食品和公共場所從業(yè)人員致瀉性大腸埃希菌攜帶情況分析

鄧艷華

(新建縣疾病預(yù)防控制中心檢驗科，江西 南昌330100)

大腸埃希菌(Escherichia coli)，是腸道正常菌群的重要成員之一，主要寄居于人和動物的腸道內(nèi)。少數(shù)大腸埃希菌具有致病性，可引起機體腸道感染和腸道外感染兩大類疾病，并可以通過食物、水源等方式傳播，從而暴發(fā)疫情[1]。自1982年大腸埃希菌在美國感染暴發(fā)以來，包括中國等許多國家都發(fā)現(xiàn)致瀉性大腸埃希菌(Enterovirulent E.coli)，歐洲、加拿大及日本等國家近年來也暴發(fā)數(shù)起因食物污染該菌導(dǎo)致的疫情[2]，如1991年加拿大西北部地區(qū)的O157:H7型大腸埃希菌的暴發(fā)流行[3]和2011年德國發(fā)生的O104:H4型大腸埃希菌的暴發(fā)流行[4]。致瀉性大腸埃希菌主要分為5類，即腸侵襲性大腸埃希菌(Enteroinvasive E.coli，EIEC)、腸致病性大腸埃希菌 (Enteropathogenic E.coli EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)、腸聚集性大腸桿菌 (Enteroaggregative E.coli，EAEC)、腸出血性大腸埃希菌(Enterohemorrhagic E.coli，EHEC)[5]。為了解新建縣食品和公共場所從業(yè)人員致瀉性大腸埃希菌的攜帶情況，2013年4月至2014年12月對新建縣食品和公共場所從業(yè)人員的肛拭子標(biāo)本在做常規(guī)預(yù)防性健康體檢項目同時進行致瀉性大腸埃希菌的檢測和分析。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2013年4月至2014年12月新建縣食品和公共場所從業(yè)人員的常規(guī)預(yù)防性健康體檢項目的肛拭子標(biāo)本，共收集到標(biāo)本3032例。

1.2 儀器和試劑

1.2.1 儀器 LRH-150型生化培養(yǎng)箱 (上海一恒科技有限公司)；E200 型生物顯微鏡(日本 NIKON)；BHC-130ⅡA/B型生物潔凈安全柜 (江蘇蘇州凈化設(shè)備有限公司)；ATB全自動微生物鑒定系統(tǒng) (法國梅里埃)；ABI7300實時熒光PCR系統(tǒng)(美國應(yīng)用生物系統(tǒng))。

1.2.2 試劑 培養(yǎng)基由青島高科園海博生物制品有限公司提供。ID32E生化鑒定反應(yīng)板由法國梅里埃提供。診斷血清為寧波天潤生物有限公司生產(chǎn)，均在有效期內(nèi)使用。熒光PCR試劑盒由深圳市生科源技術(shù)有限公司提供。

1.3 檢測方法 按照GB17012-1997感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)和處理原則[6]、GB4789.6－2003致瀉性大腸埃希菌檢測方法[7]將采集的肛拭子標(biāo)本放入GN肉湯中，立即送達實驗室進行36℃±1℃培養(yǎng)過夜。將GN肉湯培養(yǎng)物接種到EMB和SS平板培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)18～24h，挑取可疑致瀉性大腸埃希菌菌落接種三糖鐵瓊脂斜面，然后再選擇可疑的菌落進行玻片血清凝集鑒定、接種至ID32E生化鑒定反應(yīng)板進行生物化學(xué)鑒定。將上述檢測出的疑似陽性菌株保存到BHI甘油肉湯中送至南昌市疾病預(yù)防控制中心進行復(fù)核鑒定(血清學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定)。1.4統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件，定性資料率的比較用χ2檢驗，結(jié)果分析以P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食品從業(yè)人員和公共場所從業(yè)人員的致瀉性大腸埃希菌的檢出結(jié)果 見表1。

表1 食品從業(yè)人員和公共場所從業(yè)人員的致瀉性大腸埃希菌的檢出率

2.2 食品和公共場所從業(yè)人員的沙門菌、志賀菌與致瀉性大腸埃希菌的檢出率 見表2。

表2 沙門菌、志賀菌及致瀉性大腸埃希菌的檢出率

2.3 致瀉性大腸埃希菌的血清型 從3032例標(biāo)本中共檢出致瀉性大腸埃希菌12株，檢出率為3.96‰。其中腸侵襲性大腸埃希菌(EIEC)7株，占2.30‰，檢出血清型別有O112:K66 4株,O144:K?2株,O143:K?1株;腸致病性大腸埃希菌 (EPEC)5株，占1.65‰，檢出血清型別有055:K59 2株，O44:K74、O125:K70、O26:K60各1株。檢出的致瀉性大腸埃希菌有腸侵襲性大腸埃希菌和腸致病性大腸埃希菌，而未檢出其他致瀉性大腸埃希菌。

2.4 致瀉性大腸埃希菌的毒力基因檢測 對12株致瀉性的大腸埃希菌用熒光PCR進行致病性大腸埃希菌(eae和bfp基因)和侵襲性大腸埃希菌(ipaH基因)的測定[8]，其中1株致病性大腸埃希菌檢出eae基因，1株致病性大腸埃希菌檢出bfp基因，1株侵襲性大腸埃希菌ipaH基因。

3 討論

大腸埃希菌是國際公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌，以食物傳播為主要傳播途徑，且致瀉性埃希菌可以通過傳播而暴發(fā)疫情[9]。近年來由該菌引起的食源性疾病在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢[10],在中國各類致瀉性大腸埃希菌在食物中毒中也占有重要比例,其引起的散發(fā)病例亦有發(fā)生[11]。我市也發(fā)生過由于廚師攜帶侵襲性大腸埃希菌而引起的食物中毒事件[12]。調(diào)查結(jié)果顯示，致瀉性大腸埃希菌的攜帶人群中食品從業(yè)人員高于公共場所從業(yè)人員,并且攜帶毒力基因的3株致瀉性大腸埃希菌都來源于食品從業(yè)人員，這些人可能對所接觸的食品造成污染,因此加強對食品從業(yè)人員的監(jiān)管是防止引起食源性食物中毒事件的必要手段。掌握食品和公共場所從業(yè)人員的致瀉性大腸埃希菌的攜帶情況，對預(yù)防和控制腹瀉病病原，尤其是食源性食物中毒方面起到重要的預(yù)警作用。按照《中華人民共和國食品安全法》、《公共場所衛(wèi)生管理條例》、《預(yù)防性健康檢查管理辦法》規(guī)定，食品和公共場所從業(yè)人員預(yù)防性健康體檢中主要檢查病毒性肝炎、痢疾、傷寒、活動性肺結(jié)核和皮膚病等，腸道致病菌做沙門菌和志賀菌檢測，而沒有致瀉性大腸埃希菌檢測。調(diào)查結(jié)果顯示致瀉性大腸埃希菌的檢出率(3.96‰)明顯高于沙門菌的檢出率(0.99‰)及志賀菌的檢出率(0.66‰)，且有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。此結(jié)果表明在食品從業(yè)人員的健康檢查項目腸道致病菌檢測中增加致瀉性大腸埃希菌的檢測具有一定的可行性，為預(yù)防和控制腹瀉病病原及食源性食物中毒等有重要意義。

[1]Lemaignen A,Ridel C,Hertig A,et al.Escherichia coli associated hemolytic and uremic syndrome:what lessons can be learned after the European epidemic of 2011?[J].Nephrol Ther,2013,9(3):129-136.

[2]王金良.新型腸出血性大腸埃希菌感染的檢驗診斷與防治[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2011,29(4):337-338.

[3]Orr P,Lorencz B,Brown R,et al.An outbreak of diarrhea due to verotoxin-producing Escherichia coli in the Canadian Northwest Territories[J].Scand J Infect Dis,1994,26(6):675-684.

[4]Frank C,Werber D,Cramer JP,et al.Epidemic profile of Shigatoxin-producing Escherichia coli O104:H4 outbreak in Germany[J].N Engl J Med,2011,365(19):1771-1780.

[5]李蓉,王潔,馬翠琴,等.感染性腹瀉樣本中致瀉性大腸埃希菌的檢測結(jié)果分析[J].安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2013,19(6)：463-465.

[6]GB17012-1997.感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)和處理原則[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1997.

[7]GB4789.6－2003.致瀉性大腸埃希菌檢測[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2011.

[8]高昆,趙雪濤,韓倩,等.腸道感染中致瀉性大腸埃希菌的檢測及流行情況分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(7):853-857.

[9]Karmali MA.Infection by Shiga toxin-producing Escherichia coli:an overview[J].Mol Biotechnol,2004,26(2):117-122.

[10]徐進,付萍.1998-2002年美國食源性疾病暴發(fā)監(jiān)測[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2009,21(05):446-449.

[11]吳葦,李輝,劉明斌.一起由桶裝水污染引起的學(xué)校感染性腹瀉暴發(fā)調(diào)查[J].南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2014,59(1):77-80.

[12]夏文,薛琳,周顯鳳,等.一起由腸侵襲性大腸埃希菌O136:K78引起的聚集性腹瀉暴發(fā)[J].疾病監(jiān)測,2012,27(9):726-728.