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    免疫組化技術(shù)和常規(guī)技術(shù)在腫瘤病理診斷中的效果對(duì)比

    2015-05-24 07:09:38姬國(guó)強(qiáng)
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2015年23期
    關(guān)鍵詞:切片免疫組化染色

    姬國(guó)強(qiáng)

    河南省平頂山市第二人民醫(yī)院病理科,河南平頂山 467000

    腫瘤是臨床上常見(jiàn)的疾病,這種疾病發(fā)病率較高,且隨著人們生活節(jié)奏的加快,其發(fā)病率出現(xiàn)上升趨勢(shì),患者發(fā)病后臨床癥狀不顯著,患者一旦確診已經(jīng)是中、晚期,從而錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)[1]。目前,臨床上對(duì)于腫瘤尚缺乏理想的診斷方法,常規(guī)方法更多的是以CT、磁共振成像等診斷方法為主,這種方法雖然能夠確診,但是誤診率或漏診率較高。近年來(lái),病理診斷在腫瘤診斷中應(yīng)用廣泛,且效果理想,但是臨床上對(duì)于病理診斷中不同技術(shù)尚存在較大的爭(zhēng)議[2]。常規(guī)技術(shù)主要以活檢穿刺診斷為主,這種方法雖然可以確定病灶類型、分期等,但是患者痛苦較大。當(dāng)前,免疫組化技術(shù)在病例診斷中開始使用,且該技術(shù)已經(jīng)融合了抗原修復(fù)技術(shù)、自動(dòng)免疫染色系統(tǒng)以及敏感檢測(cè)系統(tǒng)等[3]。為了探討免疫組化技術(shù)和常規(guī)技術(shù)在病理診斷中的臨床診斷效果,對(duì)2013年4月~2014年4月我院收治的56例腫瘤患者的資料進(jìn)行分析。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    對(duì)我院收治的56例腫瘤患者的資料進(jìn)行分析,其中15例為肝癌,35例為轉(zhuǎn)移性腫瘤,4例為內(nèi)膽管癌,2例為血管瘤。根據(jù)不同病理診斷方法將患者分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組28例,男11例,女17例,年齡 24.5~71.3 歲,平均(45.6±2.4)歲,患者從發(fā)病到入院診斷時(shí)間為 1.1~7.9 個(gè)月,平均(4.2±1.1)個(gè)月;對(duì)照組28例,其中男25例,女3例,年齡25.3~74.7歲,平均(47.4±0.9)歲,患者從發(fā)病到入院診斷時(shí)間為1.2~7.8個(gè)月,平均(4.4±1.6)個(gè)月。兩組患者年齡、病程等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性?;颊邔?duì)診斷方案、護(hù)理措施等均知情同意。

    1.2 方法

    1.2.1 對(duì)照組 對(duì)照組采用活檢穿刺法診斷,根據(jù)病灶類型、病灶位置等進(jìn)行針對(duì)性的穿刺活檢,活檢過(guò)程在超聲下進(jìn)行,取出組織與標(biāo)準(zhǔn)組織進(jìn)行比較[4]。

    1.2.2 實(shí)驗(yàn)組 實(shí)驗(yàn)組采用免疫組化技術(shù)診斷,所用試劑主要包括:甲醛固定液、透明液、脫水液、蒸餾水、浸蠟液、樹膠及Ultrasen SitiveTMSP試劑[5]。具體診斷操作為:取一塊患者組織,組織大小為1 cm×2 cm×0.2 cm。將其充分浸泡在甲醛溶液中,浸泡時(shí)間控制在2 h,然后采用透明液透明1 h,脫水液脫水1 h,浸蠟液浸泡1 h,將組織埋在石蠟內(nèi),常規(guī)切片,厚度控制在2μm;將切片好的組織進(jìn)行免疫組化染色,采用3%過(guò)氧化氫溶液在37℃孵育10 min,采用蒸餾水沖洗3 min,采用高壓鍋修復(fù)2 min(溫度控制在110℃),采用PBS洗滌5 min,常溫下孵育2 h,使用PBS洗滌,加入U(xiǎn)ltrasen SitiveTMSP試劑,孵育后DBA顯色,最后使用樹膠進(jìn)行封固[6-7]。

    1.3 觀察指標(biāo)

    對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷,包括甲胎蛋白(AFP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3)等,組織免疫組化技術(shù)染色呈棕黃色為陽(yáng)性,反之則為陰性[8]。采用我院自擬問(wèn)卷調(diào)查表對(duì)患者診斷后相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分,包括心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感等,評(píng)分越高,表示檢查方法對(duì)患者產(chǎn)生的影響越小,檢查依從性越高。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示,采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組診斷陽(yáng)性率及滿意度的比較

    實(shí)驗(yàn)組免疫組化染色后,患者細(xì)胞結(jié)構(gòu)為變異型,AFP及glypican-3表達(dá)異常者為24例,陽(yáng)性率為85.7%,顯著高于對(duì)照組(14例,50.0%);實(shí)驗(yàn)組滿意率為82.1%,顯著高于對(duì)照組(57.1%),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表 1)。

    表1 兩組診斷陽(yáng)性率及滿意度的比較[n(%)]

    2.2 兩組診斷后相關(guān)評(píng)分的比較

    實(shí)驗(yàn)組診斷后心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感評(píng)分均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(表 2)。

    表2 兩組診斷后相關(guān)評(píng)分的比較(分,

    表2 兩組診斷后相關(guān)評(píng)分的比較(分,

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    3 討論

    近年來(lái),免疫組化技術(shù)被廣泛應(yīng)用于腫瘤患者病理診斷中,且效果理想[9-10]。本研究顯示,實(shí)驗(yàn)組免疫組化染色后,患者細(xì)胞結(jié)構(gòu)為變異型,AFP及glypican-3表達(dá)異常者為24例,陽(yáng)性率為85.7%,顯著高于對(duì)照組(14 例,50.0%)(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組滿意率為82.1%,顯著高于對(duì)照組(57.1%)。免疫組化技術(shù)和常規(guī)技術(shù)相比優(yōu)勢(shì)較多,該方法在診斷過(guò)程通過(guò)觀察組織切片中抗原的數(shù)量級(jí)在組織中的分布情況,對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性以及定量的研究,由于抗原和抗體特異性結(jié)合,因此,臨床上通過(guò)免疫組化來(lái)標(biāo)記抗體使其顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)的抗原[11]。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類:組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本,其中制作組織標(biāo)本中最常用、最基本的方法就是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好,更加有利于各種染色的對(duì)照觀察,有利于切片組織長(zhǎng)時(shí)間保存;同時(shí),石蠟切片過(guò)程中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)的抗原暴露能夠產(chǎn)生一定的影響,可以對(duì)切片組織進(jìn)行修復(fù)[12]。并且,免疫組化診斷技術(shù)的使用并不會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生傷害,能夠消除患者內(nèi)心診斷前的負(fù)面心理,提高患者診斷配合率。

    為了有效提高診斷正確率,降低假陽(yáng)性率的發(fā)生,免疫組化技術(shù)使用過(guò)程中必須嚴(yán)格遵循以下步驟操作。①組織固定:對(duì)采集組織固定時(shí)主要使用10%中性緩沖甲醛固定液,這種固定液和其他固定液相比具有固定好、固定時(shí)間長(zhǎng)久等優(yōu)點(diǎn),并且組織3個(gè)月內(nèi)陽(yáng)性率比較穩(wěn)定。②烤片:對(duì)組織進(jìn)行烤片時(shí)應(yīng)該放置在適宜的溫度,通常放在60~68℃的恒溫箱中進(jìn)行加熱,加熱時(shí)要避免溫度過(guò)高[13]。③抗原修復(fù):對(duì)組織進(jìn)行抗原修復(fù)時(shí)應(yīng)該控制修復(fù)時(shí)間在8 min,然后斷開,讓切片自然冷卻,然后開始染色。④染色:免疫組化技術(shù)進(jìn)行染色時(shí)應(yīng)該對(duì)蘇木精進(jìn)行反復(fù)染色,避免染色顏色過(guò)深,影響診斷結(jié)果。同時(shí),免疫組化技術(shù)顯色屬于是一種化學(xué)反應(yīng)——酶促反應(yīng),該反應(yīng)能夠和抗原-抗體復(fù)合物中的堿性磷酸酶以及過(guò)氧化物酶等發(fā)生反應(yīng),從而形成有顏色的復(fù)合物,并在組織和細(xì)胞抗原時(shí)間進(jìn)行沉淀。但是,由于腫瘤類型相對(duì)較多,不同組織標(biāo)本來(lái)源不同,其抗原的含量也不同,顯色反應(yīng)時(shí)間上會(huì)存在差異[14]。

    因此,免疫組化技術(shù)在進(jìn)行染色時(shí)應(yīng)該注意以下幾個(gè)方面:①染色過(guò)程中必須保持切片處于濕潤(rùn)狀態(tài);②孵育時(shí)應(yīng)該嚴(yán)格控制孵育盒中蒸餾水量;③孵育時(shí)應(yīng)該保證孵育盒整體的平整,保證抗體液體均勻,避免抗體液體流入組織內(nèi),降低假陰性的發(fā)生率[15]。同時(shí),臨床上采用免疫組化技術(shù)診斷時(shí)能夠消除患者內(nèi)心的恐懼、害怕心理,降低患者病理診斷時(shí)的風(fēng)險(xiǎn),提高患者診斷依從性[16]。本次研究中,實(shí)驗(yàn)組診斷后心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感評(píng)分均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

    筆者認(rèn)為,免疫染色組化技術(shù)的正確診斷和鑒定必須依靠免疫組化染色切片作為前提和基礎(chǔ),診斷時(shí)要加強(qiáng)醫(yī)生和技術(shù)員之間的相互協(xié)調(diào)、相互配合、共同努力才能夠保證免疫組化染色切片的順利完成。但是,臨床上采用免疫染色組化技術(shù)診斷時(shí)尚存在不足,如假陽(yáng)性、假陰性等。臨床上對(duì)于進(jìn)行病理診斷的患者在常規(guī)穿刺的基礎(chǔ)上聯(lián)合免疫組化技術(shù)診斷,可發(fā)揮不同診斷方法的優(yōu)勢(shì),提高臨床確診率,為患者后續(xù)的診斷、治療等提供科學(xué)依據(jù)。

    綜上所述,腫瘤患者進(jìn)行病理診斷時(shí)實(shí)施免疫組化技術(shù)診斷效果理想,能夠有效提高診斷陽(yáng)性率,且診斷時(shí)患者痛苦相對(duì)較小,值得推廣。

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