P r e mi e r H b 9 2 1 0糖化血紅蛋白分析儀性能驗(yàn)證

鄧紀(jì)望，葉秋靈，高云翔，蔡燕玲，刁文連

(中山市大涌醫(yī)院，廣東 中山528000)

HbA1c是紅細(xì)胞中血紅蛋白與萄萄糖不可逆地進(jìn)行非酶促蛋白糖基化反應(yīng)的產(chǎn)物，其值反映了整個(gè)紅細(xì)胞半衰期(大約60d)的血糖水平并與這段時(shí)間的平均血糖水平有顯著的關(guān)系。隨著HbA1c在2型糖尿病的診斷和一級(jí)預(yù)防中的作用被人們所認(rèn)可和重視[1,2],HbA1c的準(zhǔn)確測(cè)定越來越重要。HbA1c檢測(cè)較OGTT試驗(yàn)簡(jiǎn)便易行，結(jié)果穩(wěn)定，變異性小，且不受進(jìn)食時(shí)間及短期生活方式改變的影響，患者依從性好。2010年ADA指南已將HbA1c≥6.5%作為糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。2011年WHO也建議在條件具備的國(guó)家和地區(qū)采用這一切點(diǎn)診斷糖尿病[3]。為了了解PremierHb9210糖化血紅蛋白分析儀配套檢測(cè)系統(tǒng)在本室能否達(dá)到廠家的分析性能指標(biāo)以及我國(guó)《糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南》[4]的要求，是否適用于我室進(jìn)行臨床檢測(cè)，我們對(duì)其分析性能進(jìn)行了驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 全部標(biāo)本均來自2014年8-9月我院健康體檢、門診及住院患者，HbA1c檢測(cè)值在3.9%～6%之間有28例，HbA1c檢測(cè)值在6%～15%之間有18例，HbA1c檢測(cè)值超過15% 者2例，共48例，整個(gè)驗(yàn)證過程未采集與患者隱私相關(guān)的個(gè)人信息。

1.2 儀器與試劑 Premier Hb9210全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑 (HPLC和硼酸鹽親和原理)，試劑 A(批號(hào):4544)，試劑 B(批號(hào):4423)，色譜柱 (批號(hào)：4551)，WASH(批號(hào):4437) ，DIL( 批號(hào):4479)。VARIA2全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑 (中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，表1中用A代表)。

1.3 方法 嚴(yán)格按照校準(zhǔn)程序進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，方法評(píng)價(jià)期間每日測(cè)定2個(gè)水平定值質(zhì)控品，在室內(nèi)質(zhì)控在控的情況下進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)方案如下。

1.3.1 準(zhǔn)確度驗(yàn)證 選用20個(gè)不同濃度的樣本，將其等分成兩份，一份在我室分別進(jìn)行全血模式及手工稀釋模式檢測(cè)，一份送中山大學(xué)附屬中山醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心用全血模式檢測(cè)，計(jì)算結(jié)果并進(jìn)行比對(duì)，要求同時(shí)滿足：(1)相對(duì)偏差達(dá)到廠家聲明標(biāo)準(zhǔn)<5%；(2)絕對(duì)差值在±0.5%HbA1c內(nèi)，以控制在±0.3%HbA1c為宜[4]；(3)配對(duì)資料 T檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3.2 攜帶污染評(píng)估

1.3.2.1 方案 根據(jù)說明書要求，需要準(zhǔn)備兩個(gè)紅細(xì)胞比積大致接近的樣本，一個(gè)高HbA1c濃度值樣本，一個(gè)低HbA1c濃度值樣本，將低HbA1c濃度值樣本等分成11個(gè)樣本，將高HbA1c濃度值樣本等分成10個(gè)樣本，等分后共21個(gè)樣本。在分析這21個(gè)樣本時(shí)，不允許有其他樣本或測(cè)試在儀器上運(yùn)行，分析時(shí)樣本必須按下列順序分析，否則實(shí)驗(yàn)將會(huì)無效。樣本序列：3低/2高/1低/2高/4低/2高/1低/2高/1低/2高/1低。

1.3.2.2 計(jì)算攜帶污染(殘余值)=高-低結(jié)果的平均值—低-低結(jié)果的平均值、誤差限度=3倍的低-低結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)方差)、兩個(gè)水平的CV值。

1.3.2.3 要求 (1)每個(gè)水平的CV值計(jì)算要低于2%；(2)攜帶污染＜誤差限度。

1.3.3 精密度評(píng)價(jià) 根據(jù)EP15-A2文件[5]，對(duì)高、中、低3個(gè)濃度水平的HbA1c標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本每天檢測(cè)4次，每次間隔2h，共5d[6-8]。對(duì)每個(gè)濃度水平獨(dú)立進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，計(jì)算其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV值。要求不精密度在廠家聲明的不精密度(≤2%)范圍。

1.3.4 線性范圍評(píng)估 參考 《臨床化學(xué)設(shè)備線性評(píng)價(jià)指南》[9]對(duì)線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證，將接近分析儀檢測(cè)上限的高值樣本和檢測(cè)下限的低值樣本按不同比例混合成5個(gè)不同濃度的標(biāo)本，濃度分別為A：100%低值，B：75%低值+25%高值，C：50%低值+50%高值，D：25%低值+75%高值，E：100%高值?；旌暇鶆蚝髮⒏鱾€(gè)濃度的標(biāo)本分別測(cè)定4次，取其均值，采用直線回歸方程進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，直線回歸方程，y=mx+b。 要求:0.97≤m≤1.03,R2≥0.95。

1.3.5 參考區(qū)間驗(yàn)證 根據(jù) 《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》[10]小樣本驗(yàn)證方方案，選20例健康體檢人員樣本測(cè)定HbA1c，要求超出參考區(qū)間(HbA1c4%~6%)樣本≤2。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。對(duì)離群值的檢驗(yàn)用格拉布斯(Grubbs)法，兩樣本均數(shù)比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，P<0.05表示兩種方法的檢測(cè)結(jié)果之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[11]。

2 結(jié)果

2.1 準(zhǔn)確度及全血稀釋驗(yàn)證 A：檢驗(yàn)中心結(jié)果，B：全血模式結(jié)果，C：手工稀釋(1：150)模式結(jié)果；全部結(jié)果相對(duì)偏差滿足廠家聲明要求；絕對(duì)偏差滿足我國(guó)《糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南》的要求；配對(duì)資料T檢驗(yàn)結(jié)果：A組與B組、A組與C組，B組與C組P值分別為0.718、0.673、0.936，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

2.2 攜帶污染驗(yàn)證 按照3低/2高/1低/2高/4低/2高/1低/2高/1低/2高/1低的順序HbA1c%結(jié)果為4.83、4.86、4.92、15.88、15.81、5.02、15.91、15.82、5.11、5.03、4.95、4.87、15.78、15.86、4.97、15.73、15.94、5.03，其中高-低標(biāo)本檢測(cè)值(±s)為 5.02±0.057，CV%為 1.14%；低-低標(biāo)本值(±s)為 4.93±0.069．CV%為 1.39%;攜帶污染為 0.09，誤差限度為0.21。所有結(jié)果均符合要求。

2.3 精密度驗(yàn)證 對(duì)于3個(gè)不同水平的HbA1c樣本， 檢測(cè)結(jié)果 (HbA1c%，±s) 為 4.78±0.077、7.93±0.086、11.56±0.083，不精度 (CV%) 分別為 1.61、1.08、0.72，不精密度均符合要求。見表2。

2.3 線性范圍驗(yàn)證 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果見表3，經(jīng)回歸分析糖化血紅蛋白濃度在4.0%~18.7%內(nèi)呈線性，直線回歸方程:y=1.005x-0.142。R2=1≥0.95，符合線性要求。

2.4 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果 20例健康體檢者HbA1c(%)全部在參考區(qū)間4%~6%范圍內(nèi)，驗(yàn)證通過。

3 討論

在2002年，美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)(ADA)將HbA1c定義為糖尿病病人血糖監(jiān)控的 “金標(biāo)準(zhǔn)”，HbA1c＜7%時(shí)，一般可采用飲食和運(yùn)動(dòng)療法。HbA1c＞7%時(shí)，不管OGTT的診斷是糖耐量減退還是糖尿病，均需要藥物治療。由于HbA1c在糖尿病管理中的重要作用，2010年ADA在其正式更新的指南中將HbA1c作為一種更快速、更簡(jiǎn)易的診斷試驗(yàn)推薦用于糖尿病的診斷[12]。由于HbA1c檢測(cè)儀器種類繁多，各實(shí)驗(yàn)室的正常參考值亦存在一定差異[13]，為了規(guī)范HbA1c的檢測(cè)，我國(guó) 《糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南》對(duì)HbA1c分析系統(tǒng)的性能指標(biāo)及使用做出了詳細(xì)規(guī)定，實(shí)驗(yàn)室在引入這一項(xiàng)新技術(shù)或新設(shè)備時(shí)必須要對(duì)分析系統(tǒng)的性能進(jìn)行驗(yàn)證。

表2 精密度驗(yàn)證結(jié)果

表3 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果顯示相對(duì)偏差滿足廠家聲明要求；絕對(duì)偏差滿足我國(guó)《糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南》的要求；手工稀釋結(jié)果與全血結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。精密度驗(yàn)證結(jié)果三個(gè)濃度水平不精度(CV%)分別為 1.61、1.08、0.72，與張傳寶等報(bào)道的基本一致[14]。攜帶污染驗(yàn)證攜帶污染為0.09，誤差限度為0.21，符合要求。糖化血紅蛋白濃度在4.0%~18.7%內(nèi)呈線性，與陳雨等報(bào)道一致[15]。參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果20例健康體檢者HbA1c(%)全部在參考區(qū)間4%~6%范圍內(nèi)。由于缺少變異血紅蛋白標(biāo)本，本文未對(duì)由此引起的干擾進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，Hb9210糖化血紅蛋白分析儀Premier在準(zhǔn)確度、攜帶污染、精密度、線性范圍、參考區(qū)間等方面的驗(yàn)證結(jié)果達(dá)到廠家聲明的分析性能指標(biāo)以及我國(guó)《糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南》的要求，適用于我室臨床檢測(cè)糖化血紅蛋白A1c(HbA1c)。

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