老年高脂血癥患者SCAP基因單核苷酸多態(tài)性的研究

王偉 羅蓉 李延武 李卓成

老年高脂血癥患者SCAP基因單核苷酸多態(tài)性的研究

王偉 羅蓉 李延武 李卓成

目的 研究老年人群中甾醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)單核苷酸多態(tài)性, 分析基因型及血脂水平與高脂血癥之間的關(guān)聯(lián)性。方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)的分析方法, 檢測(cè)66例老年高脂血癥患者(高脂血癥組)和100例老年體檢健康者(對(duì)照組)的SCAP基因Ile796Val的等位基因頻率。結(jié)果 高脂血癥組、對(duì)照組等位基因A的頻率分別為0.48、0.32,等位基因G的頻率分別為0.52、0.68。高脂血癥組與對(duì)照組之間的基因型和等位基因的頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 SCAP基因單核苷酸多態(tài)性導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂, 等位基因A可能是高脂血癥的一個(gè)危險(xiǎn)因子。

甾醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合蛋白裂解激活蛋白；單核苷酸多態(tài)性；高脂血癥

1 資料與方法

1.1 一般資料 老年對(duì)照組：本院老年體檢健康者隨機(jī)選取100例, 男47例, 女53例, 年齡61～78歲, 臨床檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)均正常。高脂血癥組：本院住院患者66例,男35例, 女31例, 年齡64～82歲, 膽固醇＞6.0 mmol/L, 甘油三酯(TG)＞2.0 mmol/L；以上兩組均排除肝臟、腎臟、內(nèi)分泌等影響血脂代謝的疾病。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 受檢者空腹靜脈采血2份, 1份血清檢測(cè)血漿脂質(zhì)及載脂蛋白的水平, 另一份EDTA抗凝, 采用Fermentas DNA抽提試劑盒, 按說明書操作提取外周血基因組DNA。利用軟件Primer 5.0設(shè)計(jì)引物以擴(kuò)增SCAP基因。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用MslI內(nèi)切酶進(jìn)行酶切。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物均采用8%PAGE電泳, 然后用銀染方法進(jìn)行顯色。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件完成。組間基因型、等位基因頻率的比較采用χ2檢驗(yàn)；不同基因型及組間的血脂水平以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示,采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因多態(tài)性分析 SCAP基因16外顯子單核苷酸多態(tài)性, 表現(xiàn)為796密碼子的Ile/Val的氨基酸替換, 若該位點(diǎn)為ATC, 則存在MslI酶切位點(diǎn)(…CATCTGCGTG…), 經(jīng)過MslI酶切后產(chǎn)生158bp和77bp兩條片段；若該位點(diǎn)為GTC, 則不能被MslI酶切而為1條235bp片段。SCAP基因Ile796Val的AA基因型有158bp和77bp兩條帶；GG型僅1條235bp電泳帶；AG型有235bp、158bp、77bp 3條帶。

2.2 SCAP基因Ile796Val基因型及等位基因頻率比較 本組中國廣東地區(qū)人群中, SCAP基因型分布符合Hardy-winberg平衡, 均有群體代表性。高脂血癥組和對(duì)照組等位基因A的頻率分別為0.48、0.32, 等位基因G的頻率分別為0.52、0.68。高脂血癥組和對(duì)照組之間的基因型和等位基因的頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 且高脂血癥組等位基因A的頻率顯著性升高(P＜0.05)。見表1。

表1 SCAP基因Ile796Val(A/G)基因型頻率和等位基因頻率

2.3 SCAP基因Ile796Val多態(tài)性與血漿脂質(zhì)及載脂蛋白的關(guān)系 高脂血癥組TC［AA(6.87±0.86)mmol/L、AG(6.27±1.52) mmol/L、GG(5.31±1.29)mmol/L］、LDL-C［AA(3.77±0.75)mmol/L、AG(3.90±1.16)mmol/L、GG(3.86±0.98)mmol/L］水平均高于正常對(duì)照組TC［AA(3.80±0.21)mmol/L、AG(4.42±0.94)mmol/ L、GG(4.25±0.82)mmol/L］、LDL-C［AA(2.05±1.88)mmol/L、AG(2.48±0.07)mmol/L、GG(2.57±0.73)mmol/L］(P＜0.05), 而其他血脂指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。高脂血癥患者中AA基因型與GG基因型的TC和LDL-C水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

Wang等［3］1994年報(bào)道, 在膽固醇反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)中的膜結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子SREBP起重要的作用, 控制著膽固醇合成和血漿脂質(zhì)蛋白中受體介導(dǎo)的攝入過程。SCAP是SREBP的重要調(diào)節(jié)因子, 通過刺激轉(zhuǎn)錄因子SREBP的裂解, 調(diào)控著SREBPs蛋白的水解反應(yīng)。由SCAP激活的水解作用使SREBP的活性片段從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上釋放出來, 進(jìn)入細(xì)胞核后發(fā)揮轉(zhuǎn)錄作用, 從而控制著動(dòng)物內(nèi)的脂質(zhì)代謝合成。

近年來關(guān)于SCAP的結(jié)構(gòu)和功能已引起國內(nèi)外學(xué)者的注意［1-4］, 但是國內(nèi)對(duì)SCAP基因單核苷酸多態(tài)性及點(diǎn)突變鮮有研究。本實(shí)驗(yàn)采用PCR-RFLP的方法, 檢測(cè)了100例老年體檢健康者和66例高脂血癥患者, 檢出等位基因A頻率分別為0.32、0.48, 等位基因G頻率分別為0.68、0.52, 高脂血癥組SCAP基因單核苷酸多態(tài)性AA、AG、GG基因型和等位基因A/G的頻率與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在高脂血癥組中AA基因型與GG基因型TC和LDL-C水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 并且AA基因型的TC水平顯著性升高, 這說明該SNP與膽固醇水平有關(guān)聯(lián), 并與高脂血癥密切相關(guān)。Hua等［1］研究發(fā)現(xiàn), SCAP基因在膽固醇敏感區(qū)域的點(diǎn)突變(如D443N和Y298C), 將導(dǎo)致甾醇抑制作用的耐受,血漿高膽固醇將會(huì)在動(dòng)脈血管中堆積, 最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。這說明SCAP基因變異是膽固醇代謝調(diào)節(jié)的內(nèi)在遺傳機(jī)制, 同時(shí)也是引起血脂水平和組織中脂質(zhì)代謝紊亂的因素之一。本研究初步證實(shí)了SCAP基因Ile796Val多態(tài)性與高脂血癥密切相關(guān), 其中等位基因A具有較高的血漿膽固醇水平, 由此推斷等位基因A可能是高脂血癥的一個(gè)危險(xiǎn)因子。但是對(duì)照組不同基因型之間血漿血脂水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 這可能與研究標(biāo)本量不大有關(guān), 在正常人群中該SNP與血脂的關(guān)系有待臨床大樣本研究的進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述, SCAP基因Ile796Val多態(tài)性對(duì)于高脂血癥的遺傳學(xué)研究具有重要意義, SCAP對(duì)膽固醇的具體調(diào)節(jié)機(jī)制還有待于進(jìn)一步深入研究。

［1］ Hua X, Nohturfft A, Goldstein JL, et al.Sterol resistance in CHO cells traced to point mutation in SREBP cleavage-activating protein.Cell, 1996, 87(3):415-426.

［2］ Iwaki K, Nakajima T, Ota N, et al.A commom Ile796Val polymorphism of the human SREBP cleavage-activating protein (SCAP) gene.J Hum Genet, 1999, 44(6):421-422.

［3］ Wang XD, Sato R, Brown MS, et al.SREBP-1, A membrancebound transcription factor released by sterol-regulated proteolysis.Cell, 1994, 77(1):53-62.

［4］ Arazi SS, Genvigir FD, W illrich MA, et al.Atorvastatin effects on SREBF1a and SCAP gene expression in mononuclear cells and its relation with lowering-lipids response.Clin Chim Acta, 2008, 393(2):119-124.

Research of single nucleotide polymorphism in SCAP gene of senile hyperlipidaem ia patients

WANG Wei, LUO Rong, LI Yan-wu, et al.Department of Inspection, Shenzhen City the Second People’s Hospital, Shenzhen 518035, China

Ob jective To research single nucleotide polymorphism in SREBP cleavage-activating protein (SCAP) gene of senile hyperlipidaemia patients, and to analyze correlation in gene type, blood lipid level, and hyperlipidaemia.M ethods Polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphisms (PCR-RFLP) was applied to detect allele frequency of Ile796Val in SCAP gene of 66 senile hyperlipidaem ia patients (hyperlipidaem ia group) and 100 healthy old people (control group).Results Frequency of allele A in hyperlipidaemia group and control group were respectively 0.48 and 0.32, and that of allele C were 0.52 and 0.68.There were statistical significant differences of gene type and allele frequency between hyperlipidaemia group and control group (P＜0.05).Conclusion Single nucleotide polymorphism of SCAP gene will cause lipid metabolism disorders, and allele A may be one of the high risk factors of hyperlipidaemia.

SREBP cleavage-activating protein; Single nucleotide polymorphism; Hyperlipidaemia高脂血癥在老年人群中尤為常見, 以血漿膽固醇異常改變?yōu)樘卣鞯闹x紊亂是動(dòng)脈硬化性心血管疾病的重要致病因素之一。甾醇調(diào)節(jié)因子結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein, SCAP)是動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)膽固醇合成和攝取的重要調(diào)節(jié)因子。SCAP基因研究最早見于1996年報(bào)道［1］, 眾多研究表明人類SCAP基因遺傳變異將會(huì)導(dǎo)致血漿脂質(zhì)代謝改變和組織中脂質(zhì)代謝紊亂［2-4］。為了研究老年人群SCAP基因多態(tài)性與血漿血脂及高脂血癥的關(guān)系, 作者應(yīng)用PCR-RFLP方法檢測(cè)SCAP基因Ile796Val多態(tài)性。選取60歲以上老年人166例, 其中66例高脂血癥者和100例體檢健康者, 探討老年人群SCAP基因單核苷酸多態(tài)性及與高脂血癥之間的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.15.026

2015-01-12］

深圳市科創(chuàng)委(項(xiàng)目編號(hào)：JCYJ20130401104112197)

518035 深圳市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

李卓成