溫先敏，楊緬南，胡田魁

(云南名揚(yáng)藥業(yè)有限公司，云南 昆明 650200)

地膽草水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的動物實(shí)驗(yàn)研究

溫先敏，楊緬南，胡田魁

(云南名揚(yáng)藥業(yè)有限公司，云南 昆明 650200)

目的 觀察地膽草(ElephantopusSaber Linn)水提物的抗炎鎮(zhèn)痛藥理作用。方法 采用大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)、大鼠毛細(xì)血管通透實(shí)驗(yàn)、熱板法及小鼠冰醋酸扭體法。結(jié)果 地膽草水提物抗炎實(shí)驗(yàn)表明，中、高劑量地膽草水提物能抑制由角叉菜膠溶液引起的大鼠足趾腫脹(P<0.05)和顯著減少二甲苯致小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性(P<0.05，P<0.01)，顯示出良好的抗炎作用；地膽草水提物鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)表明，高劑量地膽草水提物能顯著增加熱板法試驗(yàn)小鼠的痛閾值(P<0.05)和減輕醋酸所致小鼠扭體次數(shù)(P<0.05，，P<0.01)，顯示出較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)論 地膽草水提物具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

地膽草；抗炎；鎮(zhèn)痛

目前，臨床上對急、慢性疼痛多采取以西藥治療為主，這類鎮(zhèn)痛藥雖然鎮(zhèn)痛效果肯定，但長期應(yīng)用會產(chǎn)生諸如中樞神經(jīng)系統(tǒng)等消化系統(tǒng)、造血系統(tǒng)方面的不良反應(yīng)，特別是存在嚴(yán)重成癮性及藥物依賴性等問題。因此，西藥鎮(zhèn)痛藥在臨床應(yīng)用上受到嚴(yán)格限制。本公司在中藥民族藥開發(fā)篩選中，發(fā)現(xiàn)單株植物地膽草具有極好的止痛作用，民間臨床應(yīng)用未見毒副作用和成癮性，現(xiàn)將其抗炎鎮(zhèn)痛的動物實(shí)驗(yàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑 地膽草水提物(地膽草藥材加8倍量自來水，煎煮2次，每次煎煮1.5 h，過濾，濾液合并，濃縮至稠膏，放入烘箱中于65℃干燥即得。)，批號130501，由云南名揚(yáng)藥業(yè)有限公司提供；陽性對照藥羅通定片，規(guī)格60 mg/片，20120723，由廣州市香雪制藥股份有限公司生產(chǎn)；組胺，中科院上海生化所東風(fēng)生化技術(shù)公司；角叉菜膠，美國Sigma公司生產(chǎn)；伊文思藍(lán)，德國Serva公司生產(chǎn)。

1.2 動物 昆明種小鼠100只，SPF級，雌雄兼用，體重(20±2.0)g；SD大鼠100只，雄性，體重(190±10.0)g。上述2種動物均購自昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.3 儀器 BP110S分析天平(德國sartorius)；YLS-6B足趾容積測量儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)；HH-600電熱恒溫水浴鍋(金壇市大地自動化儀器廠)；TDL-40B離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；UV-4802S紫外可見分光光度計(jì)(上海尤尼科儀器有限公司)；YLS-6B智能熱板儀(濟(jì)南益延科技公司)；

2 地膽草水提物的抗炎作用

2.1 角叉菜膠足趾腫脹實(shí)驗(yàn) 取SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，空白對照組給予理鹽水，陽性對照組給予羅通定片(0.06 g/kg)，試驗(yàn)組給予地膽草水提物(0.45，1.36，4.08 g/kg)，每天灌胃給藥1次，連續(xù)3 d，最后1次給藥后1h，分別于大鼠右后足趾腱膜下注射角叉菜膠0.1ml/只致炎，于注射后1、2、3 h分別測定各鼠右后足趾容積，比較各組大鼠給藥后不同時間右后足趾腫脹度及抑制率。足趾腫脹度(mL)=致炎后足容積-致炎前足容積；足趾腫脹抑制率(%)=(空白對照組腫脹度-給藥組腫脹度)/空白對照組腫脹度×100%。

2.2 大鼠毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)[1]分組及給藥同試驗(yàn)同“2.1”。給藥倒數(shù)第2 d將大鼠腹部毛除盡，末次給藥1h后，于大鼠腹部皮下注射1 mg/mL組胺0.2 mL，立即在尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)4 mL/kg體重，20 min后斷頭處死動物，將著色皮膚剝離，剪下藍(lán)斑，剪碎，放入5 mL丙酮與生理鹽水(7︰3)混合液中浸泡2 h，放置于65℃電熱恒溫水浴鍋中孵育36 h，直至皮膚藍(lán)色完全消失，再用離心機(jī)離心10 min，取上清液，于610 nm處測定吸光度(OD值)。

3 地膽草水提物的鎮(zhèn)痛作用

3.1 醋酸扭體實(shí)驗(yàn)[2-3]取健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，空白對照組給予理鹽水，陽性對照組給予羅通定片(0.06 g/kg)，試驗(yàn)組給予地膽草水提物(0.45，1.36，4.08 g/kg)，每天灌胃給藥1次，連續(xù)3 d，末次給藥后1 h，腹腔注射0.5%冰醋酸(10 mL/kg)(醋酸溶液臨用前配制)，觀察10 min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。扭體：腹部內(nèi)凹，后肢伸展、臀部抬高。

3.2 熱板法[2-3]取雌性小鼠，放入(55 ± 0.5)℃熱板測痛儀中，每次放1只在熱板上，檢測痛閾，5s內(nèi)出現(xiàn)舔足者、30s不出現(xiàn)舔足者或跳躍者棄之不用。重復(fù)測1次，將兩次痛閾的平均值作為該鼠給藥前的痛閾值。選取在5～30s有痛域反應(yīng)的合格小鼠50只，隨機(jī)分為5組，空白對照組給予理鹽水，陽性對照組給予羅通定片(0.06 g/kg)，試驗(yàn)組給予地膽草水提物(0.45，1.36，4.08 g/kg)，每天灌胃給藥1次，連續(xù)3 d，末次給藥后30、60、90 min分別測定痛閾值。如60 sec無反應(yīng)，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾值以60 sec計(jì)算。

4 統(tǒng)計(jì)方法

5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.1 地膽草水提物對角叉菜膠足趾腫脹的影響 地膽草水提物中、高劑量組、陽性對照組(羅通定片)均能明顯抑制大鼠角叉菜膠所引起的足趾腫脹程度，與空白對照組比較均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)果表明地膽草水提物具有一定程度的抗炎活性。見表1。

表1 地膽草水提物對角叉菜膠足趾腫脹的影響±s,n=10)

注：與空白組比較，*P<0.05

5.2 地膽草水提物對大鼠毛細(xì)血管通透性的影響 地膽草水提物中、高劑量組和陽性對照組(羅通定片)能顯著降低大鼠毛細(xì)血管通透性(P<0.05)，具有明顯的抗炎作用。見表2。

表2 地膽草水提物對大鼠毛細(xì)血管通透性的影響±s,n=10)

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.05

5.3 地膽草水提物對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響 地膽草水提物中、高劑量組和陽性對照組(羅通定片)可明顯減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù)，與空白對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)果表明地膽草水提物對醋酸腹腔注射所致的小鼠內(nèi)臟疼痛有抑制作用。見表3。

表3 地膽草水提物對醋酸致小鼠疼痛(扭體)的影響±s,n=10)

注：與空白組比較*P<0.05

5.4 地膽草水提物對小鼠熱板鎮(zhèn)痛的影響 地膽草水提物高劑量組及陽性對照組(羅通定片)能明顯延遲小鼠舔后足時間，提高小鼠痛域值，與空白對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；地膽草水提物中、低劑量組無顯著性差異。結(jié)果表明地膽草水提物對熱致痛具有鎮(zhèn)痛作用。見表4。

表4 地膽草水提物對小鼠熱板鎮(zhèn)痛的影響±s,n=10)

注：與同時間點(diǎn)空白組比較，*P<0.05，**P<0.05

6 討論

地膽草(Elephantopusscaber Linn)為菊科地膽草屬植物，產(chǎn)于浙江、福建、云南、貴州等地，云南省地膽草主產(chǎn)區(qū)為文山州[4]。該屬約有30余種，多集中分布于新熱帶地區(qū)，我國僅有2種，即地膽草和白花地膽草[5]。地膽草又名地膽頭、苦地膽，全株可入藥，民間認(rèn)為地膽草具有清熱、涼血、利尿的功效，主治感冒、鼻衄、黃疸、腸胃炎、咽喉炎、腎、濕疹、疔瘡、蛇蟲咬傷。本公司科研小組對地膽草水提物的鎮(zhèn)痛抗炎作用進(jìn)行了動物實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其具有良好的鎮(zhèn)痛抗炎作用，為地膽草的進(jìn)一步開發(fā)和臨床應(yīng)用提供了一定的藥理學(xué)依據(jù)。地膽草現(xiàn)用的為水提物，其它如醇提物等是否有效或更有效值得進(jìn)一步研究。

地膽草主要化學(xué)成分為倍半萜內(nèi)酯類、三萜類，還含有有機(jī)酸、黃酮、炔烯類等化合物。其鎮(zhèn)痛作用可能是通過調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能而實(shí)現(xiàn)的，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。通過對其水溶性及脂溶性成份的研究，發(fā)現(xiàn)水溶性組份具有較好的鎮(zhèn)痛效果。初步掌握了具有鎮(zhèn)痛作用的組份和化學(xué)物，為新藥的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

[1]陳奇，沈映君，劉青云，等.中藥藥理學(xué)試驗(yàn)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2001：24.

[2]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：366-367.

[3]李才.人類疾病動物模型的復(fù)制[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：418-420.

[4]云南省藥物研究所.《云南主要天然藥物》光盤.

[5]陳藝林.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1985：43-47.

溫先敏(1958-),男,山西人，博士，研究方向：天然藥物的研究。

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1007-2349(2015)12-0071-02

2015-09-14)