不同產(chǎn)地金銀花抑菌效果的比較研究

陳會良，張 瑩，陳文娥

(安徽科技學(xué)院 動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100)

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不同產(chǎn)地金銀花抑菌效果的比較研究

陳會良，張 瑩，陳文娥

(安徽科技學(xué)院 動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100)

研究不同產(chǎn)地金銀花水提液的體外抑菌效果。采用乙醇加熱回流法提取金銀花中的藥物有效成分，過濾離心沉淀制成醇提液，用K-B紙片擴散法測定其對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的抑菌活性。結(jié)果表明湖南產(chǎn)的金銀花的抑菌效果最好，對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌均有抑菌作用，而河北產(chǎn)的金銀花的抑菌活性最低。

金銀花；醇提液；抑菌效果

金銀花(FlosLoniceraeJaponicae)為忍冬科植物忍冬(LoniceraJaponicaThunb)的干燥花蕾或是帶初開的花[1]。忍冬在我國分布廣泛，全國大部分地區(qū)均有栽培，資源十分豐富。金銀花味甘、性寒、氣芳香。具有清熱解毒、涼血散風(fēng)、護肝利膽和抗菌、抗病毒、止血、降血脂、抗氧化等功效，臨床上用于主治溫病發(fā)熱、熱毒血痢、癰腫、疔瘡、喉痹、丹毒等癥。金銀花為臨床常用中藥，并有“中藥之中的青霉素”之稱。金銀花主要成分有：綠原酸、異綠原酸、阿魏酸、白果酸、咖啡酸、金絲桃苷、忍冬苷、本犀草苷、蘆丁等，這些化學(xué)成分均具有較強的抗病毒、抗菌作用[2]。目前對金銀花的抑菌作用研究較多[3-4]，但有關(guān)不同產(chǎn)地的金銀花抑菌效果如何尚未見報道，本文以不同產(chǎn)地金銀花抑菌活性的比較研究為題，以期為金銀花臨床應(yīng)用提供相關(guān)的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材與試劑 不同產(chǎn)地金銀花(包括山東、湖北、湖南、河北和河南產(chǎn))均購自亳州滬樵中藥飲片廠。營養(yǎng)瓊脂、無水乙醇等試劑均為分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)。

1.1.2 試驗菌株 沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌均由安徽科技學(xué)院動物醫(yī)學(xué)實驗室保存。采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)。

1.1.3 試驗儀器 TDL-16C型高速臺式離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)；不銹鋼立式壓力蒸汽滅菌器(上海三申醫(yī)療器械廠)；AL204型電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；超凈工作臺(蘇州安泰空氣技術(shù)公司)；GNP-9270BS電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海新苗醫(yī)療器械有限公司)；游標(biāo)卡尺，規(guī)格(0～150)mm×0.02 mm，(安徽桐城量具廠)；101AS-3型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海躍欣科儀廠)。

1.2 試驗方法

1.2.1 金銀花醇提掖的提取及工作液的制備 取河南、山東、河北、湖南、湖北五產(chǎn)地金銀花，各10.0 g，加50 %乙醇100 mL，熱回流提取1.0 h，連續(xù)2次，合并濾液，3000 r/min離心15min，收集上清液減壓濃縮定容至5.0 mL，即得濃度為2.0 g/mL的金銀花醇提液。

1.2.2 抑菌試驗

1.2.2.1 藥敏紙片的制備 將普通定性濾紙用打孔器制成6.0 mm直徑圓形紙片，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，高壓蒸汽滅菌器中121.3 ℃、15 min滅菌后，取出放入恒溫干燥箱內(nèi)干燥。取經(jīng)干燥后的圓形紙片，分別浸入山東、湖北、湖南、河北、河南產(chǎn)地的金銀花醇提液中，浸潤5min后取出備用。

1.2.2.2 培養(yǎng)基的制備 精確稱取20.0 g營養(yǎng)瓊脂，于2000 mL的三角燒瓶中加蒸餾水1000 mL，邊加邊攪拌，使?fàn)I養(yǎng)瓊脂粉混合均勻。放入高壓蒸汽滅菌器中經(jīng)121.3 ℃、15 min滅菌，取出冷卻至約65℃左右時倒入經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)皿中，厚度約3～5 mm，冷卻凝固后備用。

1.2.2.3 參照菌株的培養(yǎng) 在無菌條件下，用劃線法分別接種大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌于制作好的培養(yǎng)基中。將接種后的培養(yǎng)皿置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，24 h后取出放入4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2.4 體外抑菌試驗 在超凈工作臺中，用無菌鑷子，將含不同濃度的藥液紙片均勻間隔貼于各營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面。各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板邊緣應(yīng)大于15mm，且要輕觸紙片使其與培養(yǎng)基表面接觸良好，然后放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h，用游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。各藥液對每種試驗菌株均做3個重復(fù)，取其抑菌圈直徑平均值。

金銀花提取物抑菌效果的判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑大于20 mm為高敏、10～19 mm為中敏、小于10 mm為鈍敏[5]。

2 結(jié)果與分析

從表1可知,山東產(chǎn)的金銀花對大腸桿菌的抑菌圈直徑比對沙門氏菌和枯草芽孢桿菌的都大，湖北產(chǎn)的金銀花對枯草芽孢桿菌的抑菌圈最大，其次是大腸桿菌，對沙門氏菌和金黃色葡萄球菌均無抑菌圈；湖南產(chǎn)的金銀花對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑最大，其次是大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，對沙門氏菌的抑菌圈直徑最??；河北產(chǎn)的金銀花只對枯草芽孢桿菌有抑菌圈，對其它三種菌株均無抑菌圈；河南產(chǎn)的金銀花除了對沙門氏菌無抑菌圈，對另外三種菌株都有抑菌圈，其中對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑最大，對大腸桿菌的抑菌圈最小。

表1 不同產(chǎn)地金銀花對不同細(xì)菌的抑菌效果(mm)

3 討論

細(xì)菌耐藥性是國內(nèi)外醫(yī)藥領(lǐng)域關(guān)注的熱點，用中草藥降低或延緩細(xì)菌的耐藥性是防止細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的有效措施之一。我國中草藥資源豐富, 中醫(yī)藥歷史悠久。許多中草藥被證實具有抗菌、抗病毒的作用。金銀花對甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、沙門氏菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌等多種致病菌均有較強的抑制作用[6-7]。

金銀花抗菌抗病毒的有效成分以綠原酸、異綠原酸、總環(huán)烯醚萜、咖啡酰奎寧酸、黃酮類化合物等為主成分。金銀花提取物的制備多采用水提醇沉、水提、稀醇提取、超聲波提取等方法。已有研究表明，70%的中草藥乙醇提取液的抗菌活性高于水煎液，這是因為乙醇將中草藥中的一些有效抗菌成分溶解提取出來，從而使醇提液表現(xiàn)出較強的抗菌活性[8]。采用水溶液浸提，后用乙醇沉淀除去浸提液中的雜質(zhì)，這樣可將提取液中的樹脂、蛋白質(zhì)等不溶性成分分離除去，保留如有機酸、氨基酸、生物堿、苷類等水溶性成分,增加了抑菌成分的有效濃度。本試驗采用稀醇提取的方式，方法簡便易行，成本低，活性組分收得率較高，故該法有一定的實用應(yīng)用價值。

本試驗中，不同產(chǎn)地的金銀花對四種細(xì)菌的抑菌效果差異明顯，湖南產(chǎn)金銀花其抑菌效果最好，對四種菌株都有抑菌作用。而河北產(chǎn)的金銀花的抑菌效果低，只對枯草芽孢桿菌有抑菌效果。雖然2010年版《中國藥典》收載忍冬科植物忍冬作為金銀花藥材的唯一植物來源，但是金銀花在我國分布廣泛，不同產(chǎn)地金銀花的化學(xué)成分基本相同，但其有效成分的含量存在一定的差異。另外，不同品種、采收期等都會影響金銀花的質(zhì)量，從而產(chǎn)生不同的抑菌效果。因此，臨床應(yīng)用金銀花時，建議首選湖南產(chǎn)的金銀花入藥。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].

[2]韓永成，劉偉，陳寧，等. UHPLC 法同時測定金銀花中6種有效成分的含量[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2015，27(1):89-93.

[3]林丹，趙國玲，劉佳佳.中藥金銀花藥用成分的提取及抑菌實驗的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15(5):436-437.

[4]宋海英，邱世翠，王志強，等，金銀花的體外抑菌作用研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2003,14(5):269.

[5]楊建江，韓文瑜，杜銳，等．30種中草藥對耐藥性豬鏈球菌的抑菌試驗[J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2004，23(2):14-16．

[6]洪亮，葉威.金銀花、山銀花綠原酸類提取物體內(nèi)外抑菌作用研究[J]. 生物技術(shù)世界，2015(5):105-107.

[7]蘇香萍 ，龔大春 ，張亞雄，等. 金銀花二氧化碳超臨界萃取物的體外抑菌作用研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2009，20(4):832-834.

[8]李京晶，籍保平，李博，等.十味中草藥提取液的體外抗菌活性研究[J]. 食品科學(xué)，2006,27(4):147-150.

Antibacterial Activity Comparison ofLonicerajaponicaThunbfrom Different Places

CHEN Hui-liang, ZHANG Ying, CHEN Wen-e

(College of Animal Science,Anhui Science and Technology University,Fengyang 233100,China)

Antibacterial effect ofLonicerajaponicaThunbfrom different places were investigated. The effective ingredients ofLonicerajaponicaThunbwere extraverted by alcohol extraction circumfluence，K-B diffusion method was used to deterimine antimicrobial effects ofLonicerajaponicaThunbfrom different places onStaphylococcusaureus,Escherichiacoli,SalmonellaandBacillussubtillis. The results show thatLonicerajaponicaThunbfrom Hunan province had the best antibacterial effect against four bacterials,and the antibacterial effect was worst ofLonicerajaponicaThunbfromHubeiProvince.

LonicerajaponicaThunb;Extract;Antimicrobial effect

2015-05-28

安徽省教育廳優(yōu)秀青年人才基金項目(2011SQRL120)；安徽科技學(xué)院重點學(xué)科建設(shè)項目(AKXK20101-2)。

陳會良(1962-)，男，安徽省靈璧縣人，高級實驗師，主要從事臨床獸醫(yī)學(xué)研究。

R931.71

A

1673-8772(2015)04-0067-03