• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞骨架蛋白β-actin的調(diào)控機(jī)制研究

    2015-05-09 01:03:51王建軍王澤友姚永良吳建紅李光新
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白結(jié)核

    王建軍,王澤友,姚永良,吳建紅,成 陽(yáng),李光新

    鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞骨架蛋白β-actin的調(diào)控機(jī)制研究

    王建軍1,王澤友2,姚永良1,吳建紅1,成 陽(yáng)1,李光新3

    目的 研究鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后其對(duì)巨噬細(xì)胞骨架蛋白及其調(diào)節(jié)蛋白的作用機(jī)制。方法 RT-PCR方法分析M.avium刺激巨噬細(xì)胞后cofilin-1,β-actin基因的表達(dá)水平,同時(shí)Western blot方法從蛋白水平分析M.avium刺激巨噬細(xì)胞后β-actin、cofilin-1蛋白的表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M.avium刺激巨噬細(xì)胞后巨噬細(xì)胞凋亡及壞死的情況。結(jié)果β-actin基因及其蛋白在巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后表達(dá)顯著下調(diào),而β-actin蛋白的調(diào)節(jié)蛋白cofilin-1表達(dá)顯著增強(qiáng)。同時(shí),M.avium刺激巨噬細(xì)胞后誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡顯著增多。結(jié)論M.avium刺激巨噬細(xì)胞后可通過(guò)調(diào)控β-actin及cofilin-1蛋白的表達(dá),從而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡或壞死。

    巨噬細(xì)胞;鳥結(jié)核分枝桿菌;β-actin; cofilin-1

    結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis, MTB)為結(jié)核病的病原菌,是兼性細(xì)胞內(nèi)寄生菌,其引發(fā)的結(jié)核病被列為全球重大傳染病之一[1]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì),我國(guó)是全球結(jié)核病流行嚴(yán)重的國(guó)家之一,結(jié)核病年發(fā)病人數(shù)約為130萬(wàn),占全球發(fā)病的14.3%,位居全球第2位[2]。

    結(jié)核分枝桿菌感染人體后,主要被巨噬細(xì)胞吞噬,未被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除而潛伏下來(lái)的MTB也主要寄生于巨噬細(xì)胞內(nèi),在巨噬細(xì)胞內(nèi)增殖通過(guò)各種機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,發(fā)揮其抗結(jié)核活性[3]。肌動(dòng)蛋白(actin)是微絲的結(jié)構(gòu)成分,氨基酸結(jié)構(gòu)高度保守,是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要成分其表達(dá)水平的變化與細(xì)胞形態(tài)變化密切相關(guān)[4]。研究表明細(xì)胞凋亡時(shí),肌動(dòng)蛋白細(xì)絲發(fā)生斷裂,肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)遭到破壞,這是細(xì)胞凋亡時(shí)形態(tài)改變的一個(gè)典型特征,提示肌動(dòng)蛋白可能是細(xì)胞凋亡早期的調(diào)控物之一[5]。目前研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后巨噬細(xì)胞分泌的外泌體(exosomes)中的β-actin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)及cofilin-1蛋白表達(dá)增強(qiáng),表明結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞可能改變宿主細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性[6]。鳥結(jié)核分枝桿菌是非結(jié)核分枝桿菌中重要的種屬之一,其不僅可引起淋巴結(jié)炎,淋巴結(jié)核,腦膜炎等,然而其導(dǎo)致的肺部病變與人型結(jié)核分枝桿菌導(dǎo)致的肺結(jié)核很相似。目前非結(jié)核分枝桿菌導(dǎo)致的疾病越來(lái)越受到衛(wèi)生部門的重視,但非結(jié)核分枝桿菌的相關(guān)研究仍少之又少無(wú)法為臨床提供強(qiáng)有力的支撐。本文著重研究鳥結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后從基因與蛋白水平對(duì)細(xì)胞骨架蛋白及其調(diào)節(jié)蛋白進(jìn)行研究,探討其在鳥結(jié)核分枝桿菌誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮的具體機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 研究對(duì)象 巨噬細(xì)胞系THP-1,鳥結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumavium,M.avium)來(lái)購(gòu)自上海物種保藏中心。

    1.2 主要試劑 RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自Hyclone公司、RNA提取試劑、PCR試劑購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)公司。β-actin、cofilin-1、GAPDH抗體購(gòu)自上海義森生物科技有限公司。Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海前塵生物技術(shù)公司。

    1.3M.avium培養(yǎng) 接種環(huán)取M.avium菌液于羅氏固體培養(yǎng)基上劃線接種,37 ℃培養(yǎng)4周后,刮下M.avium,0.05%吐溫?zé)o菌生理鹽水震蕩充分打散M.avium,高壓蒸汽滅菌使其喪失活性后比濁法計(jì)算M.avium菌液濃度(1.5 ×107/ mL)。

    1.4 巨噬細(xì)胞培養(yǎng) THP-1細(xì)胞于10%胎牛血清RPMl-l640培養(yǎng)基中,37 ℃ 5% CO2飽和濕度環(huán)境中培養(yǎng)48 h后,終濃度為1 μmol/L的佛波酯誘導(dǎo)細(xì)胞24 h使其分化成巨噬細(xì)胞后,隨機(jī)分為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組空白培養(yǎng)基刺激巨噬細(xì)胞;實(shí)驗(yàn)組以滅活的M.avium刺激細(xì)胞24 h(M.avium:細(xì)胞=10∶1)。

    1.5 RT-PCR引物設(shè)計(jì)及合成 根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)檢索β-actin、GAPDH基因的cDNA序列并合成引物,引物序列如表1。

    表1 β-actin及GAPDH引物序列

    1.6 RNA提取 按照鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)公司的Trizol試劑盒說(shuō)明書提取細(xì)胞總RNA,-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.7 RT-PCR 逆轉(zhuǎn)錄體系30 μL中含30 pmol/L oligo(dT)151 μL,2.5 mmmol/L dNTPs混合物4 μL,RNA酶抑制劑0.5 μL(30 U),AMV逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μL(10 U),5×RT緩沖液6 μL,1 μg模板RNA,17 μL DEPC水,37 ℃水浴1 h合成cDNA;25 μL PCR體系中含cDNA 2.5 μL,0.5 μL TaqDNA聚合酶1.5 U,10 mmol/L上游引物0.5 μL,10 mmol/L下游引物0.5 μL,2.5 mmol/L dNTPs 4 μL,10×PCR 緩沖液2.5 μL,無(wú)核糖核酸酶水14.5 μL,預(yù)變性94 ℃ 2 min,然后94℃變性30 s,53℃退火30 s,72℃延伸35 s,共30個(gè)循環(huán),最后72 ℃延伸5 min,1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產(chǎn)物。

    1.8 Western Blot 蛋白質(zhì)提取試劑盒提取巨噬細(xì)胞受M.avium刺激前后的總蛋白并Bradford方法測(cè)定蛋白濃度;配制10% SDS-PGAE電泳膠,將變性后的蛋白質(zhì)按50 μg的蛋白總量進(jìn)行垂直電泳,然后通過(guò)電轉(zhuǎn)移法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至PVDF膜上,β-actin抗體及cofilin-1抗體作為一抗,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行免疫反應(yīng)。

    1.9 細(xì)胞凋亡檢測(cè)M.avium刺激巨噬細(xì)胞24 h后,收集巨噬細(xì)胞1×106個(gè),PBS(含2 g/L BSA)輕輕洗滌兩次;分別加入10 μL的FITC標(biāo)記的Annexin-V抗體、PI試劑,重懸細(xì)胞室溫避光孵育30 min。PBS(含2 g/L BSA)洗滌細(xì)胞2次,0.4 mL PBS(含2 g/L BSA)重懸細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

    1.10 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0進(jìn)行處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間兩兩比較采用q檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1M.avium對(duì)巨噬細(xì)胞影響 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,無(wú)任何處理組為對(duì)照組,其余組以1 μmol/L TPA誘導(dǎo)分化形成巨噬細(xì)胞后以PBS、M.avium分別處理24 h,倒置顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài) (圖1A)。同時(shí),提取細(xì)胞基因組DNA、檢測(cè)基因組片段化情況(圖1B)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium刺激后,巨噬細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯變化,細(xì)胞基因組DNA未發(fā)生片段化。

    a:THP-1細(xì)胞組;b:THP-1分化巨噬細(xì)胞組;c:M.avium處理巨噬細(xì)胞組。1:HindIII Marker;2:THP-1基因組DNA;3:巨噬細(xì)胞基因組DNA;4:巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium刺激后的基因組DNA。

    a: THP-1 cells group; b: THP-1 differentiated into macrophages group; c:M.aviumstimulation macrophages group. 1:HindIII Marker; 2: The gDNA of THP-1 cells; 3: The gDNA of macrophage cells; 4: The gDNA ofM.aviumstimulation macrophage.

    圖1 巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium刺激后的細(xì)胞形態(tài)(A)及基因組DNA分析(B)

    Fig.1 Analysis of the morphology (A) and genomic DNA (B) ofM.aviumstimulation macrophages

    2.2M.avium刺激巨噬細(xì)胞后β-actin及cofilin-1基因表達(dá)研究 巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium處理24 h后,RT-PCR法檢測(cè)巨噬細(xì)胞β-actin及cofilin-1 mRNA的表達(dá)變化(圖2),SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析β-actin及cofilin-1 mRNA表達(dá)水平,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明β-actin基因在M.avium處理組表達(dá)下調(diào)2.3倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而cofilin-1基因在M.avium處理組中表達(dá)增強(qiáng)1.3倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.3 Western blot分析細(xì)胞骨架蛋白 Western blot方法檢測(cè)M.avium處理巨噬細(xì)胞24 h后,巨噬細(xì)胞β-actin及cofilin-1蛋白的表達(dá)變化(圖3)。Image J灰度掃描灰度并經(jīng)GAPDH灰度值校正后,SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明M.avium刺激巨噬細(xì)胞24 h后巨噬細(xì)胞β-actin蛋白表達(dá)下調(diào)2.1倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而β-actin的調(diào)節(jié)蛋白cofilin-1則表達(dá)增強(qiáng)1.7倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.5 流式細(xì)胞檢測(cè)巨噬細(xì)胞凋亡及壞死 巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium感染處理24 h后,F(xiàn)ITC標(biāo)記Annexin-V抗體及PI試劑孵育細(xì)胞30 min后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡及壞死情況(圖4)。獨(dú)立進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn),SPSS 16.0對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明M.avium感染巨噬細(xì)胞后處理巨噬細(xì)胞后,15%巨噬細(xì)胞發(fā)生凋亡,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);3%巨噬細(xì)胞發(fā)生壞死,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    3 討 論

    A:巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后β-actin及cofilin-1 mRNA 的PCR結(jié)果;B:SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析結(jié)果,GAPDH為標(biāo)準(zhǔn)校正;(n=3與對(duì)照組相比,*P<0.05)。

    A: Results ofβ-actinandcofilin-1 mRNA detected by PCR; B: Results of the expression ofβ-actinandcofilin-1 mRNA analyzed by SPSS 16.0 stastical software,GAPDHas a standard calibration (n=3, compared with the control group, *P<0.05).

    圖2 RT-PCR方法分別檢測(cè)巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后β-actin及cofilin-1 mRNA的表達(dá)水平

    Fig.2 Expression ofβ-actinandcofilin-1 mRNA inM.aviumstimulation macrophages analyzed by PCR methods

    巨噬細(xì)胞(Macrophage)是結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)的主要宿主細(xì)胞,結(jié)核分枝桿菌可在巨噬細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期滯留及潛伏[7]。結(jié)核分枝桿菌因其特殊的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致巨噬細(xì)胞內(nèi)的溶酶體酶難以殺傷結(jié)核分枝桿菌,最終可導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)大量增殖。結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后,將破壞宿主細(xì)胞骨架而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死,繼而釋放結(jié)核分枝桿菌出胞而侵襲周邊巨噬細(xì)胞,并導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌感染加重。

    結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后,巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量的TNF-α與IL-1β而增強(qiáng)caspase-3的活性,從而介導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡,然而細(xì)胞的凋亡必然引起細(xì)胞骨架形態(tài)與成分的改變[8]。β-actin蛋白解聚與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切,且其解聚常出現(xiàn)在凋亡小體形成前。胞漿肌動(dòng)蛋白actin是細(xì)胞重要的骨架蛋白,細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-5調(diào)節(jié)亞基-1(Cyclin-dependent kinase 5, regulatory subunit 1, CD5R1)是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-5(Cyclin-dependent kinase-5,CDK5)的特異性激活因子,活化的CDK5可促進(jìn)tau蛋白過(guò)度磷酸化及過(guò)度表達(dá),最終導(dǎo)致細(xì)胞骨架與微管的不穩(wěn)定性[9]。Cofilin-1蛋白是細(xì)胞骨架蛋白的結(jié)合蛋白,其可通過(guò)水解ATP分解肌動(dòng)蛋白纖維[10]。研究表明細(xì)胞凋亡時(shí),肌動(dòng)蛋白細(xì)絲發(fā)生斷裂,肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)遭到破壞,提示肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞凋亡早期的調(diào)控物之一[11]。本研究前期發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞經(jīng)鳥結(jié)核分枝桿菌刺激后分泌的exosomes中的actin蛋白表達(dá)顯著降低,而cofilin-1蛋白則表達(dá)顯著增強(qiáng),表明巨噬細(xì)胞的細(xì)胞骨架可能受到鳥結(jié)核分枝桿菌的破壞而導(dǎo)致宿主細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的合成與加工受到抑制,同時(shí)actin與cofilin-1不一致的表達(dá)表明巨噬細(xì)胞在竭力調(diào)節(jié)并維持細(xì)胞骨架的穩(wěn)定[12]。

    A:M.avium處理巨噬細(xì)胞后β-actin與cofilin-1蛋白的表達(dá)結(jié)果。B:β-actin與cofilin-1蛋白表達(dá)經(jīng)GAPDH校正后的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果,(n=3與對(duì)照組相比,*P<0.05)。

    A: Results of the protein expression of β-actin and cofilin-1 in macrophages stimulated withM.avium. B: Results of the protein expression of β-actin, and cofilin-1 by stastical software, GAPDH as quantitative correction, (n=3, compared with the control group, *P<0.05).

    圖3 Western blot分析巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后β-actin蛋白及其調(diào)節(jié)蛋白cofilin-1的表達(dá)

    Fig.3 Analysis of the expression of β-actin and its regulatory protein cofilin-1 inM.aviumstimulation macrophages by Western blot

    本研究初步發(fā)現(xiàn)鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后細(xì)胞骨架蛋白受結(jié)核分枝桿菌的抑制,而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞大量的凋亡或壞死,提示鳥結(jié)核分枝桿菌可通過(guò)抑制細(xì)胞骨架蛋白的表達(dá)而誘導(dǎo)宿主細(xì)胞的凋亡,但具體的調(diào)節(jié)機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

    A:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M.avium誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡及壞死的水平;B:SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析巨噬細(xì)胞的凋亡及壞死結(jié)果(n=3與對(duì)照組相比,*P<0.05)。

    A: The detection of the apoptosis or necrosis of macrophages infected withM.aviumby flow cytometry; B: Results of the apoptosis or necrosis of macrophages analyzed by SPSS 16.0 statistical software (n=3, compared with the control group, *P<0.05).

    圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞的凋亡及壞死情況

    Fig.4 Analysis of the apoptosis or necrosis of macrophages by flow cytometry

    [1]Ottenhoff TH, Doherty TM, van Dissel JT, et al. First in humans: a new molecularly defined vaccine shows excellent safety and strong induction of long-livedMycobacteriumtuberculosis-specific Th1-cell like responses[J]. Hum Vaccin, 2010, 6(12): 1007-1015. DOI: 10.4161/hv.6.12.13143

    [2]Wang S, Yang AF. The present situation and the preventive measures of tuberculosis in China[J]. Chin J Ethnomed Ethnopharm, 2009, 18 (15): 65-66. (in Chinese) 王勝, 楊安芳. 我國(guó)結(jié)核病的現(xiàn)狀與預(yù)防措施[J]. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥, 2009, 18 (15): 65-66.

    [3]Dao DN, Kremer L, Guerardel Y, et al.Mycobacteriumtuberculosislipomannan induces apoptosis and interleukin-12 production in macrophages[J]. Infect lmmun, 2004, 72(4): 2067-2074. DOI:10.1128/IAI.72.4.2067-2074.2004

    [4]Wu B, Ma J, Meng K, et al. Observation on ultrastructure of liver cell apoptosis[J]. J Chin Electron Microscopy, 2000, 19(6): 791-797. (in Chinese) 吳波, 馬捷, 孟奎, 等. 肝細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)觀察[J]. 電子顯微學(xué)報(bào), 2000, 19(6): 791-797.

    [5]Franklin-Tong VE, Gourlay CW. A role for actin in regulating apoptosis/programmed cell death: evidence spanning yeast, plants and animals[J]. Biochem J, 2008, 413(3): 389-404. DOI: 10.1042/BJ20080320

    [6]Wang JJ, Chen C, Xie PF, et al. Proteomic analysis and immune properties of exosomes shed by macrophages infected withmycobacteriumavium[J]. Microbes Infect, 2014, 16(4): 283-291. DOI: 10.1016/j.micinf.2013.12.001

    [7]Siegel RM. Caspases at the crossroads of immune-cell life and death[J]. Nat Rev Immunol, 2006, 6(4): 308-317. DOI: 10.1038/nri1809

    [8]Miao EA, Rajan JV, Aderem A. Caspase-1-induced pyroptotic cell death[J]. Immunol Rev, 2011, 243(1): 206-214. DOI: 10.1111/j.1600-065X.2011.01044.x

    [9]Michaelis ML, Dobrowsky RT, Li G, et al. Tau neurofibrillary pathology and microtubule stability[J]. J Mol Neuro Sci, 2002, 19(3): 289-293. DOI: 10.1385/JMN:19:3:289

    [10]Hotulainen P, Paunola E, Vartiainen MK, et al. Actin-depolymerizing factor and cofilin-1 play overlapping roles in promoting rapid F-actin depolymerization in mammalian nonmuscle cells[J]. Mol Biol Cell, 2005, 16(2): 649-664. DOI: 10.1091/mbc.E04-07-0555

    [11]Franklin-Tong VE, Gourlay CW. A role for actin in regulating apoptosis/programmed cell death: evidence spanning yeast, plants and animals[J]. Biochem J. 2008, 413(3): 389-404. DOI: 10.1042/BJ20080320

    [12]Wang JJ, Chen C, Tang LJ, et al. Molecular immune response of macrophages stimulated with exosomes secreted by macrophages infected withMycobacteriumtuberculosisand it’s proteomics analysis[J]. Chin J Cell Mol Immunol, 2012, 29(2): 123-126. (in Chinese) 王建軍, 陳偲, 湯立軍, 等. 鳥結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后分泌的外泌體刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的分子免疫反應(yīng)及其蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2012, 29(2):123-126.

    Li Guang-xin, Email: lgxin34147@126.com

    Regulatory mechanisms of the cytoskeletal protein β-actin after stimulation ofMycobacteriumaviumto macrophages

    WANG Jian-jun1,WANG Ze-you2,YAO Yong-liang1,WU Jian-hong1,CHENG Yang1,LI Guang-xin3

    (1.KunshanFirstPeople’sHospital,AffiliatedtoJiangsuUniversity,Kunshan215300,China; 2.InstituteofCancerResearch,CentralSouthUniversity,Changsha410078, 3.DepartmentofPathology,ChongqingCancerInstitute,Chongqing215300,China)

    We investigated the functions of the cytoskeleton proteins and their regulatory proteins inMycobacteriumavium(M.avium) stimulation macrophages. The expression of β-actin and cofilin-1 were detected in mRNA and proteins levels by RT-PCR and Western blot technologies, respectively. Meanwhile, the apoptosis or necrosis of macrophages stimulated withM.aviumwas analyzed by flow cytometry. Results showed that β-actin mRNA and proteins of β-actin were both down-regulated inM.aviumstimulation macrophages, however the expression of cofilin-1 gene and proteisn was presented oppositely both in mRNA and protein level compared with the expression of β-actin. Furthermore, the apoptosis or necrosis of macrophages induced byM.aviumwas increased significantly. We confirmed that the expression of β-actin and confilin-1 could be regulated byM.aviumstimulation to induce theapoptosis or necrosis of macrophages.

    macrophage;M.avium; β-actin; cofilin-1

    10.3969/j.issn.1002-2694.2015.09.004

    李光新, Email:lgxin34147@126.com

    1.江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院, 昆山 215300; 2.中南大學(xué)腫瘤研究所,長(zhǎng)沙 410078; 3.重慶市腫瘤研究所病理科,重慶 215300

    Supported by the Science and Technology project of Kunshan social development(KS1425)

    R392.11

    A

    1002-2694(2015)09-0800-05

    2014-11-24;

    2015-05-11

    昆山市科技局立項(xiàng)項(xiàng)目(KS1425)

    猜你喜歡
    細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白結(jié)核
    細(xì)胞骨架
    土槿皮乙酸對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和細(xì)胞骨架的影響
    肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能的研究進(jìn)展
    “洋蔥細(xì)胞骨架的制作技術(shù)研究”一 文附圖
    一度浪漫的結(jié)核
    特別健康(2018年4期)2018-07-03 00:38:26
    層次分析模型在結(jié)核疾病預(yù)防控制系統(tǒng)中的應(yīng)用
    細(xì)胞骨架在ns脈沖誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡中的作用
    中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核感染的中醫(yī)辨治思路
    肌動(dòng)蛋白清除系統(tǒng)與凝血—纖溶系統(tǒng)在子癇前期患者外周血中的變化
    疣狀皮膚結(jié)核1例
    国产精品一区二区三区四区免费观看| 天堂√8在线中文| 国产成人91sexporn| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日韩精品青青久久久久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品乱码一区二三区的特点| 岛国毛片在线播放| av天堂中文字幕网| 小说图片视频综合网站| 免费av不卡在线播放| 白带黄色成豆腐渣| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国产精品99久久久久久久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 免费搜索国产男女视频| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲三级黄色毛片| 91久久精品电影网| 日韩强制内射视频| 简卡轻食公司| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久午夜欧美精品| 亚洲av免费在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 国产在线一区二区三区精 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| av女优亚洲男人天堂| av在线老鸭窝| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产高清视频在线观看网站| 日本一二三区视频观看| 可以在线观看毛片的网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日韩三级伦理在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美日本视频| 精华霜和精华液先用哪个| 视频中文字幕在线观看| 日本三级黄在线观看| 国产精品国产高清国产av| 欧美日韩精品成人综合77777| 在线观看美女被高潮喷水网站| 青春草国产在线视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产av在哪里看| 中国国产av一级| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产精品野战在线观看| 深夜a级毛片| 视频中文字幕在线观看| 日本三级黄在线观看| av天堂中文字幕网| 变态另类丝袜制服| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲图色成人| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲在线观看片| 精品一区二区三区人妻视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费看光身美女| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲精品国产av成人精品| 观看免费一级毛片| 边亲边吃奶的免费视频| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 最近最新中文字幕大全电影3| 小说图片视频综合网站| 久久久久久久午夜电影| 国产一级毛片在线| 插逼视频在线观看| 久久久久久久午夜电影| 如何舔出高潮| 亚洲电影在线观看av| 国产高清视频在线观看网站| 成年免费大片在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品一区www在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| www日本黄色视频网| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 内地一区二区视频在线| 两个人的视频大全免费| 久久精品综合一区二区三区| 欧美成人免费av一区二区三区| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av成人精品一二三区| 一级毛片我不卡| 国产 一区 欧美 日韩| 国产午夜福利久久久久久| АⅤ资源中文在线天堂| 一级av片app| 国产毛片a区久久久久| 日本wwww免费看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一级爰片在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲av熟女| 国产乱人偷精品视频| 欧美三级亚洲精品| 天堂√8在线中文| 久久人人爽人人片av| 伦精品一区二区三区| 最新中文字幕久久久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 伦精品一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产真实乱freesex| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 春色校园在线视频观看| 欧美日本视频| 99热网站在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 毛片女人毛片| 色5月婷婷丁香| 少妇丰满av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩中字成人| 日本色播在线视频| 嫩草影院精品99| 国产精品蜜桃在线观看| 午夜视频国产福利| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一个人观看的视频www高清免费观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品综合久久久久久久免费| 一二三四中文在线观看免费高清| 成人美女网站在线观看视频| 欧美日韩在线观看h| av卡一久久| av在线老鸭窝| 国产一区二区三区av在线| 精品久久久久久久末码| 成人美女网站在线观看视频| 国产一区二区三区av在线| 一区二区三区免费毛片| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久精品国产自在天天线| 午夜福利视频1000在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产乱来视频区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产私拍福利视频在线观看| 日韩一区二区三区影片| 岛国毛片在线播放| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 舔av片在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 青春草亚洲视频在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 小说图片视频综合网站| 久久精品综合一区二区三区| 国产av一区在线观看免费| 91久久精品电影网| 69人妻影院| 欧美成人午夜免费资源| 两个人的视频大全免费| 日本爱情动作片www.在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 两个人视频免费观看高清| 精品久久久噜噜| 久久99精品国语久久久| 好男人视频免费观看在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国产69精品久久久久777片| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩欧美三级三区| 韩国av在线不卡| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品蜜桃在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 爱豆传媒免费全集在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 22中文网久久字幕| 一个人免费在线观看电影| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品电影一区二区三区| 国产人妻一区二区三区在| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲丝袜综合中文字幕| 男人舔奶头视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产人妻一区二区三区在| 欧美潮喷喷水| 国产成人免费观看mmmm| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产成人精品久久久久久| 日本av手机在线免费观看| 精品久久久噜噜| 五月伊人婷婷丁香| 国产淫片久久久久久久久| 国产成人freesex在线| 国产亚洲91精品色在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美精品一区二区大全| 91精品伊人久久大香线蕉| a级一级毛片免费在线观看| 中文欧美无线码| 岛国在线免费视频观看| 国产 一区 欧美 日韩| 91aial.com中文字幕在线观看| 日本一二三区视频观看| 亚洲最大成人中文| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 好男人视频免费观看在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 有码 亚洲区| 国产在线一区二区三区精 | 欧美一区二区亚洲| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 男女啪啪激烈高潮av片| 99久久无色码亚洲精品果冻| 人人妻人人看人人澡| 亚洲欧洲国产日韩| 久久午夜福利片| 亚洲性久久影院| 亚洲精品色激情综合| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品三级大全| 女人被狂操c到高潮| 免费av不卡在线播放| av免费在线看不卡| 99久久精品国产国产毛片| 精品人妻熟女av久视频| 久久99热这里只有精品18| 国产精品,欧美在线| 丝袜美腿在线中文| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 人体艺术视频欧美日本| 舔av片在线| 国产成人a区在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 色网站视频免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 天堂网av新在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久久精品大字幕| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 热99在线观看视频| 免费在线观看成人毛片| 亚洲电影在线观看av| 久久精品久久精品一区二区三区| 免费av观看视频| 日韩三级伦理在线观看| 久久久久久久国产电影| 亚洲av中文av极速乱| 午夜免费激情av| 国内精品一区二区在线观看| 我要搜黄色片| 国产伦理片在线播放av一区| a级毛片免费高清观看在线播放| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 少妇人妻一区二区三区视频| 免费在线观看成人毛片| 亚洲第一区二区三区不卡| 精品久久久久久电影网 | 色网站视频免费| 免费av毛片视频| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品1区2区在线观看.| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日韩视频在线欧美| 婷婷六月久久综合丁香| 午夜久久久久精精品| av免费观看日本| 99热全是精品| 婷婷色麻豆天堂久久 | 免费看a级黄色片| 久久久久网色| 国产免费福利视频在线观看| 春色校园在线视频观看| 国产伦在线观看视频一区| 国产黄a三级三级三级人| 天堂影院成人在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 久久草成人影院| 久久久午夜欧美精品| 1024手机看黄色片| 九九在线视频观看精品| 69av精品久久久久久| 国产精品电影一区二区三区| 久久精品影院6| 国产 一区 欧美 日韩| 久久亚洲精品不卡| 国产一级毛片在线| 国产av在哪里看| 最近2019中文字幕mv第一页| 男女啪啪激烈高潮av片| 日韩亚洲欧美综合| 九九在线视频观看精品| 欧美成人a在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 成人特级av手机在线观看| 国产色婷婷99| 亚洲av福利一区| videos熟女内射| 久久这里只有精品中国| 热99re8久久精品国产| 色网站视频免费| 亚洲国产精品成人综合色| 一个人看视频在线观看www免费| 青春草亚洲视频在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 少妇的逼好多水| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 美女国产视频在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 少妇人妻一区二区三区视频| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲自拍偷在线| 三级国产精品片| 亚洲精品亚洲一区二区| 在线免费十八禁| 永久网站在线| 在线免费十八禁| 国产精品一区二区性色av| 毛片女人毛片| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 久久精品夜色国产| 国产乱人视频| 国产中年淑女户外野战色| 中文天堂在线官网| 国产精品嫩草影院av在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 丰满少妇做爰视频| 一级黄色大片毛片| 天天躁日日操中文字幕| 女人久久www免费人成看片 | 国产精品伦人一区二区| 最近中文字幕2019免费版| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 小说图片视频综合网站| 日韩成人av中文字幕在线观看| av黄色大香蕉| 午夜福利高清视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 一级av片app| 国产熟女欧美一区二区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费看av在线观看网站| 大香蕉久久网| 色吧在线观看| 一级黄片播放器| 国产毛片a区久久久久| 日韩大片免费观看网站 | 直男gayav资源| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲欧美精品自产自拍| 午夜免费激情av| 免费观看在线日韩| 国产精品熟女久久久久浪| 国产极品精品免费视频能看的| 毛片女人毛片| 久久热精品热| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 婷婷色av中文字幕| 国产 一区精品| 老司机福利观看| 欧美bdsm另类| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 国产大屁股一区二区在线视频| 七月丁香在线播放| 天堂网av新在线| 国产精品三级大全| 免费av观看视频| 亚洲av一区综合| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 色网站视频免费| 免费观看的影片在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 成人性生交大片免费视频hd| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品午夜福利在线看| 欧美潮喷喷水| 深爱激情五月婷婷| 天天一区二区日本电影三级| 美女内射精品一级片tv| 国产熟女欧美一区二区| 久久久久网色| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 如何舔出高潮| 色吧在线观看| 午夜视频国产福利| 免费大片18禁| 亚洲av二区三区四区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 永久网站在线| 人妻系列 视频| 国产精品无大码| 午夜精品国产一区二区电影 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费观看的影片在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产av在哪里看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久久久久伊人网av| 久久久精品大字幕| 国产精品爽爽va在线观看网站| 内射极品少妇av片p| 毛片一级片免费看久久久久| 久久精品91蜜桃| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 97超碰精品成人国产| 观看美女的网站| 久久久久久久久久久免费av| 日本欧美国产在线视频| 中文天堂在线官网| 久热久热在线精品观看| 七月丁香在线播放| 波多野结衣巨乳人妻| 日本av手机在线免费观看| 一级黄色大片毛片| 亚洲人与动物交配视频| 日本午夜av视频| videos熟女内射| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产成人午夜福利电影在线观看| 岛国在线免费视频观看| 日本免费在线观看一区| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲自拍偷在线| 国产在线一区二区三区精 | 久久精品国产亚洲av天美| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产免费福利视频在线观看| 成年免费大片在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 日韩欧美精品免费久久| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产91av在线免费观看| 国产av不卡久久| 国产成人一区二区在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品综合久久久久久久免费| 99久国产av精品| 国产精品,欧美在线| 人人妻人人看人人澡| 亚洲国产精品成人综合色| 国产一级毛片七仙女欲春2| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 少妇裸体淫交视频免费看高清| 在线观看66精品国产| 日本一二三区视频观看| 免费看a级黄色片| 日本三级黄在线观看| 久久精品影院6| 搞女人的毛片| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产av在哪里看| 亚洲图色成人| 九色成人免费人妻av| 国产午夜精品论理片| 久久午夜福利片| 国产乱人视频| 九九爱精品视频在线观看| 国产av不卡久久| 不卡视频在线观看欧美| 久久久色成人| 亚洲欧美日韩无卡精品| 最近最新中文字幕大全电影3| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲经典国产精华液单| 国产成人aa在线观看| 少妇丰满av| 日韩视频在线欧美| 狠狠狠狠99中文字幕| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲av男天堂| 欧美高清成人免费视频www| 国产成人a∨麻豆精品| 日韩欧美 国产精品| 久久草成人影院| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲最大成人中文| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲欧美精品专区久久| 国产大屁股一区二区在线视频| 舔av片在线| 99视频精品全部免费 在线| 在线免费观看不下载黄p国产| 日本wwww免费看| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲国产精品成人综合色| 一区二区三区高清视频在线| 国产91av在线免费观看| 久久久久久久午夜电影| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 热99在线观看视频| kizo精华| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品国产三级专区第一集| 日韩欧美国产在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 永久网站在线| 午夜福利成人在线免费观看| 久久精品综合一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国模一区二区三区四区视频| 国产三级在线视频| 亚洲人成网站高清观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 成人一区二区视频在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 午夜日本视频在线| 高清在线视频一区二区三区 | 欧美潮喷喷水| 亚洲精品影视一区二区三区av| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品永久免费网站| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲第一区二区三区不卡| 晚上一个人看的免费电影| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲色图av天堂| 麻豆乱淫一区二区| 国产成年人精品一区二区| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲成人久久爱视频| 久久99热这里只有精品18| 国产伦理片在线播放av一区| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲欧美日韩无卡精品| 成人欧美大片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日本五十路高清| 国产一区有黄有色的免费视频 | 老司机影院成人| 日韩精品有码人妻一区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久久久九九精品影院| 五月伊人婷婷丁香| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 成人无遮挡网站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| videossex国产| 少妇人妻一区二区三区视频| 日韩一区二区视频免费看| 国模一区二区三区四区视频| 美女大奶头视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜福利在线观看吧| 精品人妻视频免费看| 国产淫语在线视频| 精品久久久久久久末码| 亚洲自拍偷在线| 免费一级毛片在线播放高清视频| 日韩欧美精品免费久久| 五月伊人婷婷丁香| 免费av观看视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲怡红院男人天堂| 内射极品少妇av片p| 51国产日韩欧美| 国产高清视频在线观看网站| h日本视频在线播放|