鹽酸哌甲酯速溶膜抗疲勞作用及其機(jī)制的研究

張利紅1，2，徐平華2，武 娜1，2，沈成英2，袁海龍2，韓 晉2（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330000；2.解放軍302醫(yī)院，北京 100039）

·論著·

鹽酸哌甲酯速溶膜抗疲勞作用及其機(jī)制的研究

張利紅1，2，徐平華2，武 娜1，2，沈成英2，袁海龍2，韓 晉2（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330000；2.解放軍302醫(yī)院，北京 100039）

目的研究鹽酸哌甲酯（methy l phenidate hydrochlor ide，MPH）口腔速溶膜（oral fast dissol ving f i lms，OFDF）抗疲勞作用及其機(jī)制。方法將60只小鼠隨機(jī)分為6組：正常對照組（生理鹽水）、游泳對照組（生理鹽水）、益氣養(yǎng)血口服液陽性組（7mg／kg）、MPH-OFDF高、中、低劑量組（5.2、2.6、1.3mg／kg）。正常對照組、游泳對照組及陽性組小鼠予以灌胃，其他組小鼠每天舌下給藥1次，連續(xù)15d，末次給藥30min后進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，記錄小鼠游泳至力竭的時(shí)間，并檢測小鼠血清乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）和三酰甘油（TG）水平。結(jié)果與游泳對照組比較，高、中劑量MPH-OFDF可顯著延長小鼠的力竭性游泳時(shí)間（P＜0.05，P＜0.01），降低小鼠血清中LDH、CK水平（P＜0.05，P＜0.01），且中劑量MPH能降低小鼠血清的TG含量（P＜0.05）。結(jié)論MPH-OFDF具有明顯的抗疲勞作用，其機(jī)制可能與降低血清LDH、CK及TG含量有關(guān)。

鹽酸哌甲酯速溶膜；抗疲勞；負(fù)重游泳；乳酸脫氫酶；肌酸激酶；三酰甘油

鹽酸哌甲酯（methylphenidate hydrochloride，MPH）是一種人工合成的中樞神經(jīng)興奮劑，類擬交感神經(jīng)作用藥，能直接興奮延髓，改善精神活動，解除輕度抑郁及疲勞感［1］。目前，MPH是注意力缺陷、多動障礙（attention-deficit hyperactivity disorder，ADHD）的一線治療藥物［2］。臨床研究表明，MPH對癌癥及慢性疲勞綜合征患者的疲勞感具有緩解作用［3-5］?？谇凰偃苣╫ral fast dissolving films，OFDF）是一種新型藥物傳遞系統(tǒng)、載藥多聚體膜劑，將其置于舌上，可在1m in內(nèi)溶解，且在唾液中能快速溶解、釋放藥物，具有良好的口服順應(yīng)性［6］。本研究利用自制的MPH-OFDF，擬對其抗疲勞作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，并初步評價(jià)其作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器 YP-AFA-Ⅲ型烘干式刮刀涂膜機(jī)（上海亞培實(shí)業(yè)有限公司），101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京中興偉業(yè)儀器有限公司），數(shù)顯外徑千分尺（上海益宇機(jī)械科技有限公司），游泳箱（42cm×27cm× 19cm），TGL-16GB型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），BS-120型生化分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）。

1.2 藥物與試劑 MPH原料藥（武漢宏信康精細(xì)化工有限公司，批號：20140411，含量＞98%）；羥丙甲基纖維素E15（HPMC-E15）、低取代羥丙基纖維素（L-HPC）、微晶纖維素（MCC，北京鳳禮精求商貿(mào)有限責(zé)任公司，批號：201403037、20140448、6610141712）；聚乙二醇400（PEG 400，西隴化工股份有限公司，批號：140427）；超純水，自制；益氣養(yǎng)血口服液（規(guī)格：10m l／支，吉林龍?zhí)┲扑幑煞萦邢薰?，批號?0140217）；MPH-OFDF（自制）；乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、三酰甘油（TG）試劑盒（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，批號：142714012、142514015、141714028）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物 昆明種小鼠，SPF級，20～23g，雄性，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供（動物合格證號：SCXK-（軍）2012-004）。飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室為解放軍302醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)中心，溫度保持在25℃，相對濕度為40%～70%。

2 方法

2.1 MPH-OFDF的制備 采用溶劑澆鑄法制備MPH-OFDF。將6%（g／m l）HPMC-E15加入到溫度為50℃的純化水中，攪拌使其均勻分散，靜置1h。依次加入6%（g／ml）PEG400、0.22%（g／m l）MPH，超聲，使藥物充分溶解，最后加入0.15%（g／m l）MCC和0.5%（g／m l）L-HPC。待體系均勻后，真空脫去氣泡，然后倒入涂膜機(jī)涂膜（厚度100μm），將涂抹玻璃板放入電熱鼓風(fēng)干燥箱（50℃），完全干燥脫膜后，切割至規(guī)格大?。?cm×2cm）MPH-OFDF（0.25mg／cm2），即為本品速溶膜片。

2.2 分組與給藥 取健康小鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對照組、游泳對照組、益氣養(yǎng)血口服液陽性組、MPHOFDF低、中、高劑量組。其中，正常對照組、游泳對照組給予生理鹽水灌胃；陽性組給予益氣養(yǎng)血口服液（7mg／kg）灌胃；將MPH-OFDF剪成所需大小，低、中、高劑量組分別舌下給藥1.3、2.6、5.2mg／kg，每日給藥1次，連續(xù)給藥15d。

2.3 小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn) 小鼠末次給藥30mi n后，除正常對照組外，將其余各組小鼠尾部分別栓上重量為其體重5%的鐵夾進(jìn)行負(fù)重游泳，用尺子不斷輕輕攪動水面使小鼠不停游動，以小鼠沉入水后10s不能上浮并且將其放在平面上時(shí)無法完成翻正反射為力竭標(biāo)志［7，8］，記錄小鼠的力竭性游泳時(shí)間。

2.4 LDH、CK、TG的測定 游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)束20mi n后，于小鼠眼眶取血約0.5m l，備用。血液以3000r／min的速度離心15min，分離出血清，吸取100μl，加適量生理鹽水稀釋，全自動生化分析儀測定LDH、CK和TG值。

3 結(jié)果

3.1 MPH-OFDF對小鼠力竭性游泳時(shí)間的影響 與游泳對照組比較，陽性組、MPH-OFDF高、中劑量組小鼠游泳至力竭的時(shí)間均顯著延長（P＜0.05，P＜0.01），低劑量組無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果表明，MPH-OFDF能夠顯著延長小鼠游泳至力竭的時(shí)間，即具有抗疲勞作用，但其作用高劑量組不及中劑量組（表1）。

表1 MPH-OFDF對小鼠力竭性游泳時(shí)間的影響

3.2 MPH-OFDF對小鼠血清中LDH、CK及TG的影響 與正常對照組比較，游泳對照組小鼠血清中LDH、CK和TG的含量均顯著增加（P＜0.01）；與游泳對照組比較，陽性組、MPH高、中劑量組小鼠血清中的LDH和CK含量均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），MPH中劑量組小鼠血清中的TG含量明顯降低（P＜0.05）。結(jié)果表明，MPH的抗疲勞作用可能與降低血清中的LDH、CK及TG含量有關(guān)。結(jié)果見表2。

表2MPH-OFDF對游泳力竭小鼠血清中LDH、CK和TG的影響

4 討論

臨床上常用的抗疲勞藥物分為中藥和化學(xué)藥物兩類，抗疲勞中藥多以滋補(bǔ)氣血為主，副作用相對較小，但活性成分及作用機(jī)制等均不明確，如紅景天、西洋參、人參等；抗疲勞化學(xué)藥物多為大腦皮質(zhì)興奮藥，能增強(qiáng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，因此可用于預(yù)防或治療中樞抑制，發(fā)揮抗疲勞作用，提高連續(xù)工作能力，但該類藥物（如咖啡因、苯丙胺等）多具有成癮性，副作用較大［9，10］。本實(shí)驗(yàn)通過觀察小鼠力竭性游泳時(shí)間，測定血清中LDH、CK和TG的水平，初步評價(jià)了MPH-OFDF的抗疲勞作用及其機(jī)制。

正常情況下，LDH、CK存在于肌細(xì)胞中，兩者均為大分子蛋白質(zhì)，不能直接進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。運(yùn)動介導(dǎo)的氧化應(yīng)激可使機(jī)體氧自由基大量生成，自由基攻擊細(xì)胞膜、線粒體膜，使細(xì)胞和細(xì)胞器受到損傷，細(xì)胞內(nèi)容物（LDH、CK）可通過損傷的細(xì)胞膜大量釋放流入血液中，引發(fā)機(jī)體離子和細(xì)胞代謝功能紊亂、耐力下降，從而引發(fā)機(jī)體疲勞［11］。而脂肪動員可以節(jié)約糖原，維持血糖穩(wěn)態(tài)，增強(qiáng)運(yùn)動時(shí)脂肪的氧化代謝能力，可以減少肌糖原的損耗，增強(qiáng)肌肉的運(yùn)動耐力，從而延緩疲勞的發(fā)生［12］。

研究結(jié)果顯示，中、高劑量MPH-OFDF能有效延長小鼠力竭性游泳的時(shí)間，增加小鼠的游泳耐力，維持肌細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，增強(qiáng)肌肉的運(yùn)動耐力，降低血清的LDH、CK以及TG的水平。研究結(jié)果表明，MPH-OFDF具有明顯的抗疲勞作用，其機(jī)制可能與降低血清的LDH、CK及TG含量有關(guān)。

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Study of anti-fatigue effect of methylphenidate hydrochloride oral fast dissolving films and itsmechanism

ZHANG Lihong1，2，XU Pinghua2，WU Na1，2，SHEN Chengying2，YUAN Hailong2，HAN Jin2（1.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330000，China；2.No.302Hospital of PLA，Beijing 100039，China）

ObjectiveTo study the anti-fatigue effectofmethylphenidate hydrochloride oral fast dissolving films（MPHOFDF）and itsmechanism.Methods60micewere random ly divided into 6groups as：normal controlgroup（physiological saline），model group（physiological saline），Yiqiyangxue oral liquids positive group（7.00mg／kg），MPH-OFDF high-dose group（5.20mg／kg），MPH-OFDFmiddle-dose group（2.60mg／kg）and MPH-OFDF low-dose group（1.30mg／kg）.Besides the normal control group，model group and positive group were orally administered，the other groups are administered with the drug once daily sublingually daily for consecutive 15days.Themicewere put in the load-weighted swimming test 30min after the last oral administration，then the anti-fatigue effectwas assessed based on recording exhausting sw imm ing time and detecting the levels of serum lactale dehydrogenase（LDH），creatine kinase（CK），triglycerides（TG）inmice.ResultsCompared w ith control group，them iddle-dose and the high-dose MPH could prolong the exhausting sw imm ing time（P＜0.05，P＜0.01）and decrease the activity of LDH and CK significantly（P＜0.05，P＜0.01）；in addition them iddle-dose MPH could decrease the content of TG（P＜0.05）.ConclusionThe MPH had marked anti-fatigue ef fect thatmay be associated w ith reduced serum LDH，CK and TG.

methylphenidate hydrochloride；anti-fatigue；load-weighted sw imm ing test；lactate dehydrogenase；creatine kinase；triglycerides

A

1006-0111（2015）06-0522-03

10.3969／j.issn.1006-0111.2015.06.011

重大新藥創(chuàng)制（No.2013ZX09J13109-06C）

張利紅，碩士研究生.研究方向：藥物新制劑、新劑型、新技術(shù)研究.E-mail：1109249936＠qq.com

韓 晉，碩士，博士生導(dǎo)師.研究方向：醫(yī)院藥學(xué).Tel：（010）66933225；E-mail：hanjin302emba＠163.com

2015-03-20

2015-07-25［本文編輯］李睿旻