楊立國(guó)，張英杰，謝佳穎，夏偉軍，張海元，梅雙喜

(云南省藥物研究所，云南白藥集團(tuán)創(chuàng)新研發(fā)中心，云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明 650111)

梔子藥材的薄層鑒別方法研究*

楊立國(guó)，張英杰，謝佳穎，夏偉軍，張海元，梅雙喜△

(云南省藥物研究所，云南白藥集團(tuán)創(chuàng)新研發(fā)中心，云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明 650111)

目的 建立梔子藥材的薄層鑒別方法。方法 以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對(duì)照品，對(duì)梔子藥材進(jìn)行薄層鑒別，并考察了不同展開(kāi)系統(tǒng)、不同顯色方法、不同廠(chǎng)家薄層板、不同展距、不同點(diǎn)樣量、不同預(yù)飽和時(shí)間、不同溫度和不同濕度對(duì)梔子藥材薄層色譜的影響。結(jié)果 以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對(duì)照品，三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開(kāi)系統(tǒng)，所得薄層色譜斑點(diǎn)清晰，專(zhuān)屬性強(qiáng)。結(jié)論 該鑒別方法簡(jiǎn)單可行，重復(fù)性好，可作為梔子藥材的薄層鑒別方法。

梔子；梔子苷；異梔子苷；京尼平龍膽雙糖苷；西紅花苷-Ⅰ；薄層鑒別

梔子(Gardenia jasminoides Ellis)為梔子屬植物梔子的干燥成熟果實(shí)，是我國(guó)衛(wèi)生部頒布的第一批藥食兩用資源，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，中國(guó)歷版藥典和其它本草均有記載。其性苦、寒，歸心、肺、三焦經(jīng)，具有泄火除煩，清熱利尿，涼血解毒之功效，臨床廣泛用于熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等證[1]。

梔子是云南省藥物研究所研制的“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等產(chǎn)品的重要原料之一[2]，為了有效的控制其質(zhì)量，我們對(duì)其薄層鑒別方法進(jìn)行了研究。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[3]報(bào)道，梔子中含有多種化學(xué)成分，包括環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、西紅花苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、奎寧酸類(lèi)等。其中，環(huán)烯醚萜苷類(lèi)和西紅花苷類(lèi)成分是梔子中兩類(lèi)主要有效成分[4]。而在上述兩類(lèi)有效成分中，含量較高的四個(gè)成分為梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ[5]。但當(dāng)前多數(shù)研究[6-9]主要通過(guò)梔子苷對(duì)梔子藥材進(jìn)行鑒別，忽略了其余幾個(gè)有效成分(異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ)，無(wú)法全面而準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)梔子藥材的質(zhì)量。本研究以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對(duì)照品，對(duì)梔子藥材的薄層鑒別方法進(jìn)行了完善。

1 儀器與材料

SK8200HP超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；ZF-90多功能暗箱式紫外投射儀(上海寶山顧村電光儀器廠(chǎng))；瑞士Mettler Toledo AG285電子天平；薄層色譜展開(kāi)缸(上海信誼儀器廠(chǎng))；默克薄層層析硅膠G板(默克化工技術(shù)上海有限公司)；青島海洋高效G板和普通G板(青島海洋化工廠(chǎng)分廠(chǎng))；梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和梔子對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；異梔子苷和京尼平龍膽雙糖苷購(gòu)自成都普菲德生物技術(shù)有限公司；梔子藥材購(gòu)自江西撫州，經(jīng)云南省藥物研究所邱斌高級(jí)工程師鑒定，標(biāo)本保存于云南省藥物研究所標(biāo)本室；試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜條件的考察

2.1.1 對(duì)照藥材及藥材供試品溶液的制備 取對(duì)照藥材或梔子藥材粉末1 g，加甲醇10 mL，超聲處理20 min，放冷至室溫，過(guò)濾，取濾液作為供試品溶液。

2.1.2 混合對(duì)照品溶液的制備 分別取梔子苷、異梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和京尼平龍膽雙糖苷各0.5 mg，加甲醇2 mL溶解，作為混合對(duì)照品溶液。

2.1.3 展開(kāi)系統(tǒng)的考察 分別吸取混標(biāo)溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，以(1)乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5：5：1：1)，(2)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(3：1：0.05)，(3)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)三種不同展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖1。綜合比較圖中斑點(diǎn)數(shù)目、分離度等情況，可確定系統(tǒng)(3)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為最佳展開(kāi)系統(tǒng)。

1-混標(biāo)；2-對(duì)照藥材；3-梔子藥材；A-系統(tǒng)(1)；B-系統(tǒng)(2)；C-系統(tǒng)(3)

圖1 展開(kāi)系統(tǒng)的考察

2.1.4 檢視方法的選擇 分別吸取混標(biāo)溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開(kāi)，取出，晾干，經(jīng)日光、10%硫酸-乙醇及365nm紫外燈下三種檢視方式檢視，結(jié)果見(jiàn)圖2。綜合比較圖中斑點(diǎn)數(shù)目及清晰情況，可確定(B)10%硫酸-乙醇顯色為最佳檢視方式。

1-混標(biāo)；2-對(duì)照藥材；3-梔子藥材；A-日光下檢視；B-10%硫酸乙醇顯色；C-10%硫酸乙醇顯色后，365nm下檢視

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 重復(fù)性考察 按2.1.1供試品溶液制備方法制備供試品溶液6份，分別吸取混標(biāo)溶液和上述6份供試品溶液2 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明，供試品溶液制備方法的重復(fù)性良好。

1-混標(biāo)；2、3、4、5、6、7-梔子藥材

2.2.2 耐用性考察

2.2.2.1 不同廠(chǎng)家薄層板的考察 分別吸取混標(biāo)溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點(diǎn)于三種不同薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖4。結(jié)果表明，默克硅膠G板的分離效果優(yōu)于青島海洋硅膠G板和青島海洋高效硅膠G板。

1-混標(biāo)；2-對(duì)照藥材；3-梔子藥材；A-默克硅膠G板；B-青島海洋G板；C-青島高效G板

2.2.2.2 不同展距的考察 分別吸取混標(biāo)溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點(diǎn)于不同薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開(kāi)，展距分別為8 cm、10 cm、12 cm，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖5。結(jié)果表明，展距為8 cm時(shí)，分離效果不佳；展距為12 cm時(shí)，斑點(diǎn)拖尾較嚴(yán)重，故選擇展距為10 cm。

1-混標(biāo)；2-對(duì)照藥材；3、4-梔子藥材；A-展距8 cm；B-展距10 cm；C-展距12 cm

2.2.2.3 不同點(diǎn)樣量的考察 分別吸取梔子供試品溶液1、2、4 μL，混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液2 μL，點(diǎn)于同一薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖6。結(jié)果表明，點(diǎn)樣量為2 μL時(shí)斑點(diǎn)較為清晰，故確定供試品的點(diǎn)樣量為2 μL。

1-混標(biāo)；2、3-梔子藥材1μl；4、5-梔子藥材2μl；6、7-梔子藥材4μl

2.2.2.4 不同預(yù)飽和時(shí)間的考察 分別吸取混標(biāo)溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點(diǎn)于三塊不同薄層板上，分別以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開(kāi)系統(tǒng)，預(yù)飽和時(shí)間分別為0 min、15 min和30 min，展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖7。結(jié)果表明，飽和15 min時(shí)，斑點(diǎn)較為清晰，且分離效果較好，故選擇預(yù)飽和15 min。

1-混標(biāo)；2-對(duì)照藥材；3、4-梔子藥材；A-預(yù)飽和0min；B-預(yù)飽和15min；C-預(yù)飽和30min

2.2.2.5 不同展開(kāi)溫度的考察 分別吸取混標(biāo)溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點(diǎn)于三塊不同薄層板上，分別以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開(kāi)系統(tǒng)，在4°C、21°C、32°C的條件下展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖8。結(jié)果表明，展開(kāi)溫度對(duì)展開(kāi)效果影響不大，故選擇室溫下展開(kāi)。

1-混標(biāo)；2-對(duì)照藥材；3-梔子藥材；A-4°C；B-21°C；C-32°C

2.2.2.6 不同展開(kāi)濕度的考察 分別吸取混標(biāo)溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點(diǎn)于三塊不同薄層板上，分別以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開(kāi)系統(tǒng)，在相對(duì)濕度32%、58%、72%的條件下展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖9。結(jié)果表明，相對(duì)濕度對(duì)分離效果及斑點(diǎn)的清晰程度影響不大。

1-混標(biāo)；2-對(duì)照藥材；3-梔子藥材；A-相對(duì)濕度32%；B-相對(duì)濕度58%；C-相對(duì)濕度72%

2.3 十批梔子藥材的薄層鑒別 按照2.1和2.2確定的色譜條件，將對(duì)照藥材及10批供試品藥材點(diǎn)于同一薄層板上，展開(kāi)，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，可見(jiàn)光下檢視，結(jié)果見(jiàn)圖10。結(jié)果表明，所建立的方法分離度高，重現(xiàn)性好，可用于梔子藥材的鑒別。

1-對(duì)照藥材；2-11十批梔子藥材

3 討論

3.1 梔子藥材是云南省藥物研究所研制的“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等產(chǎn)品的重要原料之一，本研究所建立的梔子藥材的薄層鑒別方法，可用于梔子藥材的質(zhì)量控制，為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等產(chǎn)品質(zhì)量的均一、穩(wěn)定奠定了方法基礎(chǔ)。

3.2 先前相關(guān)文獻(xiàn)主要通過(guò)梔子苷對(duì)梔子藥材進(jìn)行鑒別，忽略了其余幾個(gè)有效成分(異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ)，無(wú)法全面而準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)梔子藥材的質(zhì)量。本研究以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對(duì)照品，對(duì)梔子藥材的薄層鑒別方法進(jìn)行了完善，為實(shí)現(xiàn)梔子藥材質(zhì)量的有效控制奠定了基礎(chǔ)。

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云南省科技領(lǐng)軍人才培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(NO：2014HA001)。

楊立國(guó)(1985-)，男，河北，工程師，主要從事天然藥物化學(xué)方面的研究。

△通信作者：梅雙喜，E-mail：13211783158@126.com

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2015-09-29)