HPLC法測定奧美拉唑鎂原料藥中醋酸的殘留量

李菊平，劉效平，金永亮

(1.山東大學藥學院，山東 濟南 250012;2.壽光富康制藥有限公司，山東 濰坊 262700;3.西北農林科技大學資源環(huán)境學院，陜西 咸陽 712100)

在奧美拉唑鎂工藝合成中使用了醋酸［1～4］調節(jié)pH，醋酸殘留在文獻中一般采用氣相色譜法［5～9］測定醋酸的殘留，但在試驗過程發(fā)現(xiàn)氣相色譜GCFID色譜條件下方法的冰醋酸的響應值很小，且重現(xiàn)性受GC色譜條件如溶劑、不同批次的色譜柱、不同品牌的儀器靈敏度影響大。因此我們使用更為穩(wěn)定的高效液相色譜法(HPLC)系統(tǒng)使用外標法對奧美拉唑鎂冰醋酸的殘留進行控制，由于奧美拉唑在此波長210 nm下沒有吸收，因此對冰醋酸的吸收峰沒有干擾，且在實驗中發(fā)現(xiàn)，若成品中的醋酸殘留超過0.05%很容易使奧美拉唑鎂降解［2］，UV吸光度變化明顯，導致藥物不穩(wěn)定，《中國藥典》2015年版［10］和人用藥品注冊技術要求國際協(xié)調會(ICH)中均將醋酸列為三類溶劑，因此需要對它的殘留量進行檢測［11］。文獻沒有用HPLC法C18色譜柱進行檢測原料藥中醋酸的報道，相對于已有的離子色譜法［12］，C18色譜柱比離子色譜柱更耐用、更穩(wěn)定。本文建立了HPLC方法C18色譜柱測定醋酸在奧美拉唑鎂的殘留，方法靈敏，色譜柱耗材易于采購，穩(wěn)定性好，檢測成本低，操作簡便、結果準確，方法重現(xiàn)性好 符合《中國藥典》2015年版［10］的有關規(guī)定。

1 儀器與試藥

Agilent 1200液相色譜儀，UV檢測器，自動進樣器，柱溫箱，X －Bridge TM C18(4.6mm ×250mm，5μm)色譜柱;奧美拉唑鎂原料藥(壽光富康制藥有限公司，批號:52111505001、52111505002、52111505003)。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱:X－Bridge C18(4.6mm×250mm，5μm)檢測波長:210nm;流速:1.2mL·min－1;進樣量:20μL;柱溫:35 ℃;流動相:0.07%磷酸溶液(用氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至3.0):甲醇 =950∶50;溶媒:50%甲醇。

2.2 方法 標準貯備液:取醋酸100mg，精密稱定，置于100mL容量瓶中，用溶媒稀釋至刻度。

對照品溶液:準確量取5mL標準貯備液置于100mL容量瓶中，用溶媒稀釋至100mL。

供試品溶液:稱取樣品1.0g，精密稱定，置于10mL容量瓶中，用溶媒溶解，漩渦振蕩器振蕩1min，混合均勻，用溶媒稀釋至刻度，微孔濾膜過濾。

系統(tǒng)適用性:①對照溶液連續(xù)進樣6次，RSD≤2%;②分離度溶液中雜質峰與相鄰雜質峰的分離度應大于1.5。圖譜見圖1。

外標法計算:奧美拉唑鎂中殘留的醋酸不得超過0.05%(即10%的ICH限度)。

圖1 HPLC圖譜

2.3 線性關系考察 分別精密量取“2.2”項下的標注貯備液1、2、4、5、6mL 分置于5 個100mL 容量瓶中，分別用溶媒稀釋至100mL，搖勻，得系列濃度的溶液，按“2.2”項下的色譜條件測定，分別以濃度X(mg·mL－1)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標進行線性回歸，醋酸在其濃度范圍內線性關系良好)。線性方程為:Y=0.01209X+582.94186;相關系數(shù) r=0.999994。結果:冰醋酸檢測濃度線性范圍為0.01 ～0.06mg·mL－1。

2.4 精密度試驗 取對照溶液，按，按“2.1”項下的色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，醋酸峰面積的檢測結果為29.82、29.26、28.51、28.74、29.62、28.58，平均值為29.09，RSD 為1.92%，精密度良好。

2.5 檢測限定量限試驗 將對照品濃溶液逐級稀釋后，依法測定，直至信噪比 S/N=10.4 不低于10∶1，所得的最低檢測濃度即為定量限度 25.0 μg·mL－1(250 ppm);直至信噪比 S/N=3.1 不低于3∶1，所得的最低檢測濃度即為檢測限度 5.0 μg·mL－1(50 ppm)，且檢測限低于定量限的30%。

2.6 回收率試驗 分別稱取奧美拉唑鎂(批號:52111505001)5 g，精密稱定，置于9個50mL容量瓶中，按照限度要求對限度濃度的80%、100%、120%3個水平對9份樣品進行加標，即加入4、5、6mL標準儲備液，每個水平濃度重復3次，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，計算醋酸的回收率和RSD，結果見表1。

表1 回收率試驗結果

結果表明，3個濃度下方法的回收率滿足要求。

2.7 樣品測定 分別量取對照溶液和供試品溶液按“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算供試品中醋酸的殘留，結果3批樣品(批號:52111505001、52111505002、52111505003)均未檢出。

3 討論

冰醋酸在奧美拉唑鎂的工藝中既是反應物又調節(jié)pH值，酸性物質的存在會對奧美拉唑鎂的穩(wěn)定性產生影響，酸性條件下產品很容易降解，為增加產品的穩(wěn)定性，需要用穩(wěn)定、經(jīng)濟的方法對冰醋酸在原料藥奧美拉唑鎂中的殘留進行嚴格控制?！吨袊幍洹?015年版和人用藥品注冊技術要求國際協(xié)調會(ICH)中均將醋酸列為三類溶劑，殘留限度是5000 ppm。用常規(guī)的頂空－氣相色譜(HS－GC)法檢測發(fā)現(xiàn)其峰面積響應值很小，信噪比S/N低于3.0;而用氣相色譜－質譜(GC－MS)檢測會增加產品的檢測成本。因此我們開發(fā)HPLC法對冰醋酸的殘留進行控制，冰醋酸能夠與奧美拉唑鎂中的可檢測組分完全分離，準確度高，并且檢測成本低。雖然法定限度是NMT 5000 ppm，但我們對冰醋酸制定了更嚴格的內控標準NMT 500 ppm(10%的ICH限度)，保證了產品在整個生命周期內的穩(wěn)定性。

［1］馮常煒，李振峰，趙治國，等.奧美拉唑鎂腸溶片與奧美拉唑膠囊治療消化性潰瘍的臨床隨機對照研究［J］.胃腸病學和肝病學雜志，2004，13(4):414 －416.

［2］樓忠裕，王康達.奧美拉唑鎂腸溶片長期維持治療慢性復發(fā)性消化性潰瘍臨床觀察［J］.現(xiàn)代實用醫(yī)學，2008，20(5):362.

［3］劉開明.奧美拉唑治療消化性潰瘍的劑量與療程分析［J］.中國現(xiàn)代藥物應用，2010，4(19):20 －22.

［4］英君伍.雙氧水催化氧化法合成奧美拉唑的研究［D］.大連:大連理工大學，2012.

［5］嚴歡，唐明清，毛艷，等.毛細管氣相色譜法測定氯高鐵血紅素原料藥中的冰醋酸殘留量［J］.中國藥房，2012，23(45):4285 －4286.

［6］孟濤，唐奎山，尤楠.齊多夫定中冰醋酸殘留量檢測方法研究［J］.遼寧醫(yī)藥，2007，22(3):21 －22.

［7］黃京芳，徐沄，彭方，等.毛細管氣相色譜法同時測定鹽酸氨溴索中乙醇、醋酸和甲苯殘留量［J］.藥物分析雜志，2005，25(4):466 －468.

［8］解艷，呂文博.氣相色譜法檢查醋酸鉀中冰醋酸殘留量［J］.科技創(chuàng)新與應用，2014，10:15.

［9］井玥，王剛，張愛蓮，等.氣相色譜法測定磺胺多辛中的冰醋酸和N，N－二甲基甲酰胺殘留［J］.南京師大學報(自然科學版)，2012，35(2):93 －96.

［10］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015版(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

［11］王梅.梯度洗脫HPLC法測定尼莫地平原料藥中殘留醋酸［J］.齊魯藥事，2012，31(7):404 －406.

［12］晏菊姣.離子色譜法測定鹽酸氨溴索中醋酸殘留量［J］.中國藥品標準，2008，9(3):203－205.