鄰二氯苯對斑馬魚的急性毒性

裘麗萍　范立民　劉琦　陳家長

摘要 [目的]了解鄰二氯苯對斑馬魚的急性毒性。[方法]采用靜態(tài)試驗(yàn)法，參照《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》中有關(guān)急性毒性方法測定鄰二氯苯對斑馬魚的急性毒性。[結(jié)果]鄰二氯苯對斑馬魚96 h的半數(shù)致死濃度（LC50）為5.13 mg/L，安全質(zhì)量濃度（SC）為0.51 mg/L。[結(jié)論]根據(jù)魚類急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，鄰二氯苯屬于高毒性物質(zhì)。

關(guān)鍵詞 鄰二氯苯；急性毒性；斑馬魚；安全濃度

中圖分類號 S931.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號 0517-6611（2015）19-091-02

斑馬魚具有價(jià)格低廉、容易獲得、管理飼養(yǎng)易行等諸多優(yōu)點(diǎn)，而且斑馬魚基因與人類基因的相似度達(dá)到87%，這意味著在其身上進(jìn)行藥物試驗(yàn)所得到的結(jié)果在多數(shù)情況下也適用于人體，因此它受到生物學(xué)家的重視并廣泛應(yīng)用于環(huán)境毒理學(xué)的模式生物[1-3]。

鄰二氯苯是重要的農(nóng)藥、醫(yī)藥和染料中間體和聚氨酯TDI溶劑，用于制造氟氯苯胺、三氯殺蟲酯、二氯苯胺、鄰苯二酚、沙星類抗淋病藥、氟哌酸，此外還廣泛用作樹脂、焦油、瀝青、橡膠等溶劑以及金屬防腐劑、脫脂劑、有機(jī)載熱劑等。鄰二氯苯在農(nóng)藥方面主要用于生產(chǎn)蚊蠅凈、五氯硝基苯芐嘧費(fèi)隆，還可用于制造水稻專用除草劑如丙基縮苯胺、敵草隆和利谷隆等。鄰二氯苯還廣泛用作有機(jī)物和有色金屬氧化物的溶劑、防腐劑，也用作殺蟲劑。目前關(guān)于鄰二氯苯的研究主要集中在合成和測定上，關(guān)于其毒性方面的報(bào)道很少。為此，筆者研究了鄰二氯苯對斑馬魚的急性毒性[4-5]，旨在為鄰二氯苯的毒性評價(jià)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑與儀器。

鄰二氯苯（含量大于98%）和助溶劑二甲亞砜（含量大于98%）均購自上海安譜科學(xué)儀器有限公司，由德國CNW科技公司生產(chǎn)。德國 Eppendorf移液槍、METTLER AL204電子分析天平、5 L玻璃圓形水槽。

1.1.2 試驗(yàn)用魚。

試驗(yàn)斑馬魚購自無錫市南禪寺花鳥魚市場，平均體重為（0.20±0.02）g，平均體長為（2.4±0.2）cm。試驗(yàn)前經(jīng)篩選并在水族箱中馴養(yǎng)10 d以上，自然死亡率低于2%，馴養(yǎng)期間每日定時(shí)投顆粒餌料，試驗(yàn)前1 d開始禁食，選擇活動(dòng)性強(qiáng)的健康魚供試驗(yàn)用，試驗(yàn)期間不喂食。

1.1.3 試驗(yàn)用水。試驗(yàn)用水為曝氣3 d后除氯的自來水，pH 7.02～7.06，總硬度為8.10～8.15（德國度），水質(zhì)溶氧量保持在5 mg/L以上。水中含Zn 0.02 mg/L、Fe 0.05 mg/L，Pb、Cu和Cd未檢出。水質(zhì)化學(xué)需氧量（COD）為2.05～2.25 mg/L，水溫為（27±1）℃。

1.2 試驗(yàn)方法 按國家環(huán)境保護(hù)總局等編著的《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》[6]中有關(guān)急性毒性方法進(jìn)行測定。

采用靜態(tài)試驗(yàn)法，設(shè)定鄰二氯苯濃度梯度為1、3、5、8、10 mg/L。在水槽中裝入3 L曝氣自來水，每槽飼養(yǎng)斑馬魚10尾， 根據(jù)所設(shè)置的濃度分別加入一定體積的鄰二氯苯儲(chǔ)備液，配制成5個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)平行，同時(shí)設(shè)空白對照和助溶劑對照組。試驗(yàn)期間不喂食，前8 h連續(xù)觀察，記錄魚的反應(yīng)情況，及時(shí)撈出死亡個(gè)體，隨后在24、48、72、96 h觀察魚死亡情況并記錄。判斷死亡標(biāo)準(zhǔn)：魚腹部向上，鰓蓋停止運(yùn)動(dòng)，用玻璃棒或鑷子反復(fù)輕擊魚的尾部，如魚體不產(chǎn)生任何應(yīng)激反應(yīng)，即判定死亡。

1.3 數(shù)據(jù)處理 根據(jù)各組試驗(yàn)魚在24、48、72、96 h的死亡數(shù)計(jì)算平均死亡率，再轉(zhuǎn)化為概率單位，計(jì)算出試驗(yàn)液濃度的對數(shù)。用直線回歸法求出概率單位數(shù)與試驗(yàn)液濃度對數(shù)的回歸方程，然后根據(jù)方程分別求出鄰二氯苯在24、48、72、96 h對魚類的LC50[6]。SC采用常規(guī)方法計(jì)算：SC=96 h LC50×0.1[6]。

2 結(jié)果與分析

在鄰二氯苯對斑馬魚的96 h急性毒性試驗(yàn)期間觀察發(fā)現(xiàn)，1 mg/L組用藥后72 h斑馬魚開始死亡，96 h死亡率為10%；3 mg/L組用藥后48 h斑馬魚開始死亡，48 h死亡率為20%，96 h死亡率為20%；5 mg/L組用藥后20 h斑馬魚開始死亡，96 h死亡率為40%；8 mg/L組用藥后12 h斑馬魚開始死亡，96 h死亡率為70%；10 mg/L組用藥后7 h斑馬魚開始死亡，96 h死亡率為80%；空白對照和助溶劑對照組96 h內(nèi)斑馬魚不死亡（表1）。

斑馬魚放入鄰二氯苯溶液中，隨著鄰二氯苯濃度的增加，斑馬魚中毒現(xiàn)象嚴(yán)重。在高質(zhì)量濃度組斑馬魚7 h即開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，死亡前游動(dòng)緩慢、側(cè)翻、仰游，呼吸深度加強(qiáng)，鰓蓋張開幅度大。

隨著時(shí)間的延長各試驗(yàn)濃度組的斑馬魚死亡率均呈增加趨勢，而同一時(shí)間下，高濃度組的死亡率明顯高于低濃度組。由此可見，鄰二氯苯對斑馬魚的毒性作用隨其暴露時(shí)間的延長和暴露濃度的增大而增強(qiáng)。

鄰二氯苯對斑馬魚24、48、72和96 h的LC50值分別為60.87、14.00、7.58和5.13 mg/L，SC為0.51 mg/L。按照魚類急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)[6]，鄰二氯苯屬于高毒性物質(zhì)。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，鄰二氯苯對斑馬魚的96 h LC50值為5.13 mg/L，安全濃度為0.51 mg/L，按照魚類急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)[8]，鄰二氯苯屬于高毒性物質(zhì)。國內(nèi)常用的殺蟲劑六六六等都會(huì)對受試魚類產(chǎn)生生物富集[7]、遺傳毒性[8]，對抗氧化應(yīng)激酶活[過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）等][9]造成影響。鄰二氯苯長期暴露對魚類是否產(chǎn)生毒害及其分子生物學(xué)機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 羅帥，李玉文，馬玲，等.離子液體對斑馬魚急性毒性及保護(hù)酶活性的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（3）：786-789.

[2] 胡雙慶.3種農(nóng)藥對斑馬魚的急性毒性及生物安全性評價(jià)[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（35）：21698-21700.

[3] 郭晶，宋文華，丁峰，等.三唑類殺菌劑對斑馬魚急性毒性研究[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010（4）：402-406.

[4] 劉春治.二氯苯的應(yīng)用、生產(chǎn)技術(shù)與市場分析[J].農(nóng)化新世紀(jì)，2004（11）：18-19.

[5] 王艷華.二氯苯的生產(chǎn)應(yīng)用及其衍生產(chǎn)品的開發(fā)[J].沈陽化工，1996（3）：38-41.

[6] 國家環(huán)境保護(hù)總局.水和廢水監(jiān)測分析方法[M].4版.北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社，2002.

[7] 梁丹濤，沈根祥，雙慶，等.六六六在斑馬色體內(nèi)的生物富集情況研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2007， 26（S1）：509-513.

[8] 胡俊西，武向偉，莊文靜.滅多威暴露下斑馬魚的組織學(xué)變化[J].漳州師范學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009（4）：107-111.

[9] 羅朝暉，黃煜，洪彩熔.三唑磷農(nóng)藥對鯽魚肝臟過氧化氫酶活性的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，35（36）：11867-11868.