• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    雌激素受體及芳香化酶在牙齦癌組織中的表達(dá)和意義

    2015-04-20 06:52:24王秋銳趙華平張英懷
    牙體牙髓牙周病學(xué)雜志 2015年5期
    關(guān)鍵詞:癌組芳香化弱陽性

    王秋銳,楊 健,趙華平,張英懷

    (1.北京市通州區(qū)新華醫(yī)院口腔科,北京101100;2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院口腔頜面外科,河北石家莊050000)

    雌激素受體及芳香化酶在牙齦癌組織中的表達(dá)和意義

    王秋銳1,楊 健1,趙華平2,張英懷2

    (1.北京市通州區(qū)新華醫(yī)院口腔科,北京101100;2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院口腔頜面外科,河北石家莊050000)

    目的:觀察牙齦癌中雌激素受體(ER)與芳香化酶的表達(dá)情況,探討局部雌激素及芳香化酶在牙齦癌中的作用與關(guān)系。方法:免疫組化過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素法測定雌激素受體及芳香化酶在牙齦癌中的表達(dá)。結(jié)果:牙齦癌組雌激素受體及芳香化酶的表達(dá)陽性率分別為50%和42.86%,正常對照組分別為13.33%和6.67%(P<0.05);牙齦癌中雌激素受體與芳香化酶之間未見明顯相關(guān)性。結(jié)論:牙齦癌有一定的雌激素依賴性;芳香化酶在牙齦癌組織中表達(dá)升高,但芳香化酶并不是影響局部雌激素受體升高的唯一因素。

    牙齦;鱗狀細(xì)胞癌;雌激素受體;芳香酶;免疫組織化學(xué)

    [Chinese Journal of Conservative Dentistry,2015,25(5):304]

    自從Vittek等[1]第一次提供了牙齦可能是雌激素靶組織的直接依據(jù)后,許多研究證明牙齦是性激素受體的靶器官,性激素代謝紊亂與牙齦的許多疾病有關(guān)[2-4]。芳香化酶能催化雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素,是雌激素局部生物合成中的限速酶,它在許多組織(如卵巢、脂肪、腎上腺等)中均有表達(dá)。芳香化酶的過度表達(dá),與異常的循環(huán)雌激素水平和(或)組織中局部升高的雌激素濃度有關(guān)。牙齦癌是常見的口腔癌之一,曾有研究認(rèn)為其具有一定程度的雌激素依賴性[5],而牙齦癌與芳香化酶的相關(guān)研究尚未見報道。本文對牙齦癌組織中ER及芳香化酶的表達(dá)進(jìn)行研究,并對它們的相互關(guān)系進(jìn)行探討,以期為牙齦癌的臨床治療提供新思路。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料、試劑和儀器

    小鼠抗人雌激素受體(ER,Zymed公司,美國);多克隆兔抗人胎盤芳香化酶抗體(R-11-4,使用濃度為1∶800;由美國Houptman-woodward醫(yī)學(xué)研究所提供);兔抗人芳香化酶抗血清aromatase、多抗原液、Hauptman-Woodward(美國醫(yī)學(xué)研究所);石蠟切片機(jī)(Leica RM2135,德國);QP-B2切片漂烘溫控儀(安徽省電子科學(xué)研究所);HZS-H水浴震蕩器(哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司);ZD-Ⅲb醫(yī)學(xué)實驗用微波爐(上海中達(dá)醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究所);PW/10-002臺式保溫培養(yǎng)箱(重慶實驗設(shè)備廠);PM-10ADS雙目顯微鏡(Olympus,日本)。

    1.2 樣本采集

    牙齦癌組28例(男15人,女13人),年齡28~74歲(平均59.7歲)。牙齦癌標(biāo)本均來自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院1998~2011年手術(shù)切除的存檔石蠟標(biāo)本,切片后進(jìn)行HE染色,由病理學(xué)專家根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)重新閱片確診。對照組正常牙齦15例(男7人,女8人),年齡17~64歲(平均45.9歲)。來自頜骨囊腫開窗術(shù)切取的牙齦組織,經(jīng)HE染色后閱片確診。以上所有患者均無激素治療史。

    1.3 方法

    每個蠟塊均切片3張,每片5μm,1張陰性對照,另2張分別作ER及芳香化酶染色。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,蒸餾水漂洗5 min;50 mL/L H2O2甲醇振洗25 min,PBS振洗5 min×3次;用0.01 mol/L枸櫞酸鹽修復(fù)液進(jìn)行微波抗原修復(fù),92~98℃修復(fù)10 min,PBS振洗5 min×3次;正常山羊血清封閉,37℃孵育30 min;棄去血清,滴加一抗,4℃過夜;PBS振洗5 min×3次,滴加生物素化二抗,37℃孵育25 min,PBS振洗5 min×3次;滴加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素,37℃孵育20 min,PBS振洗5 min×3次;DAB顯色,漂洗,蘇木素復(fù)染,脫水、透明、封片。

    1.4 結(jié)果判斷

    ER以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒,著色高于背景底色為陽性。染色分級標(biāo)準(zhǔn):①無陽性細(xì)胞為陰性(-);②陽性細(xì)胞數(shù)<25%為弱陽性(+);③陽性細(xì)胞數(shù)25%~50%為中度陽性(++);④陽性細(xì)胞數(shù)>50%為強(qiáng)陽性(+++)。

    芳香化酶陽性反應(yīng)物質(zhì)為棕黃色細(xì)顆粒狀,位于細(xì)胞漿中。分級標(biāo)準(zhǔn):①無陽性細(xì)胞為陰性(-);②陽性細(xì)胞數(shù)<5%為弱陽性(+);③陽性細(xì)胞數(shù)5%~25%為陽性(++);④陽性細(xì)胞數(shù)>25%為強(qiáng)陽性(+++)。

    ER與芳香化酶用已知陽性的乳腺癌標(biāo)本作陽性對照,以PBS替代一抗作為陰性對照。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

    采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,各組間陽性率的比較用χ2檢驗,兩指標(biāo)間的相關(guān)關(guān)系用列聯(lián)表的χ2檢驗,出現(xiàn)小值頻數(shù)時用Fisher精確概率法。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 ER在牙齦癌組和對照組中的表達(dá)

    牙齦癌組、對照組ER的陽性率分別為50%、13.33%,兩組相比有顯著性差異(P<0.05)。對照組中,15例正常牙齦組織中2例有ER表達(dá),均為中度陽性,余皆為陰性(表1)。ER陽性部位位于牙齦上皮細(xì)胞的胞核(圖1),主要在棘層細(xì)胞表達(dá),基底層細(xì)胞幾乎不表達(dá)。在28例牙齦癌中ER有14例為陽性,其中強(qiáng)陽性2例,中度陽性3例,弱陽性9例,余皆為陰性(表1)。其陽性部位主要在腫瘤上皮細(xì)胞的胞核內(nèi)(圖2)。

    表1 ER在牙齦癌組和對照組中的表達(dá)情況

    2.2 芳香化酶在牙齦癌組和對照組中的表達(dá)

    牙齦癌組和對照組芳香化酶的染色陽性率分別為42.86%、6.67%,兩組相比有顯著性差異(P<0.05)。對照組中,15例正常牙齦組織中芳香化酶僅有1例表達(dá),為弱陽性,余皆為陰性(表2)。芳香化酶陽性部位位于牙齦組織固有層中的少數(shù)炎癥細(xì)胞的胞漿(圖3)。在28例牙齦癌中芳香化酶有12例為陽性,其中強(qiáng)陽性3例,中度陽性5例,弱陽性4例,余皆為陰性(表2)。陽性部位主要在炎癥細(xì)胞(主要是漿細(xì)胞及中性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞幾乎不表達(dá))的胞漿(圖4),在癌細(xì)胞與固有層的成纖維細(xì)胞也有表達(dá)(圖5~6)。

    表2 芳香化酶在牙齦癌組和對照組中的表達(dá)情況

    2.3 牙齦癌中ER表達(dá)與病理學(xué)分級及患者性別的關(guān)系(表3~4)

    在分級不同(高、中、低分化)的牙齦鱗狀細(xì)胞癌中ER的表達(dá)情況未見明顯差異。在不同性別的牙齦癌病人中ER的表達(dá)情況未見明顯差異。

    表3 ER在不同分化的牙齦鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況

    表4 ER在不同性別的牙齦癌病人中的表達(dá)情況

    2.4 牙齦癌中ER與芳香化酶之間的關(guān)系

    牙齦癌中ER與芳香化酶的表達(dá)未見明顯的相關(guān)性(P>0.05)(表5)。

    表5 牙齦癌中ER與芳香化酶之間的關(guān)系

    圖1 正常牙齦組織中,ER陽性部位在牙齦上皮細(xì)胞的胞核(SP,×400)

    圖2 牙齦癌組織中,ER陽性部位主要在腫瘤上皮細(xì)胞的胞核內(nèi)(SP,×400)

    圖3 正常牙齦中,芳香化酶陽性部位在牙齦組織固有層中的少數(shù)炎癥細(xì)胞的胞漿(SP,×400)

    圖4 牙齦癌組織中,芳香化酶陽性部位主要在炎癥細(xì)胞的胞漿(a.SP,×200;b,SP×400)

    圖5 牙齦癌組織中,芳香化酶在癌細(xì)胞中的表達(dá)(SP,×400)

    圖6 牙齦癌組織中,芳香化酶在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)(SP,×400)

    3 討論

    若病變組織對雌激素有反應(yīng),則病變細(xì)胞應(yīng)表達(dá)ER。28例牙齦癌中,14例中有ER表達(dá),其陽性部位主要位于腫瘤上皮細(xì)胞胞核中,牙齦癌組與正常牙齦組 ER的陽性率有顯著性差異(P<0.05)??梢酝茰yER與牙齦癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),牙齦癌具有一定的雌激素依賴性。芳香化酶抑制劑能夠特異性地抑制芳香化酶的活性從而降低雌激素的水平,已成為治療多種雌激素依賴性疾病的新型藥物。國外有學(xué)者對16例未絕經(jīng)的子宮肌瘤患者進(jìn)行前瞻性的臨床研究表明,應(yīng)用芳香化酶抑制劑(來曲唑)后子宮肌瘤的體積明顯減?。?]。在乳腺癌的治療中,Balakrishnan等發(fā)現(xiàn),對雌激素受體陽性的老年乳腺癌患者,與其他治療方法相比,芳香化酶抑制劑的先期治療可能最有效[7]。Niikaw等在對非小細(xì)胞肺癌患者研究后發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中的雌激素濃度顯著高于來自同一患者的非腫瘤組織,且雌激素濃度與組織中芳香化酶的表達(dá)、ERα(雌激素受體α)和ERβ(雌激素受體β)的狀態(tài)、腫瘤的大小成正比,體外實驗還顯示在ERα和ERβ表達(dá)陽性的組織中應(yīng)用雌激素促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[8]。推測,采用芳香化酶抑制劑對ER陽性牙齦惡性腫瘤進(jìn)行內(nèi)分泌治療可望有效,但目前還缺乏大量的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)和臨床實驗研究。

    本研究表明芳香化酶在牙齦癌中的表達(dá)較正常牙齦組織明顯增加,芳香化酶主要在炎癥細(xì)胞(主要是漿細(xì)胞及中性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞幾乎不表達(dá))表達(dá),在癌細(xì)胞與固有層的成纖維細(xì)胞也偶有表達(dá)。提示芳香化酶與牙齦癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān),它可能通過在炎細(xì)胞與成纖維細(xì)胞中的旁分泌及癌細(xì)胞中的自分泌作用、刺激牙齦癌中局部微環(huán)境雌激素濃度升高,從而作用于牙齦癌的生長。但ER與芳香化酶之間未見明顯相關(guān)性(P>0.05),表明在牙齦癌中芳香化酶可能并不是局部ER升高的唯一因素。這與對乳腺癌的研究結(jié)果一致[9-10],在乳腺癌中其他的酶,如硫酸酯酶、磺基轉(zhuǎn)移酶、17β-羥類固醇脫氫酶(17β-h(huán)ydroxysteroid dehydrohenase,17β-HSD)也影響雌激素的合成。Utsunomiya H等[11]在對子宮內(nèi)膜增生及子宮內(nèi)膜癌的研究發(fā)現(xiàn),17β-HSD2能通過調(diào)節(jié)其組織中的雌二醇水平來調(diào)節(jié)雌激素的作用。他們認(rèn)為在子宮內(nèi)膜增生及子宮內(nèi)膜瘤中芳香化酶可能催化形成的雌激素多為雌酮,17β-HSD2可催化雌酮(一種較弱的雌激素)轉(zhuǎn)化為雌二醇,在子宮內(nèi)膜疾病的進(jìn)程中扮演重要角色。而牙齦癌是否與乳腺癌或子宮內(nèi)膜疾病類似,就需要研究芳香化酶和其他酶(硫酸酯酶、磺基轉(zhuǎn)移酶、17β-HSD)的作用及其與雌激素的關(guān)系,從而探明牙齦癌中局部合成的雌激素的生物學(xué)意義。

    [1]Vittek J,Hernandez MR,Wenk EJ,et al.Specific estrogen receptors in human gingiva[J].JClin Endocrinol Metab,1982, 54(3):608-612.

    [2] 屠嫩斐,李哲光,游士奇,等.性激素類避孕藥對牙周組織影響的實驗觀察[J].中華口腔醫(yī)學(xué)雜志,1995,30(6):349-351.

    [3]Becerik S,Oz?aka O,Nalbantsoy A,et al.Effects ofmenstrual cycle on periodontal health and gingival crevicular fluid markers[J].JPeriodontol,2010,81(5):673-681.

    [4]Asnani KP1,HingoraniD,Kheur S,etal.Expression of nuclear receptors of gingiva in polycystic ovarian syndrome:a preliminary case study[J].Aust Dent J,2014,59(2):252-257.

    [5] 李幼華,陳少茂.牙齦癌組織性激素受體免疫組化觀察[J].中華口腔醫(yī)學(xué)雜志,1998,3(3):174.

    [6]Gurates B,Parmaksiz C,Kilic G,et al.Treatment of symptomatic uterine leiomyoma with letrozole[J].Reprod Biomed Online,2008,17(4):569-574.

    [7]Balakrishnan A,Ravichandran D.Early operable breast cancer in elderly women treated with an aromatase inhibitor letrozole as sole therapy[J].Br JCancer,2011,105(12):1825-1829.

    [8]Niikawa H,Suzuki T,Miki Y,et al.Intratumoral estrogens and estrogen receptors in human non-small cell lung carcinoma[J].Clin Cancer Res,2008,14(14):4417-4426.

    [9]Esteban JM,Warsi Z,Tamura M,et al.Detection of intratumoral aromatase in breast carcinomas.An immunohistochemical study with clinicopathologic correlation[J].Am J Pathol,1992,940:337-343.

    [10]Sasano H,Nagura H,Harada N,et al.Immunolocalization of aromatase and other steroidogenic enzymes in human breast disorders[J].Hum Pathol,1994,25:530-535.

    [11]Utsunomiya H,Suzuki T,Kaneko C,et al.The analyses of 17beta-h(huán)ydroxysteroid dehydrogenase isozymes in human endometrial hyperplasia and carcinoma[J].JClin Endocrinol Metab,2001,86(7):3436-3443.

    Estrogen receptor and aromatase expression in gingival carcinoma tissue

    WANG Qiu-rui*,YANG Jian,ZHAO Hua-ping,ZHANG Ying-h(huán)uai
    (*Beijing Tongzhou District Xinhua Hospital,Tongzhou 101100,China)

    AIM:To investigate the expression of estrogen receptor(ER)and aromatase in gingival carcinoma.METHODS:ER and aromatase were detected by immunohistochemical staining SPmethod in gingival carcinoma(n=28)and normal gingival tissues(n=15).RESULTS:Positive expression rates of ER and aromatase expression in gingival carcinoma were 50.00%and 42.86%,in normal gingival tissueswere 13.33%and 6.67%,respectively(P<0.05).No significant correlation was found between ER and aromatase in gingival carcinoma.CONCLUSION:Estrogen metablism might be related to gingival carcinoma.Aromatase is not the exclusive reason of the high positive rate of ER.

    gingiva;squamous cell carcinoma;estrogen receptor(ER);aromatase;immunohistochemistry

    R780.2

    A

    1005-2593(2015)05-0304-04

    10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.05.009

    2015-01-08;

    :2015-03-19

    王秋銳(1977-),男,漢族,河北人。主治醫(yī)師

    猜你喜歡
    癌組芳香化弱陽性
    CT 鑒別診斷胰頭部腫塊型慢性胰腺炎與胰頭癌的影像學(xué)分析
    甲狀腺乳頭狀癌合并乳腺癌患者的臨床病理特征分析
    乙型肝炎表面抗原弱陽性的檢測分析
    新型黃烷酮類芳香化酶抑制劑的合成及其活性研究
    暗紋東方鲀芳香化酶基因的結(jié)構(gòu)及表達(dá)分析
    彩超在膽管細(xì)胞癌與肝細(xì)胞癌診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用價值
    USP39、EZH2及Sox17在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義
    芳香化酶抑制劑治療子宮內(nèi)膜增生癥的研究進(jìn)展
    膠體金法檢測梅毒抗體價值及弱陽性影響因素分析
    自制弱陽性質(zhì)控品對無償獻(xiàn)血者進(jìn)行ABO血型鑒定室內(nèi)質(zhì)控的可行性探討
    国产伦一二天堂av在线观看| 看片在线看免费视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 一区在线观看完整版| 看片在线看免费视频| 制服人妻中文乱码| 可以免费在线观看a视频的电影网站| e午夜精品久久久久久久| bbb黄色大片| www.www免费av| 国产高清有码在线观看视频 | 国产区一区二久久| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产成人av教育| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 色精品久久人妻99蜜桃| 一级作爱视频免费观看| 大香蕉久久成人网| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久精品91蜜桃| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产成人免费无遮挡视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 日韩成人在线观看一区二区三区| 两个人免费观看高清视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲人成电影免费在线| 国产麻豆69| av福利片在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 国产精品久久久av美女十八| 亚洲国产精品sss在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 在线免费观看的www视频| videosex国产| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲成人国产一区在线观看| 成人手机av| 日韩欧美在线二视频| 成人国产综合亚洲| 午夜福利欧美成人| 亚洲七黄色美女视频| 成人手机av| 91老司机精品| 午夜福利高清视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 大码成人一级视频| 免费无遮挡裸体视频| 国产一区在线观看成人免费| 国产成人精品久久二区二区91| 性欧美人与动物交配| 欧美乱码精品一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美成人性av电影在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美精品亚洲一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美日韩黄片免| 18禁观看日本| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 在线永久观看黄色视频| 91精品三级在线观看| 国产成人精品在线电影| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产成人影院久久av| av福利片在线| 欧美一级毛片孕妇| 9色porny在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 美女免费视频网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产97色在线日韩免费| 亚洲最大成人中文| 1024香蕉在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 精品久久久久久,| 黄频高清免费视频| 成人18禁在线播放| 激情视频va一区二区三区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 啦啦啦免费观看视频1| 国产成人精品久久二区二区91| 国产激情久久老熟女| 日韩国内少妇激情av| 精品人妻1区二区| 91av网站免费观看| 欧美大码av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 真人做人爱边吃奶动态| 神马国产精品三级电影在线观看 | 亚洲精品美女久久av网站| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美中文综合在线视频| 身体一侧抽搐| 免费高清在线观看日韩| 午夜久久久在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 香蕉久久夜色| 国产av一区二区精品久久| 又大又爽又粗| 精品高清国产在线一区| 久久狼人影院| 真人一进一出gif抽搐免费| 成人欧美大片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 夜夜爽天天搞| 日日夜夜操网爽| 亚洲伊人色综图| 国产高清有码在线观看视频 | 久久九九热精品免费| 我的亚洲天堂| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久性视频一级片| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 在线视频色国产色| 香蕉国产在线看| 脱女人内裤的视频| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 色哟哟哟哟哟哟| 午夜福利免费观看在线| 高清在线国产一区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 91麻豆av在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 一区二区三区国产精品乱码| 少妇熟女aⅴ在线视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产成人av激情在线播放| 精品第一国产精品| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品不卡国产一区二区三区| 神马国产精品三级电影在线观看 | 欧美大码av| 一本大道久久a久久精品| 激情视频va一区二区三区| 久热这里只有精品99| 午夜老司机福利片| 色尼玛亚洲综合影院| 色综合婷婷激情| 九色亚洲精品在线播放| 成人av一区二区三区在线看| 国产主播在线观看一区二区| 久久久久久大精品| 国产亚洲av嫩草精品影院| e午夜精品久久久久久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| xxx96com| 国产视频一区二区在线看| 一a级毛片在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 91在线观看av| 国产一区二区三区视频了| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| av视频免费观看在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产精品免费视频内射| 亚洲精品一区av在线观看| 88av欧美| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产成人欧美在线观看| 丁香六月欧美| 亚洲熟女毛片儿| 免费少妇av软件| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久午夜亚洲精品久久| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 91九色精品人成在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 天堂√8在线中文| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 国产成人欧美| 男女之事视频高清在线观看| 国内精品久久久久精免费| 涩涩av久久男人的天堂| 男人操女人黄网站| 黄色成人免费大全| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 制服人妻中文乱码| 一a级毛片在线观看| av福利片在线| 少妇 在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产成人精品久久二区二区免费| 岛国视频午夜一区免费看| 久久久国产成人精品二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久中文字幕人妻熟女| 两个人看的免费小视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲欧美激情在线| av网站免费在线观看视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 一区福利在线观看| 国产成人欧美在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产精品一区二区三区四区久久 | 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产一区在线观看成人免费| 操美女的视频在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 天堂√8在线中文| 亚洲男人的天堂狠狠| 日韩免费av在线播放| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 免费在线观看黄色视频的| 黄色成人免费大全| 大型av网站在线播放| 波多野结衣巨乳人妻| 国产免费av片在线观看野外av| 性少妇av在线| 999久久久精品免费观看国产| 日本免费a在线| 午夜免费鲁丝| 免费av毛片视频| 热99re8久久精品国产| 一二三四在线观看免费中文在| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产av一区在线观看免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲三区欧美一区| 午夜福利在线观看吧| 国产亚洲精品av在线| 日韩欧美三级三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产激情欧美一区二区| 国产私拍福利视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 国产男靠女视频免费网站| 好男人在线观看高清免费视频 | 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲全国av大片| 亚洲精华国产精华精| 韩国av一区二区三区四区| 99精品欧美一区二区三区四区| 精品日产1卡2卡| 男人舔女人的私密视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲av五月六月丁香网| 一夜夜www| 丁香六月欧美| 免费在线观看完整版高清| 狂野欧美激情性xxxx| www.自偷自拍.com| 99香蕉大伊视频| 一二三四在线观看免费中文在| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲色图综合在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美大码av| av在线播放免费不卡| 亚洲成a人片在线一区二区| 老汉色∧v一级毛片| 1024视频免费在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 日本a在线网址| 91精品国产国语对白视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 最新美女视频免费是黄的| 啦啦啦免费观看视频1| 日本vs欧美在线观看视频| 黄色 视频免费看| 中国美女看黄片| 欧美性长视频在线观看| 日本a在线网址| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 真人做人爱边吃奶动态| 成人免费观看视频高清| 精品高清国产在线一区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产片内射在线| 日韩精品免费视频一区二区三区| 精品久久久久久成人av| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久草成人影院| 人人妻人人澡欧美一区二区 | av在线播放免费不卡| 欧美黄色淫秽网站| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 在线观看免费视频网站a站| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲中文av在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲av美国av| 怎么达到女性高潮| 国产欧美日韩精品亚洲av| 午夜成年电影在线免费观看| 日本 av在线| 成年女人毛片免费观看观看9| www.自偷自拍.com| aaaaa片日本免费| 韩国精品一区二区三区| 人人妻人人澡人人看| 国产精品综合久久久久久久免费 | 国产精品99久久99久久久不卡| 两个人视频免费观看高清| 无限看片的www在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费高清在线观看日韩| 一本综合久久免费| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 欧美在线一区亚洲| 少妇 在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 一级a爱视频在线免费观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 日本 av在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日韩成人在线观看一区二区三区| 精品欧美一区二区三区在线| 波多野结衣av一区二区av| 国产区一区二久久| 亚洲第一av免费看| 午夜福利成人在线免费观看| 久热这里只有精品99| 欧美中文综合在线视频| 久久天堂一区二区三区四区| 国产精品一区二区免费欧美| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产1区2区3区精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 久久影院123| 亚洲第一青青草原| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一级毛片女人18水好多| 久久香蕉国产精品| 久久久久久久久中文| 国产精品日韩av在线免费观看 | cao死你这个sao货| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 男人操女人黄网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 最新在线观看一区二区三区| 一级a爱片免费观看的视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 免费看美女性在线毛片视频| 757午夜福利合集在线观看| 国产成人精品无人区| 欧美不卡视频在线免费观看 | 免费观看人在逋| 国产成+人综合+亚洲专区| 日本a在线网址| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 夜夜爽天天搞| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| av福利片在线| 亚洲精品一区av在线观看| 久久久国产成人精品二区| 日本欧美视频一区| 午夜成年电影在线免费观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久 成人 亚洲| 日韩视频一区二区在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 宅男免费午夜| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品国产国语对白av| 日本免费a在线| 亚洲一区中文字幕在线| 麻豆av在线久日| 久久精品91蜜桃| 99香蕉大伊视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 少妇的丰满在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 成人国产一区最新在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国内精品久久久久精免费| 国产精品九九99| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜免费激情av| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 黄色成人免费大全| 精品欧美国产一区二区三| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲免费av在线视频| 99re在线观看精品视频| 正在播放国产对白刺激| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久精品国产综合久久久| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国语自产精品视频在线第100页| 日韩高清综合在线| 老司机靠b影院| 极品人妻少妇av视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产片内射在线| 十八禁网站免费在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 麻豆成人av在线观看| 久久久久九九精品影院| 999久久久国产精品视频| 女人精品久久久久毛片| 国产av一区二区精品久久| 亚洲在线自拍视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜福利在线观看吧| 老汉色∧v一级毛片| 老司机午夜十八禁免费视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 又黄又爽又免费观看的视频| 两性夫妻黄色片| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲精品国产一区二区精华液| 午夜免费观看网址| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲av第一区精品v没综合| 又紧又爽又黄一区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 美女免费视频网站| 亚洲情色 制服丝袜| 久久久久久大精品| 免费无遮挡裸体视频| 成人手机av| 国产精品影院久久| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产91精品成人一区二区三区| 中文字幕av电影在线播放| 久久中文字幕人妻熟女| 午夜成年电影在线免费观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产熟女xx| 人成视频在线观看免费观看| 国产成人欧美| 中文字幕色久视频| 99热只有精品国产| 一区二区三区国产精品乱码| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲精品在线美女| aaaaa片日本免费| 国产高清激情床上av| 人人澡人人妻人| 国产精品精品国产色婷婷| 美女国产高潮福利片在线看| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲自拍偷在线| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 天天一区二区日本电影三级 | 国产av在哪里看| www.精华液| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产亚洲av高清不卡| 黄色片一级片一级黄色片| 久久狼人影院| 可以在线观看毛片的网站| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品一品国产午夜福利视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 男女之事视频高清在线观看| 欧美日韩黄片免| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 嫩草影院精品99| 少妇 在线观看| 午夜老司机福利片| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产成人欧美在线观看| 美女午夜性视频免费| svipshipincom国产片| 97碰自拍视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美国产日韩亚洲一区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品电影一区二区在线| 99在线视频只有这里精品首页| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成人国产一区最新在线观看| 久久这里只有精品19| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产亚洲欧美98| 国产一区在线观看成人免费| 日韩欧美在线二视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产亚洲欧美精品永久| 午夜a级毛片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲久久久国产精品| 日日爽夜夜爽网站| 国产成人精品在线电影| 一本综合久久免费| 亚洲av熟女| 麻豆成人av在线观看| 后天国语完整版免费观看| 免费在线观看影片大全网站| 国产成人av教育| 午夜影院日韩av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产精品久久久人人做人人爽| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲熟妇熟女久久| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产精品亚洲美女久久久| 国产成人精品久久二区二区91| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 一区二区三区激情视频| 男人操女人黄网站| 欧美成人免费av一区二区三区| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲人成伊人成综合网2020| 午夜影院日韩av| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 在线播放国产精品三级| 国产精品亚洲一级av第二区| 午夜视频精品福利| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产不卡一卡二| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 麻豆一二三区av精品| 香蕉丝袜av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 嫁个100分男人电影在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 99久久国产精品久久久| 亚洲少妇的诱惑av| www.精华液| АⅤ资源中文在线天堂| 丝袜美足系列| 黄频高清免费视频| 在线观看免费视频日本深夜| 国产av又大| 亚洲精品一区av在线观看| 精品久久蜜臀av无| 免费少妇av软件| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜福利免费观看在线| 曰老女人黄片| 午夜精品在线福利| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产高清videossex| 变态另类丝袜制服| 亚洲一区二区三区不卡视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产色视频综合| 精品人妻1区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产精品免费一区二区三区在线| 成人欧美大片| 欧美在线一区亚洲| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成人国语在线视频| 婷婷六月久久综合丁香| 久久 成人 亚洲| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99香蕉大伊视频| 国产野战对白在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪|