★ 侯芳潔 李英宋軍娜鄭玉光*(.河北中醫(yī)學院 石家莊05000;.河北醫(yī)科大學 石家莊05007)
柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根,按性狀不同,分別習稱“北柴胡”及“南柴胡”,具有解表和里、疏肝解郁、升舉陽氣之功效[1]。迄今已從柴胡中分離鑒定出約60種皂苷類化合物、上百種揮發(fā)油類化合物及多糖類成分[2]。其中,柴胡皂苷是柴胡主要有效成分之一,是柴胡重要的質量評價指標,具有廣泛的生物學活性,尤其以柴胡皂苷d的藥理活性最強[3]。
在第四次全國中藥資源普查過程中,發(fā)現(xiàn)河北省涉縣地區(qū)柴胡分布范圍很廣,但是采收時間不統(tǒng)一,導致藥材質量參差不齊。影響中藥藥效的因素有很多,諸如種質、土壤、水質、采收時間、產地加工、炮制等,其中采收時間對中藥材次生代謝產物的累積有重要影響。不同季節(jié)、不同時辰、不同生長年限等都會影響中藥質量。柴胡一般春秋兩季采挖,由于我國南北、東西氣候的巨大反差,藥材適宜采收期的制定應該因地制宜。因此加強中藥材采收期研究,對規(guī)范藥材科學合理采收加工、保證中藥療效具有重要意義。為此,筆者對不同采收時間的柴胡樣品進行了收集,通過其主要有效成分柴胡皂苷進行動態(tài)分析,為明確河北省涉縣地區(qū)柴胡的最佳采收期提供依據(jù),對保證藥材質量和臨床療效具有重要的意義。
1.1 藥材 21個柴胡樣品2013年采自河北省涉縣,經河北中醫(yī)學院鄭玉光教授鑒定為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.的干燥根,見表1。
表1 柴胡樣品
1.2儀器 島津LC-15C高效液相色譜儀(日本島津制作所);SPD-15C紫外檢測器(日本島津制作所);CP225D型雙量程電子天平(德國賽多利斯公司)。
1.3 試劑 柴胡皂苷a(批號110777-201108)和柴胡皂苷d(批號110778-201208)均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、甲醇(色譜純,F(xiàn)isher Scientific公司);氨水(石家莊市華迪化工工貿有限公司),水為自制超純水。
2.1 對照品溶液的制備 精密稱定柴胡皂苷a對照品7.98 mg、柴胡皂苷d對照品9.94 mg,分別置10 mL容量瓶中,甲醇超聲溶解,定容,得柴胡皂苷a,柴胡皂苷d的甲醇溶液。再分別精密量取配制好的柴胡皂苷a、d各5 mL,同置于10 mL容量瓶中,甲醇定容,得柴胡皂苷a(0.399 mg/mL)、柴胡皂苷d(0.497 mg/mL)的混合標準溶液,即為對照品溶液。
2.2 供試品溶液的制備 精密稱定柴胡粉末約0.5 g,至具塞錐形瓶中,加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25 mL,密塞,30℃超聲處理(功率200W,40Hz)30 min,濾過,用甲醇20 mL分2次洗滌容器和藥渣,洗液與濾液合并,回收至干。殘渣加甲醇溶解轉移至5 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,臨用前過0.22μm微孔濾膜,即得。
2.3 色譜條件 按2010版《藥典》柴胡項下柴胡皂苷含量測定的方法:色譜柱為Sinochrom ODS-APC18柱(4.6 mm×200 mm,5μm);乙腈-水為流動相進行梯度洗脫,流速1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測波長為210 nm,進樣量20μL,理論板數(shù)按柴胡皂苷a峰計算應
不低于10000,見圖1。
圖1 高效液相色譜圖
2.4 標準曲線 精密稱取柴胡皂苷a對照品3.45 mg,柴胡皂苷d對照品4.06 mg,置10 mL容量瓶中,加甲醇適量超聲溶解并定容至刻度,搖勻。分別精密吸取上述溶液5,10,20,30,40,50μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以進樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標繪制標準曲線并計算回歸方程。
2.5 含量測定 取收集的21份不同產地和采收期的柴胡藥材粉末各0.5 g,按2.2項下方法制備供試品溶液,吸取供試品溶液20μL,注入液相色譜儀,以標準曲線法計算柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。
3.1 標準曲線 以進樣量X(μg)為橫坐標,峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線,計算回歸方程,得到柴胡皂苷a的回歸方程為Y=309603.3X+2242.9(r=0.9999),柴胡皂d的回歸方程為Y=369868.3X+7970.86(r=0.9999),實驗表明柴胡皂苷a在1.725~17.25μg呈良好的線性關系,柴胡皂苷d在2.03~20.3μg呈良好的線性關系。
3.2 含量測定 21份不同產地和采收期的柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量測定結果見圖2-圖4。
圖2 不同采收期石峰同生柴胡中柴胡皂苷a、d及二者總含量
圖3 不同采收期山神廟柴胡中柴胡皂苷a、d及二者總含量
圖4 不同采收期石峰永會柴胡中柴胡皂苷a、d及二者總含量
4.1 涉縣地處太行山東麓,河北省西南角,山西、河北、河南三省交界處,年降水量590mm,屬半濕潤大陸性季風易旱氣候[4]。從柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量測定結果上可以看出,不同產地與采收時間柴胡的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量有明顯的差別。
4.2 不同產地的柴胡為同一品種,且皆為一年生柴胡,石峰同生地區(qū)柴胡的柴胡皂苷a,d含量明顯高于其他兩個產地,因為石峰同生地區(qū)屬于石灰?guī)r土地,含鈣量比較高,對植株生長和有效成分的積累比較有利。
4.3 在同一產地中,不同采收時間的柴胡樣品含量差異也較大,在石峰同生地區(qū)柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以6月份較高,10月份較低;在山神廟地區(qū)柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以8月份最高,10月份最低;在石峰永會柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以8月份最高,11月份最低。綜上所述,河北涉縣地區(qū)的柴胡在6、8月份有效成分含量比較高,質量較好,可以作為河北涉縣地區(qū)柴胡最佳采收期確定的重要依據(jù),但是由于不同地區(qū)的最佳采收時間可能與當?shù)貧夂?、種植環(huán)境有關,還要從多方面考慮。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:263.
[2]謝東浩,蔡寶昌,安益強,等.柴胡皂苷類化學成分及藥理作用研究進展[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2007,23(1):63-65.
[3]呂曉慧,孫宗喜,蘇瑞強,等.柴胡及其活性成分藥理研究進展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2012,19(12):105-107.
[4]牛永良,張虹,王仁如,等.對涉縣石灰?guī)r山地農業(yè)結構調整的思考[J].現(xiàn)代農業(yè)科技,2013,12(4):299-301.