鴨致病性大腸桿菌的血清型鑒定及敏感藥物的臨床應(yīng)用

伍 莉，陳鵬飛

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶榮昌402460；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)水產(chǎn)系，重慶榮昌402460）

鴨致病性大腸桿菌的血清型鑒定及敏感藥物的臨床應(yīng)用

伍 莉1，陳鵬飛2

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶榮昌402460；2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)水產(chǎn)系，重慶榮昌402460）

本試驗(yàn)對(duì)榮昌部分規(guī)?；B(yǎng)鴨場(chǎng)分離的77株致病性大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及敏感藥物的臨床應(yīng)用。取病死雛鴨的肝臟進(jìn)行大腸桿菌的分離、純化，通過(guò)細(xì)菌的生化試驗(yàn)、血清型鑒定、致病性試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)以及敏感藥物的臨床應(yīng)用，確定分離菌的種類及致病能力的強(qiáng)弱。結(jié)果表明，77株大腸桿菌分屬于12種血清型，小鼠致病性試驗(yàn)顯示以O(shè)45、O92、O93和O142的致病性最強(qiáng)，致死率達(dá)到100%，O2的致死率最低，只有25%，其余血清型的致死率在37.5%～87.5%。分離菌株對(duì)氧氟沙星、慶大霉素、諾氟沙星和卡那霉素4種抗菌藥物高敏。

致病性；大腸桿菌；藥敏試驗(yàn)；臨床應(yīng)用；規(guī)模化養(yǎng)鴨場(chǎng)

大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌（Duck patho?genic Escherichia coli）引起的致病性疾病。本病的臨床病型復(fù)雜多樣，包括大腸桿菌性敗血癥、腹膜炎、生殖道感染、臍炎、卵黃囊感染、蜂窩織炎等多種病型。由于大腸桿菌血清型較多，抗原復(fù)雜，臨床用藥時(shí)應(yīng)根據(jù)其分離菌特性、血清型鑒定結(jié)果及時(shí)治療。本試驗(yàn)對(duì)采自2011年12月至2012年12月榮昌8個(gè)不同地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)鴨場(chǎng)具有典型大腸桿菌病臨床癥狀和病理變化的雛鴨分離的77株大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及敏感藥物的臨床應(yīng)用，為臨床合理防治鴨大腸桿菌病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料采自2011年12月至2012年12月榮昌縣8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)96只疑似大腸桿菌病鴨的肝臟。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物健康昆明系小鼠104只，7日齡健康花邊雛鴨200羽，雌雄各半。

1.3 試劑所用培養(yǎng)基，由西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系提供；腸桿菌科細(xì)菌生化鑒定管（批號(hào)：120123），藥敏試紙（批號(hào)：120215），由杭州天和微生物試劑有限公司提供；大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O因子血清，由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供（批號(hào)：120324）；敏感藥物：硫酸慶大霉素、硫酸卡那霉素、諾氟沙星、氧氟沙星。

1.4 細(xì)菌分離鑒定病料分別接種于普通營(yíng)養(yǎng)平板、麥康凱平板，置37℃培養(yǎng)24 h，涂片，革蘭染色鏡檢。挑取培養(yǎng)基上的單個(gè)典型菌落，依次接種于麥康凱平板、肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)。

1.5 生化試驗(yàn)取純培養(yǎng)菌落接種肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)，按常規(guī)方法進(jìn)行生化試驗(yàn)15項(xiàng)［1］。

1.6 血清型鑒定大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O因子血清凝集試驗(yàn)，按照使用說(shuō)明書和文獻(xiàn)操作［2-3］。

1.7 小鼠致病性試驗(yàn)取定型后的大腸桿菌配成含菌量為20億/m L懸浮液作攻毒用［4］。將104只小鼠，隨機(jī)分為13組，每組8只；第1～12組為試驗(yàn)組，腹腔注射0.2mL懸浮液，第13組為空白對(duì)照組，腹腔注射0.2mL生理鹽水。接毒后記錄小鼠發(fā)病與死亡情況，未死亡小鼠接毒后第10天撲殺，剖檢死亡小鼠，取肝臟抹片，革蘭染色，鏡檢。

1.8 藥敏試驗(yàn)采用圓紙片擴(kuò)散法［5］，參照NC?CLS標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定。

1.9 敏感藥物的臨床應(yīng)用

1.9.1 雛鴨攻毒試驗(yàn)取定型后致病性較強(qiáng)的4種大腸桿菌共同接種于同一肉湯培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)18 h，4 000 r/min離心20min，用滅菌生理鹽水配成含菌量為20億/m L懸浮液作攻毒用。將1周齡雛鴨200只經(jīng)腿部肌肉接種0.2mL菌液；攻毒后記錄雛鴨發(fā)病與死亡情況，未死亡雛鴨攻毒后第7天撲殺。剖檢死亡和未死亡雛鴨肝臟，進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定。

1.9.2 敏感藥物臨床應(yīng)用用消毒劑對(duì)鴨舍環(huán)境進(jìn)行消毒，集中確診病鴨，隨機(jī)分成5組，第1～4組分別用藥敏試驗(yàn)結(jié)果中的高敏藥物進(jìn)行集中飲水給藥，全天的用藥量分上、下午兩次給藥，連續(xù)給藥3 d。第5組為對(duì)照組不做治療，飼喂普通水。連續(xù)進(jìn)行2周的觀察記錄。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)共分離到77株大腸桿菌，在麥康凱平板上形成紅色菌落；在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上形成圓形凸起、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色菌落；在普通肉湯營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中變渾濁，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌環(huán)。鏡檢發(fā)現(xiàn)該細(xì)菌呈紅色（革蘭染色陰性），形態(tài)為兩端鈍圓的短桿狀，多數(shù)為單個(gè)散在，少數(shù)為成對(duì)連接。由此初步鑒定這77株細(xì)菌為大腸桿菌。

2.2 生化試驗(yàn)77株分離菌的生化試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 血清型鑒定77株大腸桿菌分屬于12種血清型，其中以O(shè)76、O78、O92、O142為優(yōu)勢(shì)血清型，分別占總分離菌株的16.8%、24.7%、23.4%和19.5%（表2）。

表1 大腸桿菌生化試驗(yàn)結(jié)果

表2 大腸桿菌O抗原血清型鑒定結(jié)果

2.4 致病性試驗(yàn)77株大腸桿菌分屬于12種血清型，用這12種血清型的大腸桿菌進(jìn)行小鼠致病性試驗(yàn)，接毒后10 h試驗(yàn)組小鼠開(kāi)始出現(xiàn)死亡，其中以O(shè)45、O92、O93和O142的致病性最強(qiáng)，致死率達(dá)到100%，O2的致死率最低，只有25%，其余血清型的致死率在37.5%～87.5%。剖檢死亡小鼠可見(jiàn)肝臟嚴(yán)重出血或呈暗紅色，脾和腎表面有出血點(diǎn)，腸黏膜有出血、水腫現(xiàn)象，腸內(nèi)容物稀薄有氣泡。從死亡小鼠肝臟中均能分離到大腸桿菌。對(duì)照組小鼠全部存活。

2.5 藥敏試驗(yàn)77株大腸桿菌對(duì)氧氟沙星、慶大霉素、諾氟沙星和卡那霉素高敏（81.8%～98.7%）；對(duì)恩諾沙星、頭孢他啶、鏈霉素、新諾明和大觀霉素5種抗菌藥物較為敏感，為36.4%～72.7%，對(duì)氨芐西林、阿莫西林、多粘菌素（B）、強(qiáng)力霉素和頭孢唑啉5種抗菌藥物敏感度最低（表3）。

2.6 敏感藥物的臨床應(yīng)用

2.6.1 雛鴨攻毒試驗(yàn)200只雛鴨接種菌株后7 h開(kāi)始出現(xiàn)精神委靡，食欲下降乃至廢絕、站立不穩(wěn)、部分呼吸困難、下痢等臨床癥狀；10 h后死亡22只，存活178只全部確診為鴨致病性大腸桿菌感染。

2.6.2 敏感藥物的治療結(jié)果將確診的178只病鴨分成5組，前4組每組40只，第5組為對(duì)照組18只。經(jīng)過(guò)高敏藥物的治療，效果顯著，治愈率都在90%以上（表4）。

表3 大腸桿菌分離株的藥物敏感試驗(yàn)

表4 鴨臨床治療情況統(tǒng)計(jì)

3 分析與討論

本試驗(yàn)從死亡雛鴨肝臟中分離的細(xì)菌，根據(jù)其培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性［6］，并經(jīng)生化試驗(yàn)初步鑒定為大腸埃希菌。分離到的77株大腸桿菌分屬于12種血清型，以O(shè)76、O78、O92、O142為優(yōu)勢(shì)血清型，這與央珍［6］的報(bào)道一致，但是本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的O2、O9為國(guó)內(nèi)不常見(jiàn)的血清型。這一結(jié)果表明，本地區(qū)流行的鴨大腸桿菌病血清型復(fù)雜，在防治本病時(shí)應(yīng)特別注意。分離菌株以O(shè)45、O92、O93和O142的致病性最強(qiáng)，致死率達(dá)到100%；O2菌株的致死率最低，只有25%，其余菌株的致死率在37.5%～87.5%之間。在實(shí)際生產(chǎn)中因?yàn)榇竽c桿菌的血清型種類眾多，變異菌株層出不窮，致病因子較為復(fù)雜，給本病的防治在一定程度上帶來(lái)困難。敏感藥物的臨床應(yīng)用表明，高敏藥物的治療效果顯著，印證了藥敏試驗(yàn)的結(jié)果與臨床治療效果相符合，進(jìn)一步說(shuō)明藥敏試驗(yàn)對(duì)臨床用藥具有合理的指導(dǎo)作用。

［1］沙莎，宋振輝.動(dòng)物微生物實(shí)驗(yàn)教程［M］.重慶：西南師范大學(xué)出版社，2011：16-43.

［2］于學(xué)輝，程安春，汪銘書，等.鴨致病性大腸桿菌的血清型鑒定及相關(guān)獨(dú)立基因分析［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，39（1）：12-13.

［3］宋立，寧宜寶，張廣川，等.我國(guó)華東地區(qū)大腸桿菌、沙門氏菌分離和血清學(xué)鑒定［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2004，26（2）：142-145.

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［5］Akua Serwaah Obeng，Heather Rickard，Olasumbo Ndi，etal.An?tibiotic resistance，phylogenetic grouping and virulence potential of Escherichia coli isolated from the faeces of intensively farmed and free range poultry［J］.ary Microbiology，154（2012）；305-315.

［6］央珍，聶奎.重慶市部分地區(qū)鴨源大腸桿菌的O抗原血清型及耐藥性［J］.西南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，33（8）：52-56.

Serotype Identification and the Clinical Application of Sensitive Drugs of Pathogenic E.coli Isolated from Duck lings

WU Li1，CHEN Peng-fei2
（1.Departmentof Veterinary Medicine，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China；2.Departmentof Fisheries，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China）

Susceptibility tests and clinical applications of sensitive drugs have been conducted on 77 Pathogenic E.colies that isolated from part large scale duck farm in Rongchang district.Isolation and purification of E.coli were from livers of the dead duck?lings，and the type and the strength of pathogenicity of isolated E.coli were determined through biochemical tests of bacteria，sero?type identification，pathogenicity test，susceptibility test and clinical application of sensitive drugs.The results indicated that 77 Pathogenic E.coli belonging to 12 serotypes.Pathogenicity tests inmice indicated that O45，O92，O93and O142exhibited themost pow?erful pathogenicitywith the death rates upto100%.The death rate of O2was the lowestwith a value of 25%.The death rates of oth?er serotypes ranged from 37.5%to 87.5%.The isolated strains exhibited highly sensitive to ofloxacin，gentamicin，norfloxacin and kanamycin.

Pathogenicity；E.coli；susceptibility test；Clinical application；duck farm in large scale

S852.61+2

A

0529-6005（2015）12-0041-03

2015-03-25

重慶市科委重大科技創(chuàng)新能力建設(shè)項(xiàng)目（CSTC，2009CB1010）

伍莉（1963-），女，副教授，碩士，從事基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)教學(xué)與科研工作，E-mail：liwu63@163.com