藿香正氣雙相膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 張小紅 錢(qián)星文 楊世林 (1.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校 廣州51066;.東方藥林藥業(yè)有限公司 廣州51066;.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心 南昌0006)

藿香正氣雙相膠囊是由部頒標(biāo)準(zhǔn)第十一冊(cè)中的藿香正氣膠囊改進(jìn)而來(lái)，由廣藿香、紫蘇葉、半夏、厚樸(姜制)等組成。本方具有散風(fēng)寒、暢氣機(jī)、和脾胃之功效，臨床用于胃腸型感冒，急性胃腸炎、中暑、嘔吐、急慢性腎炎、霍亂吐瀉，水土不服，小兒食傷等。本工藝將富含揮發(fā)油成分的廣藿香、紫蘇葉等藥材，提取揮發(fā)油制成軟膠囊，其他提取部分制成微丸，同裝于硬膠囊中。因制劑中含有液態(tài)和固態(tài)二部分，所以制劑名稱定為藿香正氣雙相膠囊。它可以有效地保存處方中的揮發(fā)性成分，使制劑穩(wěn)定、安全、有效。本文對(duì)藿香正氣雙相膠囊進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，為保證藿香正氣雙相膠囊的質(zhì)量進(jìn)行控制，保障藥品的安全穩(wěn)定。

1 材料

METTLERAE 2400電子天平(瑞士);超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司);GMAG型薄層掃描儀(導(dǎo)津);Agilent 1100高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫)。

藿香正氣雙相膠囊及陰性對(duì)照膠囊(批號(hào):20040301、20040302、20040303，江西本草天工科技有限責(zé)任公司);廣藿香油對(duì)照品(鑒別用，批號(hào):0832-9902)、紫蘇對(duì)照藥材(批號(hào):120914-200307)、和厚樸酚對(duì)照品(含測(cè)用，批號(hào):0730-9204)、厚樸酚對(duì)照品(含測(cè)用，批號(hào):110729-200309)，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;硅膠G板、GF254板(層析用，青島海洋化工廠);乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 廣藿香 取本品軟膠囊25粒，置250mL圓底燒瓶中，加水50mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水至刻度，再加石油醚(60℃～90℃)0.5mL，連接回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸45min，放冷，分取石油醚層，定容至0.5mL，作為供試品溶液。取缺廣藿香藥材處方制備的陰性樣品25粒，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。取廣藿香油對(duì)照品適量，加石油醚(60℃～90℃)溶解制成每1mL含20μL的對(duì)照品溶液。

吸取上述制備的供試品溶液、陰性溶液及對(duì)照品溶液各3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸(98∶5∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，而后取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果在薄層色譜圖中，供試品在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，具有相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性無(wú)干擾。

2.1.2 紫蘇葉 取本品中軟膠囊50粒，置250mL圓底燒瓶中，加水50mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水至刻度，再加石油醚(60℃～90℃)0.5 mL，連接回流冷凝管，加熱至沸，并保持微沸45min，放冷，分取石油醚層，定容至0.5mL，作為供試品溶液。取缺紫蘇葉處方制備的陰性對(duì)照樣品25粒，按上述樣品制備方法制備陰性對(duì)照溶液。另取紫蘇葉對(duì)照藥材0.7g，按紫蘇葉供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，得紫蘇葉對(duì)照藥材溶液。

吸取上述供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和紫蘇油對(duì)照藥材溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯(19∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，展距15cm，噴以2，4-二硝基苯肼試液。結(jié)果顯示在供試品溶液色譜帶上，在與對(duì)照藥材圖譜相應(yīng)位置上，具有相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性無(wú)顯示。

2.2 厚樸酚與和厚樸酚的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 高效液相色譜儀(Agilent 1100型，DAD檢測(cè)器)，色譜柱為Hypersil ODS-C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇:水(65:35);流速:1.0mL/min;柱溫:25℃;檢測(cè)波長(zhǎng):294nm。

2.2.2 供試品溶液的制備 取25粒藿香正氣雙相膠囊，取內(nèi)容物微丸適量，研細(xì)，精密稱定1.0g，倒入錐形瓶中，精密吸取50mL甲醇加入，稱定重量，超聲處理30min，冷卻，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品適量，置于容量瓶中，加甲醇制成每1mL含厚樸酚0.208mg、和厚樸酚0.112mg的對(duì)照品溶液，搖勻，即得。

2.2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取缺厚樸藥材的處方，按照制備工藝制備陰性成品，按供試品溶液的制備方法制得陰性對(duì)照溶液。按HPLC方法中確定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照未見(jiàn)干擾。供試品色譜與對(duì)照品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間位置上，有相應(yīng)的色譜峰，表明厚樸酚、和厚樸酚的峰與其它峰能較好的分離，見(jiàn)圖1-3。

圖1 對(duì)照品溶液

圖2 樣品溶液

圖3 陰性溶液

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取上述制備的厚樸酚與和厚樸酚混合對(duì)照品溶液1，2，3，4，5，6，7μL進(jìn)行進(jìn)樣，厚樸酚與和厚樸酚的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果厚樸酚對(duì)照品在0.208～1.456μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y=1 619.2X+1.94(r=0.999 8);和厚樸酚對(duì)照品在0.112～0.784μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y=1 555.3X+9.16(r=0.999 9)。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的藿香正氣雙相膠囊(批號(hào):20040301)微丸適量，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，共六份，按供試品溶液的制備方法進(jìn)行操作，并按色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，經(jīng)計(jì)算厚樸酚與和厚樸酚峰面積的RSD分別為0.63%和1.51%，結(jié)果表明本方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液，按色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣5μL，經(jīng)計(jì)算厚樸酚與和厚樸酚的峰面積RSD分別為0.58%和0.85%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0、3、6、9、12、15、18h時(shí)取樣，每次進(jìn)樣10μL，按液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果厚樸酚與和厚樸酚的峰面積RSD分別為0.89%和1.28%，表明兩者在18h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 厚樸酚加樣回收試驗(yàn)

表2 和厚樸酚加樣回收試驗(yàn)

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取中試樣品(批號(hào)20040301)內(nèi)容物中的微丸適量，研細(xì)，精密稱定，共稱取6份，分別置50mL的容量瓶中，加入一定量的厚樸酚與和厚樸酚對(duì)照品，其它按照供試品溶液的制備項(xiàng)下進(jìn)行操作，制備加樣回收樣品溶液，進(jìn)樣，每次10μL，結(jié)果厚樸酚、和厚樸酚的平均回收率分別為99.76%，100.06%，RSD分別為0.73%，2.1%，表明該方法較為穩(wěn)定可靠，見(jiàn)表1～2。

2.2.10 樣品測(cè)定 取藿香正氣雙相膠囊中試產(chǎn)品三批，按“供試品溶液的制備”方法制備樣品，按色譜條件下的方法測(cè)定樣品中厚樸酚與和厚樸酚的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品中厚樸酚、和厚樸酚含量測(cè)定結(jié)果(n=3)mg/粒

3 討論

3.1 本文對(duì)廣藿香油薄層條件進(jìn)行了研究 條件

①硅膠G薄層板，展開(kāi)劑:石油醚(30℃～60℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(98∶5∶0.2)，顯色劑:5%三氯化鐵乙醇溶液;條件②硅膠G薄層板，展開(kāi)劑:石油醚(60℃～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(85∶15∶2)，顯色劑:5%香草醛硫酸溶液。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)①能較好地分離廣藿香油，且陰性無(wú)干擾。條件②分離效果不好，斑點(diǎn)發(fā)散。所以選擇條件①為光藿香的薄層鑒別條件。

3.2 本文對(duì)紫蘇油薄層條件進(jìn)行了研究 條件①以對(duì)照藥材為參照，薄層板:硅膠G，展開(kāi)劑:石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯(19∶1)，顯色劑:2，4-二硝基苯肼試液。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)此條件所得到的薄層圖斑點(diǎn)發(fā)散，且陰性略有干擾。

條件②以對(duì)照品為參照，薄層板:硅膠G，展開(kāi)劑:石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯(19∶1)，顯色劑:2，4-二硝基苯肼試液。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)此條件所得到的薄層圖斑點(diǎn)清晰，且陰性無(wú)干擾。

3.3 液相條件 本文確定的HPLC方法同時(shí)測(cè)定藿香正氣雙相膠囊中厚樸酚與和厚樸酚的含量，該方法方便快捷、靈敏準(zhǔn)確、重復(fù)性好，能有效的控制藿香正氣雙相膠囊的質(zhì)量。