消痤凝膠中丹酚酸B離體大鼠透皮率測定

馬永功，楊全偉，肖 柳

1.長治市潞安礦業(yè)集團總醫(yī)院（山西長治046204）

2.武漢市第一醫(yī)院（湖北武漢430022）

3.武漢市中醫(yī)醫(yī)院（湖北武漢430014）

消痤凝膠中丹酚酸B離體大鼠透皮率測定

馬永功1，楊全偉2?，肖 柳3

1.長治市潞安礦業(yè)集團總醫(yī)院（山西長治046204）

2.武漢市第一醫(yī)院（湖北武漢430022）

3.武漢市中醫(yī)醫(yī)院（湖北武漢430014）

目的測定消痤凝膠中丹酚酸B離體大鼠透皮率。方法 以改良的Franz擴散池，以離體的大鼠皮膚為屏障，以HPLC測定消痤凝膠中不同時間丹酚酸B的透皮累計量。結果通過HPLC測得消痤凝膠中丹酚酸B 24 h的離體透皮率為29.89%。結論消痤凝膠具有良好的透皮性能。

凝膠；丹酚酸B；離體透皮率

近年來，由于生活節(jié)奏加快，工作壓力大等原因，女性青春期后痤瘡發(fā)病率逐漸升高，且病程長、皮疹反復，給患者身心健康帶來嚴重影響。西醫(yī)認為主要與雄激素、皮脂分泌增多、毛囊口上皮過度角化、隱球病菌、痤瘡丙酸桿菌及遺傳因素等有關［1－2］。治療多為口服或外用抗生素、維A酸等藥物治療，中醫(yī)傳統(tǒng)治療一般多從肺，脾，胃的濕熱痰瘀論治。無論中醫(yī)還是西醫(yī)對患者心理、情緒變化、飲食、睡眠等會影響?zhàn)畀彴l(fā)病病理生理過程因素的干預指導不足，導致臨床不盡人意，故而成為痤瘡治療的一個新難點［3］。隨著醫(yī)學模式向生物－心理－社會綜合醫(yī)學模式的轉變，心理因素致病越來越受到重視，有研究表明，青春期痤瘡患者焦慮和抑郁程度與發(fā)病率均高于正常健康人，采用中藥疏肝療法治療女性青春期后痤瘡有明顯的療效［4］。

消痤凝膠為純中藥外用制劑，該方由丹參、當歸、黃芩等八味中藥組成。主要功效為疏肝理氣，涼血活血。為了測定消痤凝膠的透皮率，本試驗以處方中主藥丹參中有效成分丹酚酸B的含量為考察指標，來研究消痤凝膠的透皮性能。

1 材料

France擴散池（天津藥典標準儀器廠）；Wa?tere2695高效液相色譜儀（美國）；電熱恒溫水浴鍋（北京醫(yī)療設備廠）；旋轉攪拌器（江蘇省江陰科研器械廠）。丹酚酸B對照品（批號：110715－201016，購于中國食品藥品檢定研究院）；甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；其余試劑均為分析純，水為雙蒸水；SPF級雄性大鼠，購于湖北省實驗動物中心，實驗動物合格證號：No.42000600002570。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱：HypersilBDSC18（200mm× 4.6mm，5μm），流動相：乙腈－甲醇－水－甲酸（7∶25∶67∶1），流速：1.0mL·min－1，波長：286 nm，柱溫：30℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取丹酚酸B13.94mg，置于50mL容量瓶中，加75%甲醇，制成每1mL含0.2788mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取消痤凝膠1.0 g，精密稱定，加50%甲醇50mL，稱重，超聲溶解40min，放冷，再次稱重，用50%甲醇補足重量，過濾，取續(xù)濾液，得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取缺丹參藥材的消痤凝膠0.5 g，精密稱定，按供試品溶液制法制備，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性 分別吸取丹酚酸B對照品溶液、供試品溶液，丹參空白溶液各20μL按上述色譜條件進樣檢測，可見丹酚酸B對照品、供試品在18min左右出現(xiàn)丹酚酸B特征吸收峰，丹參空白對照無干擾，結果見圖A－C。

圖A 丹酚酸B對照品1

圖B 供試品

圖C 陰性

2.3.2 線性關系 精密吸取上述對照品溶液，分別在上述色譜條件下精密取2、3、4、5、10mL、母液分別至20mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，分別進樣20μL，測定峰面積，以峰面積、對照品濃度計算線性回歸方程：Y＝1424X－14953，r＝0.9996；表明丹酚酸B在24.84～290.48μg／mL范圍內線性關系良好。

2.3.3 精密度 取同一標準品溶液。連續(xù)進樣6次，每次20μL。6次測定結果表明丹酚酸B峰面積RSD為1.03%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性 精密吸取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12，24h測定丹酚酸B峰面積。其RSD為1.27%，表明樣品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.3.5 重復性 取消痤凝膠，精密稱取6份，按照

2.2.2項下的方法制備和測定丹酚酸B的含量，計算RSD為1.58%，表明該方法重復性良好。

2.3.6 回收率實驗 精密稱取已知含量的同一批樣品6份，分別加入適量的丹酚酸B對照品，按照供試品2.2.2項下的方法制備，測得平均回收率為100.58%（RSD＝1.94%），表明該方法穩(wěn)定可行。

2.4 離體大鼠透皮率測定

2.4.1 離體大鼠透皮試驗 取SPF大鼠，脫頸椎處死，用剪刀剪去鼠毛，取8%脫毛劑脫毛，剝離整個皮膚，洗凈（備用）。取消痤凝膠，精密稱定為1.005 g，作為透皮試驗中凝膠樣品，采用改良的Franz擴散池，將制備好的鼠皮固定于接受池上，將上述稱重的消痤凝膠緊貼于皮膚外層，接受池內加滿生理鹽水，透皮試驗裝置于（37±1）℃水浴保溫，同時開啟磁力攪拌棒以200 r／min的速度攪拌，以皮膚進入接收液時開始計時，分別于3，6，9，12，24 h取出接受池中全部接受液，同時立即補加相同體積預溫至（37±1）℃的新鮮生理鹽水［5－7］。

2.4.2 透皮率供試品溶液的制備 將5次接受液分別水浴濃縮至干，殘渣加50%甲醇溶液定溶于1 mL量瓶中，過微孔濾膜即得3，6，9，12，24 h的離體透皮吸收供試品。

2.4.3 離體透皮吸收液含量測定 將上述制得的不同時間所得供試品分別注入高效液相色譜儀，各進樣20μL檢測，計算溶液中丹酚酸B含量，結果見表2。

表2 消痤凝膠中丹酚酸B的離體透皮率結果

3 討論

本組結果表明，隨著時間延長，消痤凝膠中丹酚酸B的透皮吸收率逐漸增加，但單位時間內透皮量逐漸降低，在未加入透皮促進劑的情況下，丹酚酸B 24 h離體透皮率達29.89%，說明該凝膠劑具有良好的透皮率。

影響透皮吸收的因素很多［8－9］，如藥物成分性質、基質性質、藥物濃度、給藥面積，不同年齡的動物的皮膚、不同動物的皮膚以及皮膚角質層貯庫作用的影響，都對藥物的透皮吸收有一定的影響。本實驗未考慮到這些方面的影響，因此，今后這方面的因素值得進一步探究。

通過采用中藥疏肝消痤方制備的凝膠劑貼敷于病灶部位，有效成分釋放于皮膚角質層從而透過皮膚進入體內，通過中藥有效成分來調節(jié)人體的神經(jīng)、內分泌和免疫系統(tǒng)等多個靶點來改善患者焦慮、抑郁狀態(tài)，從而發(fā)揮抗雄性激素活性，抗毛囊皮脂腺導管角化，抗痤瘡棒狀桿菌等作用，為青春期后痤瘡治療和心理干預提供了一個安全有效的方法。目前通過自制消痤凝膠聯(lián)合異維A膠囊治療肝郁型痤瘡，縮短起效時間，提高治愈率，無不良反應發(fā)生，值得臨床推廣使用。

［1］ 易娟娟，劉俊，唐妍，等.痤瘡患者血清IL－10水平的檢測及其意義［J］.皮膚性病診療學雜志，2015，22（4）：296－298.

［2］ 余美英，王紅莉，李虹，等.皮膚隱球菌病1例［J］.湖北民族學院學報：醫(yī)學版，2011，28（1）：59.

［3］ 馮小蘭，曾憲玉.從“郁乃痤”辯治痤瘡［J］.新中醫(yī)，2014，46（12）：240－241.

［4］ 方玉甫，王麗，徐俊濤，等.疏肝消痤方治療女性青春期后痤瘡療效及對心理指標的影響［J］.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2015，21（9）：1131－1135.

［5］ 吳和珍，付沖，楊艷芳，等.天杏咳喘貼中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的大鼠離體透皮試驗［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（18）：58－60.

［6］ 肖柳，楊全偉.祛風活絡膏貼中川續(xù)斷皂苷Ⅵ離體小鼠透皮率測定研究［J］.湖北中醫(yī)雜志，2013，35（6）：25－26.

［7］ 韓建偉，張莉.復方元胡止痛膏貼中延胡索乙素離體小鼠透皮率初步測定［J］.中國藥師，2010，13（1）：35－37.［8］ 梁秉文.中藥經(jīng)皮給藥制劑技術［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2006：36－38.

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A Study on Xiao Cuo gel of Dan Phenolic Acid B in Vitro Transdermal Rate Determ ination

MA Yonggong1，YANG Quanwei2?，XIAO Liu3
（1．General Hospital of Lu′an Mining Group，Changzhi046204，China；2．Wuhan No．1 Hospita，Wuhan 430022，China；3．Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430014，China）

ObjectiveTo determ ine the Xiaocuo gel of salvianolic acid B in vitro rat skin perm e?ation rate．MethodsM odified Franz w as used as diffusion cell and in vitro rat skin as barrier，and HPLC to determ ine antiacne gelat different tim e of salvianolic acid B transderm al cum ulant．Re?sultsThe HPLCm easured salvianolic acid B 24h in vitro skin penetration rate of 29．89%in Xiaoc?uo gel．ConclusionTransderm al Xiaocuo gel has good perform ance．

Gel；Dan phenolic acid B；transderm al rate in vitro

R944.9

A

1008－8164（2015）04－0064－03

2015－08－12責任編輯：牟冬生

馬永功（1972－），男，山西長治人，藥劑師，研究方向：中藥開發(fā)；?

楊全偉（1986－），男，碩士，藥師，研究方向：醫(yī)院制劑開發(fā)。