天山花楸葉總黃酮對心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌酶和心肌超微結(jié)構(gòu)的影響

耿瑋崢，呂銘洋，崔新明，俞 星

（1.延邊大學2011級臨床醫(yī)學系2班，吉林延吉133000；2.延邊大學醫(yī)學院，吉林延吉133000；3.吉林大學基礎醫(yī)學院，吉林長春130021；4.延邊大學醫(yī)學院預防醫(yī)學教研室，吉林延吉133000）

天山花楸葉總黃酮對心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌酶和心肌超微結(jié)構(gòu)的影響

耿瑋崢1，呂銘洋2，崔新明3，俞 星4＊

（1.延邊大學2011級臨床醫(yī)學系2班，吉林延吉133000；2.延邊大學醫(yī)學院，吉林延吉133000；3.吉林大學基礎醫(yī)學院，吉林長春130021；4.延邊大學醫(yī)學院預防醫(yī)學教研室，吉林延吉133000）

天山花楸（SorbustianschanicaL）系薔薇科花楸屬植物，天山花楸主含黃酮類化合物、花青素、雙聯(lián)苯酚、類山梨酸苷等［1，2］。藥理試驗顯示：天山花楸葉總黃酮可明顯改善離體心臟心肌缺血／再灌注損傷后左心室壓（LVDP）和最大速率（±dp／dtmax），增加冠脈流量，清除DPPH自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基，并抑制脂質(zhì)過氧化反應［3］。天山花楸葉具有抗氧化、抗衰老、抗心腦血管疾病作用［4］。本文采用大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，觀察了天山花楸葉總黃酮對心肌梗死面積、心肌酶及線粒體超微結(jié)構(gòu)改變的影響，并探討該保護作用可能機制。

1 材料與方法

1.1 動物 健康雄性大鼠，體重210－240g，由吉林大學實驗動物中心提供，動物合格證號為SCXK－（吉）2014－0001。

1.2 藥品和試劑 天山花楸葉總黃酮由白求恩醫(yī)科大學制藥廠提供，純度質(zhì)量在93.8%以上；地奧心血康由成都地奧制藥集團有限公司生產(chǎn)，批號：141013。LDH、AST測定試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號分別為140501、140213，NO、SOD、MDA測定試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號分別為201416、20140211、20140322。

1.3 儀器 LDZ5－2型離心機，北京醫(yī)用離心機廠。SSW型電熱恒溫水槽，上海博迅實業(yè)有限公司。722分光光度計，上海精密科學儀器有限公司。LKB－Ⅲ型超薄切片機，瑞典。EOS880型半自動血液生化分析儀由意大利生產(chǎn)；電子秤為沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司產(chǎn)品；BI－2000圖像分析系統(tǒng)由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 方法

1.4.1 分組和給藥 將雄性大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、地奧心血康50.0mg·kg－1組及天山花楸葉總黃酮10.0、20.0mg·kg－1組，每組10只。5組大鼠連續(xù)給藥1周。

1.4.2 實驗方法 大鼠用乙醚麻醉后，仰位固定于手術(shù)臺，先用手術(shù)線在開胸部位做一荷包，自左側(cè)第4肋間開胸，暴露心臟，結(jié)扎左冠狀動脈前降支（LAD），將心臟送回胸腔，擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，收攏荷包關(guān)閉胸腔。假手術(shù)組僅置縫線而不結(jié)扎冠脈，其余組缺血30min后再次開胸，剪斷手術(shù)線使血流再通，120min后，大鼠腹主動脈取血，3 500r／min，離心8min，吸取上清液，按試劑盒方法測定血清AST、NO、LDH含量。測血清MDA含量和SOD、GSH－Px活性。處死大鼠，剪下心臟，用生理鹽水洗凈，剪掉右心室，將心臟順房室溝從心尖到心基部平行均勻的將心室切成5片（厚度在0.1cm左右）。將心肌切片放置于1%TTC（pH 7.4）染液中，在37℃恒溫水浴中染色3－5min。通過醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)將各組心肌切片以圖片形式攝入電腦，經(jīng)軟件系統(tǒng)計算心肌梗死面積。心肌組織電鏡觀察，各組動物取心肌組織，經(jīng)脫水、包埋、超薄切片，染色后在透射電鏡下觀察并拍照。

1.5 統(tǒng)計學處理 實驗數(shù)據(jù)采用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，結(jié)果以均數(shù)加減標準差（±s）表示，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 天山花楸葉總黃酮對心肌缺血大鼠血清AST，LDH、MDA、SOD、GSH－Px的影響

模型組大鼠血清AST、LDH、MDA水平均明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01），SOD、GSH－Px活性明顯降低（P＜0.01），表明心肌缺血再灌注損傷模型成立。天山花楸葉總黃酮20.0mg／kg劑量組及地奧心血康組可明顯降低血清AST、MDA的含量（P＜0.05），天山花楸葉總黃酮10.0mg／kg、20.0 mg／kg劑量組及地奧心血康組可明顯降低血清LDH的含量（P＜0.05），與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義。

天山花楸葉總黃酮10.0mg／kg、20.0mg／kg劑量組及地奧心血康組可明顯降低血清MDA的含量（P＜0.05，P＜0.01），天山花楸葉總黃酮10.0 mg／kg、20.0mg／kg劑量組及地奧心血康組可明顯升高血清SOD含量（P＜0.05，P＜0.01），天山花楸葉總黃酮20.0mg／kg劑量組及地奧心血康組可明顯升高血清GSH－Px的含量（P＜0.05），與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表1。

表1 天山花楸葉總黃酮對心肌缺血大鼠血清AST、LDH、MDA、SOD、GSH－Px的影響（±s，n＝10）

表1 天山花楸葉總黃酮對心肌缺血大鼠血清AST、LDH、MDA、SOD、GSH－Px的影響（±s，n＝10）

注：與假手術(shù)組比較▲▲P＜0.01，與模型組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別劑量（mg·kg－1）AST（UI／L）LDH（UI／L）MDA（nmol／L）SOD（U／mL）GSH－Px（U／mL）±45.73 38.91±9.38模型組——295.37±110.19▲▲792.41±306.27▲▲11.77±3.47▲▲145.87±18.17▲▲24.34±8.29▲▲地奧心血康50.0 195.15±62.78＊551.64±228.34＊8.60±2.43＊＊170.78±14.75＊33.69±9.27＊天山花楸葉總黃酮10.0 245.75±96.06 562.53±172.93＊8.16±2.64＊174.21±18.95＊30.28±8.24 20.0 199.46±50.22＊484.67±124.39＊7.69±2.05＊＊184.23±22.58＊＊32.49±8.50假手術(shù)組——155.87±44.11 423.54±72.90 6.76±2.87 203.66＊

表2 天山花楸葉總黃酮對心肌梗死面積及NO的影響（±s，n＝10）

表2 天山花楸葉總黃酮對心肌梗死面積及NO的影響（±s，n＝10）

注：與模型組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與假手術(shù)組比較▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001

組別劑量（）（／）（mg·kg－1）MIS%NOUmL假手術(shù)組——0 4.37±1.89模型組——40.58±15.31▲▲▲7.53±2.01▲▲地奧心血康50.0 31.15±10.19＊5.44±1.52＊天山花楸葉總黃酮10.0 27.81±7.20＊5.98±1.10＊20.0 27.48±5.55＊4.87±1.52＊＊

2.2 天山花楸葉總黃酮對心肌MIS、NO的影響

與假手術(shù)組相比較，模型組大鼠心肌MIS、NO明顯升高（P＜0.01），天山花楸葉總黃酮10.0、20.0 mg／kg劑量組及地奧心血康組可明顯降低MIS（P＜0.05），天山花楸葉總黃酮10.0mg／kg、20.0mg／kg劑量組及地奧心血康組可明顯降低血清NO的含量（P＜0.05，P＜0.01），結(jié)果見表2。

2.3 天山花楸葉總黃酮對大鼠心肌組織電鏡觀察

假手術(shù)組：心肌細胞組織結(jié)構(gòu)基本正常，心肌細胞膜、線粒體膜完整，嵴致密，基質(zhì)顆粒均勻。模型組：線粒體腫脹，嵴溶解破壞，有空泡，肌絲排列疏松、斷裂、紊亂，核周圍細胞質(zhì)空化，核皺縮，核膜表面凹凸不平等形態(tài)學改變。地奧心血康組：線粒體基質(zhì)基本完整，基質(zhì)顆粒部分消失，嵴排列欠整體，少部分斷裂，肌絲結(jié)構(gòu)基本完整，線粒體損傷程度明顯減輕。天山花楸葉總黃酮10.0mg·kg－1組：心肌纖維排列均勻，線粒體膜結(jié)構(gòu)完整，僅輕度水腫，嵴清晰，呈凝聚狀。天山花楸葉總黃酮20.0mg· kg－1組：細胞核結(jié)構(gòu)清晰，肌絲排列完好，肌節(jié)清晰可見線粒體結(jié)構(gòu)完整，嵴呈凝聚狀。見圖1。

圖1 天山花楸葉總黃酮對心肌缺血大鼠心肌細胞超微結(jié)構(gòu)的影響（Bar＝500 nm）

3 討論

在缺血－再灌注損傷中，往往發(fā)生鈣超載、氧自由基生成、能量代謝障礙等，盡早恢復其血流灌注是組織細胞存活的必要措施之一，心肌缺血超過一定時限即可引起組織損傷和細胞死亡［5］。心肌壞死是心肌缺血再灌注損傷的最嚴重結(jié)果，血清心肌酶是判斷心肌壞死程度的重要指標之一。

本實驗結(jié)果表明，模型組血清AST、LDH、MDA釋放增多，SOD、GSH－Px活性明顯降低，心肌梗死范圍增大，電鏡下超微結(jié)構(gòu)的觀察也證實心肌細胞的改變，觀察線粒體的變化能地反映缺血－再灌注損傷心肌細胞能量代謝的狀況［6］。與模型組比較，天山花楸葉總黃酮組血清AST、LDH、MDA活性下降，SOD、GSH－Px活性增加，心肌梗死面積明顯縮小，心肌細胞明顯改善，提示其對心肌細胞膜脂質(zhì)過氧化的損傷，心肌細胞組織結(jié)構(gòu)有保護作用。從而改善缺血心肌能量代謝和功能損傷。增強心肌細胞的抗自由基損傷能力。

一氧化氮（NO）是一種新型氧自由基，為小分子氣體物質(zhì)，主要由血管內(nèi)皮細胞合成、分泌。NO對心肌具有保護作用主要與NO可以在再灌注過程中改善血流，抑制中性粒細胞黏附到血管內(nèi)皮，以及可清除再灌注過程中形成的過多的超氧化物有關(guān)［7］。本實驗結(jié)果證實，天山花楸葉總黃酮可明顯降低大鼠血清中NO含量，這可能是天山花楸葉總黃酮減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷的機制之一。

［1］于 明，李 銑.花楸屬植物化學成分藥理作用及其研究進展［J］.遼寧中醫(yī)學院學報，2004，6（5）：364.

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2014－07－08）

1007－4287（2015）06－0877－03

＊通訊作者