日糧中添加綠茶粉對(duì)白羽肉雞腸道菌群的影響

張嬌蕊，周裔彬，耿照玉

（安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥230036）

動(dòng)物腸道共生著數(shù)量龐大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜而穩(wěn)定的菌群，腸道正常菌群和腸黏膜結(jié)合形成的機(jī)械屏障、免疫屏障與生物屏障不僅發(fā)揮著保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用，而且能有效防止致病物質(zhì)的入侵［1］。腸道有益菌的增加可以增強(qiáng)抵抗動(dòng)物對(duì)外界病原菌的感染。如乳酸桿菌和雙歧桿菌都可以增加腸表面防御能力，減少致病菌在腸道的定植［1］。增加腸道有益菌、減少致病菌能保持腸道微生態(tài)平衡，并使之更加穩(wěn)固。

綠茶的主要成分包括茶多酚、咖啡堿、芳香油、氨基酸以及多種維生素等。而茶多酚具有抗氧化、殺菌解毒、提高免疫力等作用［2］。Butt等［3］研究綠茶可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和凋亡降低癌癥發(fā)病率，F(xiàn)rancisco Gonzalez Gil［4］研究日糧中添加巴拉圭茶可抑制雞腸道沙門氏菌生長。然而目前綠茶在雞腸道方面的研究尚不廣泛，因此我們?cè)诖朔较蜻M(jìn)行研究及探討。

本研究在肉雞日糧中添加不同濃度的綠茶粉，檢測雞腸道中主要微生物菌群及其濃度，分析比較回腸、盲腸內(nèi)容物中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌的變化，探討綠茶粉對(duì)雞腸道微生物菌群的影響，為綠茶粉作為添加劑改善雞腸道菌群平衡提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)

試驗(yàn)用1日齡白羽肉雞495只，隨機(jī)分為5組，每組分三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)33只，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧、組I為基礎(chǔ)日糧＋1%綠茶粉、組Ⅱ?yàn)榛A(chǔ)日糧＋2%綠茶粉、組Ⅲ基礎(chǔ)日糧＋4%綠茶粉、組Ⅳ為基礎(chǔ)日糧＋6%綠茶粉，試驗(yàn)周期42d。綠茶粉由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院提供。綠茶粉按照每組比例與基礎(chǔ)日糧混勻后制粒，基礎(chǔ)日糧為玉米－豆粕型，配方及營養(yǎng)水平見表1。飼養(yǎng)試驗(yàn)在安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院對(duì)面家禽試驗(yàn)基地雞舍進(jìn)行。

表1 白羽肉雞各日齡日糧組成Table 1 Diet of broilers each period

1.2 腸內(nèi)容物細(xì)菌檢測

試驗(yàn)第42天，每重復(fù)隨機(jī)取肉雞2只屠宰，回腸和盲腸末端結(jié)扎。無菌條件下稱取0.5g內(nèi)容物，加入5mL無菌生理鹽水充分混勻溶解稀釋，稀釋倍數(shù)為101、102、103、104和105，乳酸桿菌和雙歧桿菌在厭氧條件下培養(yǎng)（YQX－Ⅱ厭氧培養(yǎng)箱，上海恒科有限公司生產(chǎn)），大腸桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌和腸球菌為需氧培養(yǎng)（LHR－150生化培養(yǎng)箱，上海恒科有限公司生產(chǎn)）。根據(jù)各菌種在腸道內(nèi)濃度差異，選擇合適的稀釋度接種三個(gè)不同梯度人工培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)及計(jì)數(shù)參考張玲等［5］文獻(xiàn)。革蘭氏染色及鏡檢鑒定，計(jì)算每克內(nèi)容物細(xì)菌數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

組間腸內(nèi)容物細(xì)菌總數(shù)用lgN表示，數(shù)據(jù)使用spss 19.0軟件單因素方差分析，試驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示。

2 結(jié)果分析

檢測結(jié)果表明，白羽肉雞回腸和盲腸中雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量與飼料中綠茶粉添加量呈正相關(guān)，且顯著高于對(duì)照組（p＜0.05）?；啬c和盲腸中金黃色葡萄球菌數(shù)量與飼料中綠茶粉添加量呈負(fù)相關(guān)，且添加綠茶粉各組顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）。組I、組Ⅱ和組Ⅲ白羽雞回腸大腸桿菌數(shù)量顯著低于對(duì)照組（p＜0.05），盲腸中大腸桿菌數(shù)量僅在組Ⅱ和組Ⅲ中顯著低于對(duì)照組（p＜0.05），而組Ⅳ與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）；回腸和盲腸中沙門氏菌數(shù)量僅在組Ⅳ中顯著低于對(duì)照組（p＜0.05）；回腸和盲腸中腸球菌數(shù)量各組間差異均不顯著（表2、表3）。

表2 回腸中各菌種濃度比較／lgCFU·g－1Table 2 The ileum of each bacteria concentration comparison／lgCFU ·g－1

表3 盲腸中各菌種濃度比較／lgCFU·g－1Table 3 The cecum of each bacteria concentration comparison／lgCFU ·g－1

3 討論與結(jié)論

綠茶含上百種化學(xué)成分，其主效成分為多酚類和黃酮類化合物［6］，其類黃酮茶多酚（EGCG）是茶多酚中含量最多的單體物質(zhì)，姜濤［7］等研究EGCG具有抑制恥垢分枝桿菌生長的功能，并可激活腸道有益菌。證明多酚和黃酮類化合物具有調(diào)節(jié)腸道菌群的功效。這些化學(xué)成分對(duì)雞腸道菌類發(fā)揮不同作用。

隨著綠茶粉添加量的增加，雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量不斷上升，屠幼英［8］等人研究綠茶對(duì)乳酸桿菌和雙歧桿菌的促生長試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，綠茶和綠茶酵母發(fā)酵液對(duì)這兩種菌都顯示了激活作用。本試驗(yàn)中綠茶粉添加量與雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量也呈正相關(guān)。然而綠茶粉促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌生長機(jī)制尚不清楚，需要進(jìn)一步研究。

徐靈龍等［9］人研究乳酸桿菌生長過程中產(chǎn)生有機(jī)酸、H2O2、細(xì)菌素、以及類細(xì)菌素等抑菌物質(zhì)使大腸桿菌形態(tài)受到破壞甚至殺死作用。Lorca等［10］研究，腸道的乳酸桿菌能夠與致病菌競爭腸道受體及潛在結(jié)合位點(diǎn)，并且搶奪腸道內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)致病菌群的生長繁殖起到了限制和消滅的作用［11］。而且乳酸桿菌和雙歧桿菌還能明顯激活巨噬細(xì)胞的吞噬作用，可形成天然自動(dòng)免疫，致使致病菌減少［12］。這些大量研究不難解釋本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有益菌增值而有害菌減少的現(xiàn)象。

華德興等［13］人研究綠茶中的多酚類物質(zhì)可以有效的抑制金黃色葡萄球菌的增長，除此之外多酚類物質(zhì)和β－內(nèi)酰胺類抗生素和四環(huán)素合用時(shí)對(duì)抗葡萄球菌有增效作用。本試驗(yàn)結(jié)果亦表明，綠茶粉添加可抑制金黃色葡萄球菌的生長。隨著綠茶粉添加量的增加，大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量顯著降低，和許靖逸等［14］、王韻陽等［15］研究體外抑菌結(jié)果相吻合。Ikigai等［16］研究證實(shí)，綠茶提取物的主要成分EGCG可與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)膜蛋白特異性結(jié)合，影響細(xì)胞壁肽聚糖的代謝，破壞細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層，從而抑制細(xì)菌生長。這些研究表明綠茶中的有效成分能抑制有害菌增值，飼料中添加一定比例的綠茶可降低雞腸道常見有害菌的發(fā)病率。然而隨著綠茶粉濃度的增加，大腸桿菌的數(shù)量先減少后增加的現(xiàn)象可能與飼料中綠茶粉添加過多而引起飼料中能量比減少有關(guān)。

目前飼料中抗生素、激素類等藥物添加是養(yǎng)殖業(yè)的共性問題，探索及取代這類藥物增強(qiáng)動(dòng)物生產(chǎn)性能及健康刻不容緩。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，綠茶粉可促進(jìn)有益菌生長和抑制有害菌增值，增強(qiáng)雞腸道內(nèi)菌群平衡。因此，探索綠茶粉在飼料中的應(yīng)用是解決這類問題的方向之一。

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