意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平

王圣偉 胥保華 王紅芳（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安271018）

意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平

王圣偉 胥保華 王紅芳?
（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安271018）

摘 要:本試驗(yàn)旨在研究意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平。選取576只1日齡的工蜂幼蟲，隨機(jī)分為6組，每組96只幼蟲，對(duì)照飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂添加0.02%、0.04%、0.06%、0.08%和0.10%亞油酸的飼糧，試驗(yàn)期7 d。結(jié)果表明:1）與對(duì)照組相比，飼糧添加0.10%亞油酸顯著降低了化蛹率（P＜0.05）。2）與對(duì)照組相比，飼糧添加0.04%亞油酸顯著提高了5日齡蟲體蛋白質(zhì)濃度（P＜0.05）；飼糧中添加0.10%亞油酸顯著降低了7日齡蛹蛋白質(zhì)濃度（P＜0.05）。3）與對(duì)照組相比，飼糧添加0.02%亞油酸對(duì)6日齡蟲體的過氧化物酶增殖物激活受體（PPAR）α活性有顯著的抑制作用（P＜0.05），添加0.08%的亞油酸則顯著提高了6日齡蟲體PPARα和PPARγ活性。4）與對(duì)照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%亞油酸顯著提高了6日齡蟲體脂肪酸合成酶（FAS）活性（P＜0.05）；添加0.08%亞油酸顯著提高了5日齡蟲體乙酰輔酶A羧化酶（ACC）濃度（P＜0.05），添加0.06%和0.10%亞油酸顯著提高了6日齡蟲體ACC濃度（P＜0.05）。5）飼料中添加本試驗(yàn)設(shè)定范圍的亞油酸對(duì)幼蟲FAS和ACC基因相對(duì)表達(dá)量無顯著影響（P＞0.05）。綜合化蛹率和蟲體蛋白質(zhì)濃度2個(gè)指標(biāo)的擬合曲線結(jié)果，認(rèn)為意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平為0.024%～0.037%。

關(guān)鍵詞:亞油酸；意大利蜜蜂；適宜添加水平；化蛹率；蛋白濃度；脂肪代謝

亞油酸是動(dòng)物體內(nèi)最重要的必需脂肪酸之一，研究發(fā)現(xiàn)亞油酸不僅可以為蜜蜂提供能量，而且會(huì)直接影響其生長(zhǎng)和繁殖［1］。微生物是使昆蟲致病的主要因素，脂肪酸具有抑制細(xì)菌和真菌活性的作用，癸酸、月桂酸（十二烷酸）、肉豆蔻酸、亞油酸、亞麻酸等一系列脂肪酸都具有抗微生物作用［2］。另外，有研究認(rèn)為蜜蜂腸道中高濃度的亞油酸和亞麻酸對(duì)蜜蜂抵抗細(xì)菌、真菌感染具有重要作用［3－4］。Manning等［5］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中脂肪酸的含量和昆蟲的壽命有緊密的聯(lián)系，飼糧中脂肪酸含量過高或過低都會(huì)降低蜜蜂的壽命，當(dāng)飼糧中亞油酸含量高于6%或者油酸含量高于2%時(shí)，蜜蜂的壽命會(huì)顯著縮短，而當(dāng)飼糧中缺乏脂肪酸時(shí)，蜜蜂的壽命也會(huì)降低。飼糧中的多不飽和脂肪酸（PUFA）對(duì)脂肪酸的生化合成和氧化有獨(dú)特的調(diào)控作用，PUFA對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控至少存在2種機(jī)制:1）過氧化物酶增殖物激活受體（PPARs）依賴機(jī)制，如誘導(dǎo)編碼乙酰基輔酶A氧化酶（AOX）的基因表達(dá)；2）PPARs非依賴機(jī)制［6］。PPARs是調(diào)節(jié)目標(biāo)基因表達(dá)的核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子超家族成員［7］，其存在幾種不同的亞型，分別為PPARα、PPARβ及PPARγ1和PPARγ2，由3種獨(dú)立的基因編碼3種不同的PPARs（PPARα、PPARβ、PPARγ）。PPARs是類固醇受體族中的一員，與族中其他受體一樣，具有1個(gè)DNA結(jié)合域和1個(gè)配體結(jié)合域。配體結(jié)合域是與脂肪酸等配體結(jié)合的部分，配體與受體的這種結(jié)合可活化受體（即PPARs）；DNA結(jié)合域是與基因上的DNA與特異反應(yīng)元件相結(jié)合的部分，通過這種特異性結(jié)合調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄［8］。近年來研究發(fā)現(xiàn)脂肪酸可以調(diào)控一些編碼代謝關(guān)鍵酶的基因表達(dá)，對(duì)脂肪酸的生化合成和氧化起獨(dú)特的調(diào)控作用。李琪玲等［9］研究發(fā)現(xiàn)，連續(xù)給予小鼠灌胃共軛亞油酸（CLA）4周，發(fā)現(xiàn)飼喂CLA的小鼠肝臟中脂肪酸合成酶（FAS）含量顯著降低；Zhou等［10］、Pariza等［11］也發(fā)現(xiàn)，CLA能抑制豬皮下脂肪FAS的表達(dá)，進(jìn)而降低皮下脂肪沉積，但CLA對(duì)肌內(nèi)脂肪FAS的表達(dá)卻起到了促進(jìn)作用，增加了肌內(nèi)脂肪的沉積。另外，脂肪酸不僅對(duì)FAS的表達(dá)有影響，同時(shí)也可以調(diào)節(jié)乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的轉(zhuǎn)錄，Iritani等［12］在培養(yǎng)的肝細(xì)胞中添加紫蘇籽油（富含PUFA），ACC mRNA的豐度顯著降低。這充分說明了脂肪酸不僅是供能物質(zhì)和生物膜的重要組成部分，而且可通過調(diào)節(jié)脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)而發(fā)揮重要的生理功能。但關(guān)于亞油酸對(duì)蜜蜂幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育與脂肪代謝影響的研究鮮有報(bào)道，而且在人工飼養(yǎng)條件下，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于亞油酸在蜜蜂飼糧中的適宜添加水平還沒有明確的參考標(biāo)準(zhǔn)。本文擬通過體外幼蟲培養(yǎng)試驗(yàn)，研究飼糧中亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂工蜂幼蟲化蛹時(shí)體重、化蛹率、蟲體蛋白質(zhì)濃度、幼蟲FAS活性、ACC濃度及其基因表達(dá)的影響，以期確定適合工蜂幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育的最適亞油酸添加水平，同時(shí)為亞油酸對(duì)蜜蜂乃至昆蟲脂類代謝作用機(jī)制的深入研究提供參考。

1　材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼糧

在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0（對(duì)照組）、0.02%、0.04%、0.06%、0.08%和0.10%的亞油酸，制成6種試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)飼糧的組成見表1。

表1　試驗(yàn)飼糧組成Table 1 Composition of experimental diets　%

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)分2批飼養(yǎng)，每一批都選取576只1日齡意大利蜜蜂工蜂幼蟲，隨機(jī)分為6組，每組96只。第1批用于蛋白質(zhì)濃度、酶活性和基因表達(dá)量的測(cè)定，第2批用來測(cè)定幼蟲化蛹時(shí)體重和化蛹率。將幼蟲置于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板中飼養(yǎng)，培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中（35℃、相對(duì)濕度90%），試驗(yàn)期間每天飼喂1次，每孔每次飼喂150 μL。幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育過程見圖1。

1.3 樣品采集與制備

飼養(yǎng)至5～7日齡時(shí)采集樣品，每天從每組中隨機(jī)抽取6只蜜蜂幼蟲。稱重后，－80℃保存用于后續(xù)指標(biāo)檢測(cè)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.4.1 化蛹時(shí)體重的測(cè)定

把幼蟲轉(zhuǎn)移至化蛹板時(shí)，用電子天平稱重并記錄數(shù)據(jù)。

1.4.2 化蛹率的測(cè)定

從飼養(yǎng)第1天開始，每天觀察記錄幼蟲的死亡情況，將死亡個(gè)體移除，直至未死亡幼蟲全部化蛹，記錄化蛹個(gè)數(shù)。

化蛹率（%）＝100×化蛹個(gè)數(shù)/幼蟲總數(shù)。

圖1　幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育過程Fig.1 Larval growth and development process

1.4.3 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定

取幼蟲加入適量生理鹽水，制成1%組織勻漿，采用A045?2總蛋白定量測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所生產(chǎn)）測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

1.4.4 PPARs和脂肪代謝相關(guān)酶活性的測(cè)定

每測(cè)定1種酶活性，取10%組織勻漿10 μL，采用蜜蜂酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒（北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）測(cè)定。

1.4.5 脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)量的測(cè)定

采用Trizol法提取總RNA，并用微量分光光度計(jì)檢測(cè)所提RNA的濃度和純度。用Prime?ScriptTMRT Reagent Kit（TaKaRa:DRR037A）將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。委托上海生工生物工程公司設(shè)計(jì)并合成RT?PCR引物。采用SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒（TaKaPa:DRR420A）進(jìn)行目的基因的相對(duì)定量檢測(cè)，反應(yīng)體系為20 μL。反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性10 s，循環(huán)數(shù)為1；95℃變性5 s，60℃退火40 s，循環(huán)數(shù)為40，添加熔解曲線，循環(huán)數(shù)為1。

表2　RT?PCR引物序列Table 2 Primer sequences for RT?PCR

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用SAS 9.1統(tǒng)計(jì)軟件的ANO?VA程序進(jìn)行單因素方差分析，以Duncan氏法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，通過回歸分析對(duì)劑量－效應(yīng)關(guān)系作二次曲線擬合，根據(jù)二次方程計(jì)算最適添加水平。P＜0.05代表差異顯著。

2　結(jié)果與分析

2.1 飼糧亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂工蜂幼蟲化蛹時(shí)體重和化蛹率的影響

結(jié)果（表3）顯示，飼糧亞油酸添加水平對(duì)工蜂幼蟲化蛹時(shí)的體重?zé)o顯著影響（P＞0.05），但對(duì)化蛹率有顯著影響（P＜0.05），其中飼糧亞油酸添加水平為0.10%時(shí)，較其他添加水平顯著降低了化蛹率（P＜0.05）。將化蛹率（Y）與飼糧亞油酸添加水平（X）進(jìn)行曲線擬合，得到曲線方程:Y＝－9 936.7X2＋479.67X＋91.969（R2＝0.895 2），由方程得出，當(dāng)亞油酸添加水平為0.024%時(shí)化蛹率最高。

2.2 飼糧亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂工蜂幼蟲蟲體蛋白質(zhì)濃度的影響

飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲蟲體蛋白質(zhì)濃度的影響如表4所示。對(duì)于5日齡幼蟲，亞油酸添加水平為0.04%時(shí)，蟲體蛋白質(zhì)濃度顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其他組與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）；飼糧亞油酸添加水平對(duì)7日齡蛹體蛋白質(zhì)濃度有顯著影響（P＜0.05），隨飼糧亞油酸添加水平的增加，7日齡蛹體蛋白質(zhì)濃度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，但是亞油酸添加水平為0.02%～0.08%時(shí)，與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05），僅亞油酸添加水平為0.10%時(shí)顯著抑制了蟲體蛋白質(zhì)的沉積（P＜0.05）。將蟲體蛋白質(zhì)濃度（Y）與飼糧亞油酸添加水平（X）進(jìn)行曲線擬合，得到如下曲線方程:Y＝－29.381X2＋2.148X＋0.416 1（R2＝0.884 3），由方程可知，當(dāng)亞油酸添加水平為0.037%時(shí)蟲體蛋白質(zhì)濃度最高。

表3　飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲化蛹時(shí)體重和化蛹率的影響Table 3 Effects of linoleic acid supplemental level on body weight when pupation and the percentage of pupation of larvae

表4　飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲蟲體蛋白質(zhì)濃度的影響Table 4 Effects of linoleic acid supplemental level on body protein concentration of larvae

2.3 飼糧亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂工蜂幼蟲脂肪代謝的影響

2.3.1 飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲PPARs活性的影響

由表5可以看出，飼糧亞油酸添加水平對(duì)6日齡幼蟲PPARα活性有顯著影響（P＜0.05）。0.02%組PPARα活性較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05），0.04%和0.08%組PPARα活性較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），0.06%和0.10%組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），但有升高的趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，僅0.08%組PPARγ的活性顯著提高（P＜0.05）。

2.3.2 飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響

如表6所示，飼糧亞油酸添加水平對(duì)5日齡幼蟲和7日齡蛹的FAS活性無顯著影響（P＞0.05），僅顯著影響了6日齡幼蟲的FAS活性（P＜0.05）。隨飼糧亞油酸添加水平的增加，6日齡幼蟲FAS活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，其中0.04%、0.06%、0.08%組的FAS活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），F(xiàn)AS活性的峰值出現(xiàn)在亞油酸添加水平為0.08%時(shí)，當(dāng)添加水平繼續(xù)增加至0.10%時(shí)，F(xiàn)AS活性又降低到與對(duì)照組相近的基礎(chǔ)水平。

表5　飼糧亞油酸水平對(duì)幼蟲PPARs活性的影響Table 5 Effects of linoleic acid supplemental level on PPARs activities of larvae　U/L

表6　飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲FAS活性的影響Table 6 Effects of linoleic acid supplemental level on FAS activity of larvae　U/mL

由表7可以看出，飼糧亞油酸添加水平僅對(duì)5 和6日齡幼蟲ACC濃度有顯著影響（P＜0.05），對(duì)7日齡蛹的ACC濃度無顯著影響（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，0.06%和0.08%的亞油酸能顯著提高5日齡幼蟲的ACC濃度（P＜0.05），但是僅0.08%的亞油酸提高了6日齡幼蟲的ACC濃度（P＜0.05）。

表7　飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲ACC濃度的影響Table 7 Effects of linoleic acid supplemental level on ACC concentration of larvae　ng/mL

2.3.3 飼糧亞油酸添加水平對(duì)脂肪代謝相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量的影響

由圖2可以看出，飼糧亞油酸添加水平對(duì)5、7日齡幼蟲FAS基因相對(duì)表達(dá)量的影響不顯著（P＞0.05）。

圖2　飼糧亞油酸添加水平對(duì)意蜂幼蟲FAS基因相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.2 Effects of linoleic acid supplemental level on FAS gene relative expression level of larvae

飼糧亞油酸添加水平對(duì)5日齡幼蟲ACC基因相對(duì)表達(dá)量的影響不顯著（P＞0.05）（圖3），對(duì)7日齡幼蟲來說，與對(duì)照組相比，0.02%組ACC基因相對(duì)表達(dá)量有上升的趨勢(shì)，0.04%和0.10%組有下降的趨勢(shì)，且0.02%組ACC基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于0.04%和0.10%組。

3　討 論

3.1 飼糧亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂工蜂幼蟲化蛹時(shí)體重和化蛹率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加不同水平的亞油酸對(duì)意蜂幼蟲化蛹時(shí)體重?zé)o顯著影響。目前關(guān)于亞油酸對(duì)昆蟲生長(zhǎng)性能影響的研究極少，但在畜禽上研究較多。以畜禽為例，李榮剛等［13］研究表明飼糧添加亞油酸對(duì)斷奶至2月齡肉兔平均日增重?zé)o顯著影響。Uwayjan等［14］通過飼喂不同日齡蛋雞富含亞油酸的飼糧，同樣發(fā)現(xiàn)其對(duì)生長(zhǎng)性能無顯著影響。本試驗(yàn)在意大利蜜蜂工蜂幼蟲上的研究結(jié)果與上述報(bào)道相似，發(fā)現(xiàn)飼糧添加亞油酸并未顯著改變工蜂幼蟲化蛹時(shí)的體重。然而，王菊花等［15］研究表明，當(dāng)飼糧中CLA的添加量為1.0%和2.0%時(shí)，可以顯著提高斷奶仔豬的日增重和飼料利用率。在家禽方面，劉光芒等［16］研究發(fā)現(xiàn)，添加低水平的CLA可以提高肉鴨生產(chǎn)性能，但添加水平過高則會(huì)降低平均日增重。由此可見，亞油酸對(duì)畜禽乃至蜜蜂體增重的影響仍存在爭(zhēng)議，這可能與添加的亞油酸的劑量、種類，研究的物種，物種所處的生理階段以及飼養(yǎng)管理等因素有關(guān)。

圖3　飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲ACC基因相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.3 Effects of linoleic acid supplemental level on ACC gene relative expression level of larvae

對(duì)化蛹率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，當(dāng)亞油酸添加水平為0.10%時(shí)，幼蟲化蛹率顯著下降，其他組無顯著差異。分析可能是因?yàn)镻UFA結(jié)構(gòu)中的不飽和雙鍵會(huì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生自由基，細(xì)胞自由基過多會(huì)使細(xì)胞功能減弱，導(dǎo)致幼蟲無法進(jìn)入蛹期。由此可見，工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的水平應(yīng)該處于一個(gè)合理范圍內(nèi)，并非多多益善。

3.2 飼糧亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂工蜂幼蟲蟲體蛋白質(zhì)濃度的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧亞油酸添加水平亞油酸對(duì)5、6日齡幼蟲蟲體蛋白質(zhì)濃度無顯著影響，而對(duì)7日齡幼蟲蟲體蛋白質(zhì)濃度有影響顯著，亞油酸添加水平適中時(shí)，蟲體蛋白質(zhì)濃度最高，添加水平過高則會(huì)降低蟲體蛋白質(zhì)濃度。付世建等［17］通過飼喂南方鲇不同蛋白質(zhì)脂肪比的飼料，發(fā)現(xiàn)提高飼料中脂肪含量將有助于提高蛋白質(zhì)的利用效率，具有節(jié)約蛋白質(zhì)的效果。以上研究的結(jié)果與本試驗(yàn)在工蜂幼蟲上的結(jié)果相吻合，即低水平亞油酸可以提高機(jī)體蛋白質(zhì)濃度，這可能是因?yàn)橹竞偷鞍踪|(zhì)之間可以相互轉(zhuǎn)化，而亞油酸水平偏高時(shí)會(huì)對(duì)幼蟲的生理機(jī)能產(chǎn)生負(fù)面影響，這可能在一定程度上影響了蛋白質(zhì)的代謝，所以高水平亞油酸反而降低了蟲體蛋白質(zhì)濃度。

3.3 飼糧亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂工蜂幼蟲脂肪代謝的影響

3.3.1 飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲PPARs活性的影響

盡管3種PPARs亞型的氨基酸序列相似，但研究表明PPARα和PPARγ分別在脂質(zhì)代謝和儲(chǔ)存中具有不同的功能［18］。PPARα主要在肝臟中表達(dá)，在饑餓狀態(tài)下活化，通過調(diào)節(jié)涉及脂肪酸動(dòng)員、活化和降解過程中的多種基因來提供能量，并起到降低血脂的作用［19－22］。PPARγ主要存在于脂肪組織，在生理狀態(tài)下，PPARγ主要在進(jìn)食后激活，促進(jìn)脂肪在脂肪組織聚集［23－24］。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，蟲體的PPARs活性受飼糧亞油酸添加水平的影響，當(dāng)亞油酸添加水平升高到0.08%時(shí)，蟲體PPARα和PPARγ活性均顯著高于對(duì)照組，整體上呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。有研究證明，脂肪酸及其衍生物可以作為配體有效激活PPARs［25－26］。趙占宇［27］通過在大黃魚基礎(chǔ)飼糧中添加0、1%、2%和4%的CLA，發(fā)現(xiàn)CLA（0.4 g/kg BW）能夠顯著提高大黃魚肝臟中PRARα和PPARγ基因的表達(dá)量。另外，馬宏峰［28］也發(fā)現(xiàn)亞油酸可以促進(jìn)高脂小鼠PPARγ mRNA的表達(dá)。本試驗(yàn)在意大利蜜蜂工蜂幼蟲上的研究結(jié)果與前人在其他動(dòng)物上的研究結(jié)果基本一致，說明適宜添加水平的亞油酸對(duì)工蜂幼蟲PPARs同樣具有激活作用。

3.3.2 飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲脂肪代謝相關(guān)酶活性的影響

脂肪酸的飽和程度不同，對(duì)脂肪代謝相關(guān)酶的影響也不一樣，影響強(qiáng)弱順序從大到小依次是PUFA、單不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸。本試驗(yàn)研究了飼糧亞油酸添加水平對(duì)意大利蜜蜂幼蟲蟲體FAS活性和ACC濃度的影響，結(jié)果顯示亞油酸在低水平范圍顯著提高了FAS活性和ACC濃度，亞油酸添加水平過高時(shí)則會(huì)降低FAS的活性。FAS是催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A合成脂肪酸的酶類，ACC是催化脂肪合成的限速酶，其濃度的高低直接影響脂肪沉積量，它們均在脂肪代謝方面發(fā)揮重要作用［29］。

Mersmann等［30］在成年豬飼糧中添加脂肪酸，降低了脂肪酸合成的速度以及FAS和ACC的活性。Toussant等［31］分別用無脂肪、含紅花油（主要為PUFA）和含牛脂（主要為飽和脂肪酸）的飼糧喂大鼠，發(fā)現(xiàn)飼喂含紅花油飼糧的大鼠肝臟FAS 和ACC的活性顯著低于飼喂含牛脂飼糧和無脂肪飼糧的大鼠。

以上這些報(bào)道都認(rèn)為PUFA對(duì)脂肪代謝相關(guān)酶有抑制作用，這與本試驗(yàn)結(jié)果略有差異，猜測(cè)可能是由于脂肪酸種類、添加量，測(cè)定的組織部位和不同物種生理代謝的差異造成的。

3.3.3 飼糧亞油酸添加水平對(duì)幼蟲脂肪代謝相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量的影響

本試驗(yàn)中，飼糧亞油酸添加水平對(duì)FAS和ACC基因的相對(duì)表達(dá)量均無顯著影響。一些試驗(yàn)已證明:受PUFA抑制的生脂酶包括FAS、ACC、葡萄糖－6－磷酸脫氫酶（G6PD）、L－丙酮酸激酶和S14蛋白［32］。Blake等［33］通過飼喂大鼠PUFA（魚油）和飽和脂肪酸，發(fā)現(xiàn)飼喂PUFA的大鼠肝臟中FAS mRNA豐度是飼喂飽和脂肪酸的6%，這說明了飼糧PUFA是FAS mRNA表達(dá)的強(qiáng)抑制劑。Clarke等［34］研究發(fā)現(xiàn)飼糧中的PUFA可使大鼠肝臟中的FAS mRNA水平降低了75%～90%。韓立強(qiáng)等［35］研究了CLA對(duì)小鼠乳腺脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)1.5%CLA組（1.5%CLA＋0.5%花生油）與對(duì)照組（2%花生油）相比，母鼠乳腺組織的FAS和ACC的mRNA表達(dá)量顯著降低。但是李榮剛［36］研究認(rèn)為飼糧亞油酸水平對(duì)斷奶至3月齡生長(zhǎng)肉兔的肝臟ACC mRNA表達(dá)量影響不顯著，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

4　結(jié) 論

綜合化蛹率和蟲體蛋白質(zhì)濃度2個(gè)指標(biāo)并做擬合曲線得出，在人工飼養(yǎng)條件下，意大利蜜蜂工蜂幼蟲飼糧中亞油酸的適宜添加水平為0.024%～0.037%。

參考文獻(xiàn):

［1］ NATION J.Insect physiology and biochemistry［M］.Florida:CRC Press，2002.

［2］ ST LEGER R J，JOSHI L，BIDOCHKA M J，et al.Protein synthesis in Metarhizium anisopliae growing on host cuticle［J］.Mycological Research，1995，99 （9）:1034－1040.

［3］ MANNING R.Fatty acids in pollen:a review of their importance for honey bees［J］.Bee World，2001，82 （2）:60－75.

［4］ PANDEY D K，TRIPATHI R N，TRIPATHI R D，et al.Fungi toxicology in pollen grains［J］.Grana，1983，22（1）:31－33.

［5］ MANNING R，RUTKAY A，EATON L，et al.Lipid?enhanced pollen lipid?reduced flour diets and their effect on the longevity of honey bees（Apis mellifera L.）［J］.Australian Journal of Entomology，2007，46 （3）:251－257.

［6］ NAKAMURA M T，CHO H P，CLARKE S D.Regu?lation of hepatic delta26 desaturase expression and its role in the polyunsaturated fatty acid inhibition of fatty acid synthase gene expression in mice［J］.The Journal of Nutrition，2000，130（6）:1561－1565.

［7］ ZHU Y J，KAN L X，QI C，et al.Isolation and charac?terization of peroxisome proliferator?activated receptor （PPAR）interacting protein（PRIP）as a coactivator for PPAR［J］.The Journal of Biological Chemistry，2000，275（18）:13510－13516.

［8］ XU J，TERAN?GARCIA M，PARK J H Y，et al.Poly?unsaturated fatty acids suppress hepatic sterol regula?tion element?binding protein?1 expression by accelera?tion transcript decay［J］.The Journal of Biological Chemistry，2001，276（13）:9800－9807.

［9］ 李琪玲，王武，章立新.CLA對(duì)小鼠的減肥作用［J］.食品科學(xué)，2011，32（21）:229－232.

［10］ ZHOU X，LI D F，YIN J D，et al.CLA differently reg?ulates adipogenesis in stromal vascular cells from por?cine subcutaneous adipose and skeletal muscle［J］.Journal of Lipid Research，2007，48（8）:1701－1709.

［11］ PARIZA M W，PARK Y，COOK M E.Mechanisms of action of conjugated linoleic acid:evidence and specu?lation［J］.Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine，2000，223（1）:8－13.

［12］ IRITANI N，KOMIYA M，F(xiàn)UKUDA H，et al.Lipo?genic enzyme gene expression is quickly suppressed in rats by a small amount of exogenous polyunsaturated fatty acids［J］.The Journal of Nutrition，1998，128 （6）:967－972.

［13］ 李榮剛，麻名文，王春陽，等.日糧添加亞油酸對(duì)斷奶至2月齡肉兔生長(zhǎng)性能、免疫指標(biāo)及脂質(zhì)代謝的影響［J］.中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31（11）:1676－1680.

［14］ UWAYJAN M G，AZAR E J，DAGHIR N J.Sunflow?er seed in laying hen rations［J］.Poultry Science，1983，62（7）:1247－1253.

［15］ 王菊花，薛秀恒，劉光林，等.共軛亞油酸對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能及免疫的影響［J］.中國(guó)飼料，2006（2）:22－27.

［16］ 劉光芒，吳德，何祖鋒.共軛亞油酸對(duì)肉鴨生產(chǎn)性能與屠體性狀的影響研究［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2005，32（11）:3－5.

［17］ 付世建，謝小軍，張文兵，等.南方鲇的營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究:飼料脂肪對(duì)蛋白質(zhì)的節(jié)約效應(yīng)［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2001，25（1）:70－75.

［18］ DELERIVE P，DE BOSSCHER K，BESNARD S，et al.Peroxisome proliferator?activated receptor α nega?tively regulated the vascular inflammatory gene re?sponse by negative cross?talk with transcription factors NF?κB and AP?1［J］.The Journal of Biological Chem?istry，1999，274（45）:32048－32054.

［19］ ISSEMANN I，GREEN S.Activation of a number of the steroid receptor superfamily by peroxisome prolif?erators［J］.Nature，1990，347（6294）:645－650.

［20］ SHAO D L，RANGWALA S M，BAILLY S T，et al.Interdomain communication regulating ligand binding by PPAR?γ［J］.Nature，1998，396（6709）:377－380.

［21］ LI H，CYBULSKY M I，GIMBRONE M A J，et al.An atherogenic diet rapidly induces VCAM?l，a cytokine?regulatatable mononuclear leukocyte adhesion mole?cule，in rabbit aortic endothelium［J］.Arteriosclerosis，Thrombosis，and Vascular Biology，1993，13（2）:197－204.

［22］ ABEDI H，ZACHARY I.Signalling mechanisms in the regulation of vascular cell migation［J］.Cardiovascular Research，1995，30（4）:544－556.

［23］ RICOTE M，LI A C，WILLSON T M，et al.The PPAR gamma is a negatively regulator of macrophage activa?tion［J］.Nature，1998，391（6662）:79－82.

［24］ TANAKA T，ITOH H，DOI K，et al.Down regulationof peroxisome proliferator?activated receptor γ expres?sion by inflammatory cytokine and its reversal by thia?zolidinediones［J］.Diabetologia，1999，42（6）:702－710.

［25］ KLIEWER S A，LENHARD J M，WILLSON T M，et al.A prostaglandin J2 metabolite binds peroxisome proliferator?activated receptor γ and promotes adipo?cyte differentiation［J］.Cell，1995，83:813－819.

［26］ KLIEWER S A，SUNDSETH S S，JONES S A，et al.Fatty acids and eicosanoids regulate gene expression through direct interactions with peroxisome prolifera?tor?activated receptors alpha and γ［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1997，94（9）:4318－4323.

［27］ 趙占宇.共軛亞油酸（CLA）對(duì)大黃魚脂肪代謝、免疫、肉品質(zhì)及PPAR基因表達(dá)的影響［D］.博士學(xué)位論文.杭州:浙江大學(xué)，2008.

［28］ 馬宏峰.亞油酸對(duì)高脂小鼠脂質(zhì)代謝的影響及其機(jī)制研究［D］.碩士學(xué)位論文.合肥:合肥工業(yè)大學(xué)，2007.

［29］ 陳強(qiáng)，賴樺，李長(zhǎng)強(qiáng)，等.豬脂肪組織代謝及其調(diào)控［J］.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，21（5）:635－640.

［30］ MERSMANN H J，SHAACKELFORD S D，HAY? DEN K D.Lipogenesis by invitroliver and adipose tis?sue preparations from neonated swine［J］.American Journal of Physiology，1973，224:1123－1129.

［31］ TOUSSANT M J，WILSON M D，CLARKE S D.Co?ordinate suppression of liver acety1?CoA carboxylase and fatty acid synthetase by polyunsaturated fat［J］.The Journal of Nutrition，1981，111（1）:146－153.

［32］ 咼于明.家禽營(yíng)養(yǎng)［M］.2版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2004.

［33］ BLAKE W L，CLARKE S D.Suppression of rat hepat?ic fatty acid synthase and S14 gene transcription by di?etary polyunsaturated fat［J］.The Journal of Nutrition，1990，120（12）:1727－1729.

［34］ CLARKE S D，HEMBREE J.Inhibition of triiodothy?ronine’s induction of rat liver lipogenic enzymes by dietary fat［J］.The Journal of Nutrition，1990，120 （6）:625－630.

［35］ 韓立強(qiáng)，郭豫杰，魯維飛，等.共軛亞油酸對(duì)小鼠乳腺脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的作用研究［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012，34（1）:68－73.

［36］ 李榮剛.日糧亞油酸水平對(duì)生長(zhǎng)肉兔生長(zhǎng)性能、組織脂肪酸構(gòu)成及脂質(zhì)代謝的影響［D］.碩士學(xué)位論文.泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

（責(zé)任編輯 菅景穎）

Appropriate Linoleic Acid Supplemental Level in Apis mellifera ligustica Worker Larvae Diet

WANG Shengwei XU Baohua WANG Hongfang?
（College of Animal Science and Technology，Shandong Agricultural University，Tai’an 271018，China）

Abstract:This experiment was conducted to study the appropriate linoleic acid supplemental level in Apis mel?lifera ligustica worker larvae diet.Five hundred and seventy six larvae were randomly assigned to 6 groups with 96 larvae in each group.Larvae in control group were fed a basal diet，and those in experimental groups were fed the basal diet supplemented with 0.02%，0.04%，0.06%，0.08%and 0.10%linoleic acid，respectively.The experiment lasted for 7 days.The results showed as follows:1）compared with the control group，the diet supplemented with 0.10%linoleic acid reduced the percentage of pupation（P＜0.05）.2）Compared with the control group，the diet supplemented with 0.04%linoleic acid significantly increased the total protein concen?tration of larvae at 5 days old（P＜0.05），when the worker larvae developed into pupa at 7 days old，the diet supplemented with 0.10%linoleic acid significantly increased the pupae protein concentration（P＜0.05）.3）Compared with the control group，the diet supplemented with 0.02%linoleic acid had significant suppression effects on the activity of peroxisome proliferators?activated receptor（PPAR）α（P＜0.05），but 0.08%linoleic acid had stimulating effects on the activities of PPARα and PPARγ at 6 days old.4）Compared with the control group，the linoleic acid supplemental levels at 0.04%and 0.08%significantly improved the activity of fatty acid synthetase（FAS）of larvae at 6 days old（P＜0.05）.Acetyl CoA carboxylase（ACC）concentration of larvae at 5 days old was significantly improved by 0.08%linoleic acid（P＜0.05）and ACC concentration of larvae at 6 days old was significantly improved by 0.06%and 0.10%linoleic acid（P＜0.05）.5）Different supplemental levels of linoleic acid had no effects on the relative expression levels of FAS and ACC genes（P＞0.05）.According to the curve fitting results of the percentage of pupation and protein concentration of larvae，it is concluded that the appropriate linoleic supplemental level in Apis mellifera ligustica worker larvae diet is 0.024%to 0.037%.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（5）:1440?1449］

Key words:linoleic acid；Apis mellifera ligustica；appropriate supplemental level；percentage of pupation；concentration of protein；fat metabolism

Corresponding author?，lecturer，E?mail:wanghongfang22＠163.com

通信作者:?王紅芳，講師，E?mail:wanghongfang22＠163.com

基金項(xiàng)目:國(guó)家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金（CARS?45）；山東省農(nóng)業(yè)良種工程項(xiàng)目“優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)蜜蜂及蠶桑新品種培育”（2014?2016）

作者簡(jiǎn)介:王圣偉（1990－），男，河南商丘人，碩士研究生，從事蜜蜂營(yíng)養(yǎng)研究。E?mail:swwang2012＠163.com

收稿日期:2014－12－19

doi:10.3969/j.issn.1006?267x.2015.05.014

中圖分類號(hào):S816

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):1006?267X（2015）05?1440?10