久久久久午夜电影| 在线免费十八禁| av黄色大香蕉| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产黄频视频在线观看| 高清av免费在线| videossex国产| 嘟嘟电影网在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产成人精品福利久久| 国产 一区精品| 91久久精品国产一区二区三区| 欧美zozozo另类| 亚洲精品影视一区二区三区av| 久久久久久久久久久免费av| h日本视频在线播放| 国产亚洲5aaaaa淫片| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久草成人影院| 看黄色毛片网站| 日本黄大片高清| 亚洲18禁久久av| a级毛片免费高清观看在线播放| 插阴视频在线观看视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 在线a可以看的网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| av国产免费在线观看| 丰满乱子伦码专区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 日本黄色片子视频| 成人美女网站在线观看视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产黄色免费在线视频| 97超视频在线观看视频| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 天天一区二区日本电影三级| 精品人妻偷拍中文字幕| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲av成人av| 99久国产av精品国产电影| 99久久精品热视频| 久久99热这里只有精品18| 一边亲一边摸免费视频| 丰满少妇做爰视频| 精品人妻熟女av久视频| 婷婷色av中文字幕| 欧美变态另类bdsm刘玥| 夫妻性生交免费视频一级片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲av福利一区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产久久久一区二区三区| 国产午夜精品一二区理论片| 免费大片黄手机在线观看| 身体一侧抽搐| 免费观看a级毛片全部| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美zozozo另类| 国产一级毛片在线| 少妇的逼水好多| 最近中文字幕2019免费版| 国产 一区精品| 久久久久久久午夜电影| 久久久久九九精品影院| 亚洲人成网站在线播| 国产亚洲精品av在线| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 嫩草影院入口| 婷婷色av中文字幕| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 嫩草影院新地址| 精品一区二区三区视频在线| 青春草国产在线视频| 久久人人爽人人片av| 最近最新中文字幕大全电影3| 特级一级黄色大片| 亚洲电影在线观看av| 少妇丰满av| 听说在线观看完整版免费高清| 卡戴珊不雅视频在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 十八禁网站网址无遮挡 | 久久久久久久久久人人人人人人| 精品久久久久久久久亚洲| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 三级国产精品片| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲精品成人久久久久久| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费观看的影片在线观看| 亚洲图色成人| 国产伦在线观看视频一区| 国产乱人视频| 亚洲av一区综合| 青春草国产在线视频| 一个人看视频在线观看www免费| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲高清免费不卡视频| 99热这里只有精品一区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久| 国产不卡一卡二| 日本爱情动作片www.在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 两个人的视频大全免费| 男人舔女人下体高潮全视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成年av动漫网址| 在线a可以看的网站| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲成人久久爱视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 成人午夜高清在线视频| 99久国产av精品| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲综合色惰| 精品久久久久久久末码| 精品人妻一区二区三区麻豆| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩欧美一区视频在线观看 | av播播在线观看一区| 久久久久久伊人网av| 美女内射精品一级片tv| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 中国美白少妇内射xxxbb| 在线天堂最新版资源| 久久久久久久久久黄片| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 十八禁网站网址无遮挡 | 99热网站在线观看| 久久久久九九精品影院| 少妇的逼水好多| 国产乱人视频| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久久久久中文| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久人人爽人人爽人人片va| 性色avwww在线观看| 成人欧美大片| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲伊人久久精品综合| 日本免费a在线| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品1区2区在线观看.| 婷婷六月久久综合丁香| 毛片一级片免费看久久久久| 99热这里只有是精品在线观看| 成人欧美大片| 男人舔女人下体高潮全视频| 男女视频在线观看网站免费| 一本久久精品| 高清毛片免费看| 欧美不卡视频在线免费观看| 七月丁香在线播放| 午夜福利视频1000在线观看| 内地一区二区视频在线| 少妇高潮的动态图| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲高清免费不卡视频| 国产成人a区在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | freevideosex欧美| 国产精品三级大全| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美+日韩+精品| 最新中文字幕久久久久| 一二三四中文在线观看免费高清| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费观看在线日韩| 国产一区亚洲一区在线观看| 曰老女人黄片| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美日韩精品成人综合77777| 中文字幕最新亚洲高清| 婷婷成人精品国产| 黑丝袜美女国产一区| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美成人精品欧美一级黄| 人体艺术视频欧美日本| www.精华液| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美激情 高清一区二区三区| 91aial.com中文字幕在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品第二区| 亚洲第一av免费看| 国产福利在线免费观看视频| 国产人伦9x9x在线观看 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久综合国产亚洲精品| 18禁观看日本| 男女下面插进去视频免费观看| 久久久久久久精品精品| av在线app专区| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美另类一区| 热re99久久精品国产66热6| 成人亚洲欧美一区二区av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久久久精品久久久久真实原创| 中文字幕制服av| 哪个播放器可以免费观看大片| 韩国高清视频一区二区三区| 香蕉国产在线看| 久久久精品区二区三区| 亚洲熟女精品中文字幕| 飞空精品影院首页| 中文字幕人妻熟女乱码| 自线自在国产av| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久久久久人人人人人| 日韩精品有码人妻一区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩中字成人| 男人舔女人的私密视频| 精品一区二区免费观看| 波多野结衣av一区二区av| 日日撸夜夜添| 国产成人精品一,二区| 少妇人妻久久综合中文| 91成人精品电影| 一级毛片 在线播放| 精品亚洲成a人片在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 一区二区av电影网| 91成人精品电影| 十分钟在线观看高清视频www| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久久久久伊人网av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 十八禁高潮呻吟视频| 国产成人91sexporn| 高清在线视频一区二区三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 色吧在线观看| 日韩电影二区| 成人影院久久| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人av激情在线播放| 免费在线观看完整版高清| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 深夜精品福利| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 黄色配什么色好看| 午夜91福利影院| 精品国产乱码久久久久久男人| 高清欧美精品videossex| 在线天堂最新版资源| 亚洲四区av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 在线免费观看不下载黄p国产| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久久久免费高清国产稀缺| 制服诱惑二区| www.自偷自拍.com| 少妇的丰满在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 欧美精品国产亚洲| 亚洲视频免费观看视频| 天堂8中文在线网| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲成人手机| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日本午夜av视频| 999精品在线视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 性少妇av在线| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 看免费av毛片| 老司机影院毛片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久久久久久精品精品| 色94色欧美一区二区| av电影中文网址| 成年美女黄网站色视频大全免费| 下体分泌物呈黄色| 国产精品成人在线| 丝瓜视频免费看黄片| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品二区激情视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产免费现黄频在线看| 不卡av一区二区三区| 成人毛片60女人毛片免费| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲美女黄色视频免费看| 三上悠亚av全集在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产日韩欧美在线精品| 国产高清国产精品国产三级| 岛国毛片在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 伊人亚洲综合成人网| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 超色免费av| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日韩大片免费观看网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 在线观看美女被高潮喷水网站| 99国产精品免费福利视频| 男女边吃奶边做爰视频| 91精品三级在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 婷婷色综合www| 老鸭窝网址在线观看| 在线观看www视频免费| 香蕉国产在线看| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 精品人妻在线不人妻| 人人澡人人妻人| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲av中文av极速乱| 成人二区视频| 成人国产av品久久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲av中文av极速乱| 麻豆乱淫一区二区| 26uuu在线亚洲综合色| 涩涩av久久男人的天堂| 97在线视频观看| 国产在线视频一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产黄色免费在线视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩中文字幕视频在线看片| 熟女av电影| 毛片一级片免费看久久久久| 人成视频在线观看免费观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成人国语在线视频| 久久婷婷青草| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产精品av久久久久免费| 国产成人aa在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲欧洲日产国产| 国产在线免费精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 两性夫妻黄色片| 亚洲少妇的诱惑av| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲,欧美,日韩| 精品卡一卡二卡四卡免费| 中文天堂在线官网| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 777米奇影视久久| 国产成人一区二区在线| av电影中文网址| 午夜日本视频在线| 久久精品国产a三级三级三级| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲国产日韩一区二区| www日本在线高清视频| 黄片无遮挡物在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 久久久久视频综合| 国产精品二区激情视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 大片电影免费在线观看免费| 在线天堂中文资源库| 日本欧美国产在线视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产免费又黄又爽又色| 国产综合精华液| 日本免费在线观看一区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 女人精品久久久久毛片| 亚洲,欧美精品.| 精品国产国语对白av| 午夜日本视频在线| 97在线人人人人妻| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久人人爽人人片av| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩欧美精品免费久久| 久久精品亚洲av国产电影网| 少妇精品久久久久久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜久久久在线观看| 女人久久www免费人成看片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲天堂av无毛| 欧美97在线视频| 中文字幕av电影在线播放| 交换朋友夫妻互换小说| 老汉色∧v一级毛片| 日韩制服骚丝袜av| 国产av一区二区精品久久| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 欧美精品一区二区大全| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 熟女av电影| 最近手机中文字幕大全| 国产 一区精品| 男人添女人高潮全过程视频| 日日爽夜夜爽网站| 久久久亚洲精品成人影院| 99久久人妻综合| av一本久久久久| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲三区欧美一区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 1024香蕉在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 日本色播在线视频| 在线观看免费视频网站a站| 热re99久久国产66热| 国产黄色免费在线视频| 丝袜喷水一区| 亚洲色图综合在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲伊人色综图| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲av福利一区| 国产一区二区激情短视频 | 99热国产这里只有精品6| 欧美在线黄色| 国产成人a∨麻豆精品| 国产极品天堂在线| 少妇精品久久久久久久| 久久97久久精品| 1024视频免费在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 久久青草综合色| 久久久亚洲精品成人影院| 男女午夜视频在线观看| 久久久久久久精品精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美成人精品欧美一级黄| 97在线视频观看| 国产有黄有色有爽视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 大片电影免费在线观看免费| 美女中出高潮动态图| 两个人看的免费小视频| 国产男女超爽视频在线观看| 婷婷色av中文字幕| 欧美中文综合在线视频| 人体艺术视频欧美日本| 香蕉精品网在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| videosex国产| 久久久精品区二区三区| 亚洲内射少妇av| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久久精品94久久精品| 免费观看在线日韩| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 两个人看的免费小视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 日日啪夜夜爽| 我的亚洲天堂| a级毛片在线看网站| av在线老鸭窝| 美女福利国产在线|