黑龍江省西瓜細(xì)菌性果斑病防治藥劑的篩選

賈云鶴　王喜慶　付永凱　尤海波　劉思宇　趙會(huì)娟

摘要：為了豐富黑龍江省露地西瓜果斑病的防治藥劑和方法，通過平板抑菌試驗(yàn)和種子消毒處理等方法對(duì)硫酸鏈霉素等17種藥劑進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，在平板抑菌試驗(yàn)中，有噻霉酮等7種藥劑的抑菌圈i>20mm，抑菌效果較好；在種子處理試驗(yàn)中篩選出3%雙氧水浸種30min和2000mg·L^-1噻霉酮浸種30min抑菌效果較好；雙氧水處理種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)為95.6%和12.7mm，噻霉酮處理種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)為97.8%和14mm；噻霉酮和雙氧水處理種子的發(fā)芽率分別比對(duì)照提高22.6%和20.4%，發(fā)芽勢(shì)分別比對(duì)照提高47.4%和33.7%。試驗(yàn)篩選出一種新型藥劑噻霉酮，對(duì)黑龍江省露地西瓜果斑病菌的抑菌效果較好。

關(guān)鍵詞：西瓜；黑龍江??；果斑??；病原菌；防治藥劑

西瓜細(xì)菌性果實(shí)腐斑病，又稱西瓜果斑病、果腐病（Baeterial Fmit Blotch，簡(jiǎn)稱BFB），百姓俗稱陰皮病、尿炕病，是種傳細(xì)菌性病害，近年來由國(guó)外傳人中國(guó)。該病害發(fā)病、傳播迅速，危害嚴(yán)重，目前國(guó)內(nèi)外尚沒有免疫品種，也缺乏特效的防治藥劑。

近年來，黑龍江省西瓜主產(chǎn)區(qū)果斑病爆發(fā)嚴(yán)重。以黑龍江省西瓜主產(chǎn)區(qū)雙城市為例，根據(jù)作者所在的國(guó)家西甜瓜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系哈爾濱綜合試驗(yàn)站（黑龍江省農(nóng)科院園藝分院西瓜研究室）的調(diào)查，雙城市2010-2014年果斑病的自然發(fā)病率分別為70%、60%、30%、15%、20%。

本試驗(yàn)針對(duì)以上情況，對(duì)黑龍江地區(qū)露地西瓜的果斑病病原菌進(jìn)行分離、純化，以分離得到的果斑病病原菌和當(dāng)?shù)刂髟缘穆兜匚鞴掀贩N為試材，期待篩選出適合防治黑龍江省西瓜果斑病的有效藥劑。

1.材料與方法

1.1黑龍江省露地西瓜果斑病病原菌的分離、純化

從黑龍江省露地西瓜主產(chǎn)區(qū)哈爾濱、雙城等地進(jìn)行病樣采集。取樣部位為病瓜內(nèi)表皮（西瓜皮白色的部分）。病原菌的分離純化方法為平板劃線法。

1.2黑龍江省露地西瓜果斑病的防治藥劑篩選

1.2.1多種藥劑的平板抑菌試驗(yàn)本試驗(yàn)應(yīng)用的病原菌為雙城地區(qū)采集、分離的病原菌。應(yīng)用的藥劑包括，1、抗生素5種：72%農(nóng)用硫酸鏈霉素粉劑（華北制藥）、100萬單位獸用硫酸鏈霉素注射用粉劑（哈爾濱獸藥二廠）、90%新植霉素可濕性粉劑（德瑞豐）、2%春雷霉素水劑（華北制藥）、6%春雷霉素可濕性粉劑粉劑（山東立邦農(nóng)化）；2、銅制劑4種：47%加瑞農(nóng)可濕性粉劑（先正達(dá)），33.5%喹啉銅懸浮劑（浙江海正化工）、20%噻菌銅懸浮劑（浙江龍灣化工），53.8%氫氧化銅水分散顆粒（美國(guó)杜邦）；3、消毒劑3種：40%福爾馬林（廣州萬從化工）、30%雙氧水（山東盛通）、10%次氯酸鈉（青島興發(fā)）；4、酸劑2種：鹽酸（新光化工）、乙酸（煙臺(tái)三和化工）；5、新型藥劑3種：噻·硫（中國(guó)農(nóng)科院植保所趙廷昌研究員提供）、溴硝醇（中國(guó)農(nóng)科院蔬菜花卉所王懷松副研究員提供）、噻霉酮（西大華特產(chǎn)品）。共計(jì)17種藥劑。每種藥劑設(shè)3個(gè)濃度，每個(gè)濃度3次重復(fù)，清水為對(duì)照，進(jìn)行平板抑菌試驗(yàn)。紙碟為10mm，所以設(shè)定抑菌圈直徑（從紙碟的圓心開始測(cè)量）>20mm為抑菌效果較好的藥劑。藥劑濃度見表1，每個(gè)紙碟上用1000μL移液槍滴加藥液1滴（約200μL），數(shù)據(jù)取3次重復(fù)的平均值。

1.2.2種子處理藥劑篩選應(yīng)用的西瓜種子品種為雙城當(dāng)?shù)刂髟云贩N‘帝王花冠（無菌種子：種子浸提液平板培養(yǎng)48h無菌落生長(zhǎng)確定為無菌種子），應(yīng)用的病原菌為雙城地區(qū)采集、分離的病原菌。l0⁸cfu·mL^-1的菌液浸泡種子1h制備帶菌種子，瀝水后充分晾干。每個(gè)處理30粒種子，每種藥劑浸種設(shè)3個(gè)時(shí)間，每個(gè)處理3次重復(fù)。應(yīng)用的藥劑及其濃度、劑型為：3%雙氧水、2000mg·L^-1硫酸鏈霉素粉劑、2000mg·L^-1噻霉酮粉劑、0.4%福爾馬林、2000mg·L^-1氫氧化銅水分散顆粒、2000mg·L^-1春雷霉素粉劑、2000mg·L^-1新植霉素可濕性粉劑。處理后漂洗3次，每次30min，每處理90粒種子加人100mL錐形瓶?jī)?nèi)加無菌水25mL，重復(fù)震蕩，離心，沉淀，再加3mL無菌水懸浮，吸取100μL涂板，28℃培養(yǎng)48h觀察帶菌量，>10個(gè)菌落為++++，6-10個(gè)菌落為+++，3—5個(gè)菌落為++，l～2個(gè)為+，0個(gè)為一。然后把90粒種子分成3份30粒，浸泡8h，29℃催芽48h，觀察48h發(fā)芽率和48h發(fā)芽勢(shì)（發(fā)芽長(zhǎng)度，mm）。數(shù)據(jù)取3次重復(fù)的平均值。

2.結(jié)果與分析

2.1黑龍江省露地西瓜果斑病病原菌的分離、純化

從黑龍江省農(nóng)科院園藝分院的露地西瓜試驗(yàn)地和黑龍江省高效現(xiàn)代化大農(nóng)業(yè)示范園區(qū)（雙城）的西瓜地塊采集病樣，采集部位都為西瓜內(nèi)果皮。分離出西瓜果斑病病原菌4份，分別為H-hrb-1、H-hrb-2、H-so-1、H-se-2。經(jīng)過致病性測(cè)定，H-hrb-1、H-sc-2對(duì)西瓜具有致病性（致病性測(cè)定的西瓜材料為園藝分院自育品種‘龍盛喜悅，2個(gè)菌株接種后7d西瓜的發(fā)病率分別為77%和69%，致病力較強(qiáng)）。以下皆采用H-se-2為試驗(yàn)菌株。

2.2黑龍江省露地西瓜果斑病的防治藥劑篩選

2.21多種藥劑的平板抑菌試驗(yàn)由圖l可以看出，和對(duì)照相比，除了噻菌銅和喹啉銅，其他藥劑都對(duì)果腐病菌有一定的抑制作用，抑菌效果隨著藥劑濃度的加大而增強(qiáng)。平板抑菌試驗(yàn)篩選出7種抑菌圈直徑>20mm的有效藥劑及其濃度、劑型為：3%（濃度3）雙氧水（抑菌直徑26.7mm）、2000mg，L^-1（濃度3）硫酸鏈霉素粉劑（抑菌直徑26.0mm）、2000mg·L^-1（濃度3）噻霉酮（抑菌直徑25.7mm）、0.4%（濃度2）福爾馬林（抑菌直徑25.0m）、2000mg·L^-1（濃度3）氫氧化銅水分散顆粒（抑菌直徑24.0mm）、2000mg·L^-1（濃度3）春雷霉素粉劑（抑菌直徑23.3mm）、2000mg·L^-1（濃度3）新植霉素可濕性粉劑（抑菌直徑22.0mm）。

同一種藥劑我們應(yīng)用了不同的劑型，從上述試驗(yàn)可以看出，硫酸鏈霉素和春雷霉素粉劑的抑菌效果比注射劑和水劑好。上述7種藥劑及其濃度將被應(yīng)用于后續(xù)的種子處理試驗(yàn)。

將上述試驗(yàn)篩選出的各種藥劑最佳濃度的抑菌效果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)17種藥劑和清水對(duì)照相比，對(duì)果斑病菌的抑菌效果都達(dá)到極顯著差異。其中3%雙氧水、2000mg·L^-1硫酸鏈霉素粉劑、2000mg·L^-1噻霉酮、0.4%福爾馬林、2000 mg·L^-1氫氧化銅水分散顆粒、2000 mg·L^-1春雷霉素粉劑、2000mg·L^-1新植霉素可濕性粉劑這7種藥劑及其濃度與其他10種藥劑相比，抑菌效果差異達(dá)到極顯著水平，見圖2。

2.2.2種子處理藥劑篩選由表2可以看出，和對(duì)照相比，7種藥劑對(duì)果斑病菌都有明顯的抑制作用，并且抑菌作用隨著處理時(shí)間的增加而增強(qiáng)。

從圖3和圖4可以看出，除了新植霉素、氫氧化銅，其他5種藥劑在較高濃度、較長(zhǎng)時(shí)間下對(duì)種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)都沒有明顯的影響。和對(duì)照相比，7種藥劑對(duì)西瓜種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)都有不同程度的促進(jìn)作用，雙氧水、硫酸鏈霉素、噻霉酮、福爾馬林、春雷霉素5種藥劑處理西瓜種子的發(fā)芽率提高17.5%～27.6%，發(fā)芽勢(shì)提高9，7%～35.9%。7種藥劑中，2000 mg·L^-1噻霉酮處理種子30min、3%雙氧水處理種子30min，處理種子的表面和種仁的帶菌量都為一；處理種子的發(fā)芽率分別為97.8%和95.6%，對(duì)照發(fā)芽率為75.2%，噻霉酮和雙氧水處理種子的發(fā)芽率分別比對(duì)照提高22.6%和20.4%；處理種子的發(fā)芽勢(shì)分別為14mm和12.7mm，對(duì)照發(fā)芽勢(shì)為9.5mm，噻霉酮和雙氧水處理種子的發(fā)芽勢(shì)分別比對(duì)照提高47.4%和33.7%。可以認(rèn)為這兩種藥劑適用于被黑龍江省露地西瓜細(xì)菌性果斑病病原菌侵染的西瓜種子處理。

3.結(jié)論與討論

1）分離出黑龍江省露地西瓜果斑病病原菌4份，經(jīng)過致病性測(cè)定，2份對(duì)西瓜具有致病性，分別是H-hrb-1、H-sc-2。為了確保平板抑菌試驗(yàn)等后續(xù)試驗(yàn)的真實(shí)性和準(zhǔn)確性，必須對(duì)分離的病原菌進(jìn)行致病性測(cè)定。

2）平板抑菌試驗(yàn)及種子處理試驗(yàn)的結(jié)果表明：雙氧水等7種藥劑都對(duì)雙城地區(qū)采集、分離的果斑病病原菌有較好的抑制作用（抑菌圈>20mm）。趙廷昌等研究表明1 000倍的72%農(nóng)用鏈霉素和0.4%的福爾馬林對(duì)果斑病的抑菌效果較好；牛慶偉等研究表明0.4%的福爾馬林浸種lh對(duì)西瓜果斑病幼苗的果斑病防效達(dá)到100%，且無不良影響；何毅等研究表明2%春雷霉素400倍或以2%春雷霉素400倍搭配其他殺菌劑使用防治西瓜嫁接苗果斑病效果好。本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果大體相似，但需要進(jìn)一步在幼苗期果斑病的發(fā)病率上驗(yàn)證。此外，篩選出了新型藥劑噻霉酮，噻霉酮不但抑菌效果較好，還對(duì)種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)有促進(jìn)作用，與對(duì)照藥劑相比較發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)分別提高了22.6%和47.4%。

3）帶菌種子經(jīng)過藥劑處理后，播種長(zhǎng)出幼苗的發(fā)病情況如何還有待進(jìn)一步研究，噻霉酮對(duì)西瓜幼苗果斑病及成株期果斑病的防治效果還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。