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    胃癌組織中CD44v6、MMP-9蛋白的表達(dá)

    2015-04-18 09:22:36王水生趙春臨丁朝輝徐化楠葉延偉
    關(guān)鍵詞:胃癌淋巴結(jié)陽性

    王水生,趙春臨,丁朝輝,徐化楠,葉延偉

    鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸外科 鄭州 450052

    胃癌組織中CD44v6、MMP-9蛋白的表達(dá)

    王水生,趙春臨#,丁朝輝,徐化楠,葉延偉

    鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸外科 鄭州 450052

    #通信作者,男,1966年1月生,博士,主任醫(yī)師,副教授,研究方向:消化道腫瘤基礎(chǔ)與臨床,E-mail:zhaochunlin@zzu.edu.cn

    胃腫瘤;CD44v6;MMP-9;浸潤轉(zhuǎn)移

    胃癌是消化系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是引起患者死亡的主要原因,然而腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是個(gè)多步驟多基因參與的復(fù)雜過程,涉及細(xì)胞與細(xì)胞外間質(zhì)或與其他細(xì)胞的一系列相互作用。有研究[1-2]表明,黏附分子 CD44拼接變異體v6(CD44 splice variant v6,CD44v6)的過度表達(dá)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)活性和表達(dá)的增強(qiáng)與胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。作者運(yùn)用免疫組化SP雙染技術(shù)檢測CD44v6和MMP-9蛋白在60例原發(fā)性胃癌及60例正常胃黏膜組織中的表達(dá),探討其在胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 材料 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年3月至2014年3月期間收治的胃癌根治手術(shù)患者60例,所有病例手術(shù)前均未曾接受過放化療、中醫(yī)及免疫治療?;颊吣?2例,女28例;年齡42~75歲,<60歲29例,≥60歲31例;腫瘤直徑≥3 cm 18例,<3 cm 42例;浸潤深度:T0、16例,T231例,T3、423例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:N04例,N1、236例,N3、420例;TNM分期:Ⅰ期6例,Ⅱ期29例,Ⅲ期25例。

    1.2 取材及制片 所有標(biāo)本取材均在手術(shù)中標(biāo)本離體后30 min內(nèi)完成,每例手術(shù)標(biāo)本均取癌灶組織和癌旁正常胃組織各2塊,每塊300~500 mg,無菌生理鹽水沖洗,濾紙吸干后裝入無酶EP管并立即投入液氮中,隨后轉(zhuǎn)至-70 ℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 CD44v6和MMP-9蛋白的免疫組化SP雙染法檢測 所有標(biāo)本用甲醛固定,脫水,然后石蠟包埋,最后4 μm厚連續(xù)切片。實(shí)驗(yàn)前加做抗體交叉實(shí)驗(yàn),未見交叉反應(yīng)。嚴(yán)格參照說明書染色,混合一抗(稀釋200倍使用),孵育條件為4 ℃過夜,并高壓蒸汽修復(fù),以pH 6.0檸檬酸緩沖液作為抗原修復(fù)液,混合二抗(稀釋100倍使用)。陰性對照使用PBS代替一抗染色,以公司提供的已知陽性片作為陽性對照。CD44v6單克隆抗體、MMP-9多克隆抗體及Polymer雙染試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

    1.4 結(jié)果判斷 CD44v6和MMP-9的陽性染色呈棕黃色及紅色顆?;驁F(tuán)塊狀,CD44v6主要表達(dá)于細(xì)胞膜,少數(shù)可見于胞質(zhì);MMP-9主要在近膜胞質(zhì)中表達(dá)。由兩位病理醫(yī)師分別觀察,每張切片選取3個(gè)具有代表性的高倍視野(×400),計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,根據(jù)染色程度以及陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評分。①染色程度:不著色為0分,著色淡為1分,中度著色為2分,著色深為3分。②陽性細(xì)胞百分比:<5%為0分, 5%~為1分, 25%~為2分,50%~為3分。兩者相乘為最后得分,0~1分為陰性(-),2~3分為(+),4~6分為(),>6分為()。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0分析。用配對χ2檢驗(yàn)比較胃癌及癌旁正常胃組織中CD44v6 和MMP-9蛋白表達(dá)的差異,應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析胃癌組織中CD44v6和MMP-9蛋白的表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系,應(yīng)用Spearman相關(guān)分析胃癌組織中兩種蛋白表達(dá)的關(guān)系,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 胃癌組織及癌旁正常胃組織中CD44v6與MMP-9蛋白的表達(dá) 胃癌組織中CD44v6主要定位于細(xì)胞膜和近膜的胞質(zhì)(圖1 ),呈異質(zhì)性表達(dá),胃癌組織中CD44v6蛋白陽性表達(dá)率81.67%(49/60),高于癌旁正常胃組織陽性表達(dá)率為15.00%(9/60) (表1)。MMP-9陽性表達(dá)產(chǎn)物在胃癌組織細(xì)胞中主要定位于細(xì)胞質(zhì),在60例胃癌組織中陽性表達(dá)率為73.33%(44/60),在癌旁正常胃組織中陽性表達(dá)率為5.00%(3/60)(表2)。胃癌組織中CD44v6和MMP-9蛋白陽性表達(dá)率均高于癌旁正常胃組織。

    圖1 胃癌組織中CD44v6(A)和MMP-9(B)的表達(dá)(SP雙染, ×400)

    表1 胃癌及癌旁正常胃組織中CD44v6蛋白的表達(dá) 例

    表2 胃癌及癌旁正常胃組織中MMP-9蛋白的表達(dá) 例

    2.2 胃癌組織中CD44v6與MMP-9蛋白的表達(dá)與胃癌患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 見表3。

    表3 CD44v6與MMP-9蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 例(%)

    2.3 胃癌組織中CD44v6與MMP-9蛋白表達(dá)的關(guān)系 胃癌組織中CD44v6與MMP-9蛋白的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián),見表4。

    rS=0.036,P=0.009。

    3 討論

    惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是引起患者死亡的主要原因,然而腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是個(gè)多步驟多基因參與的復(fù)雜過程,其中細(xì)胞黏附、基質(zhì)溶解和細(xì)胞移動(dòng)是癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的3個(gè)步驟[3]。

    CD44是由單一基因編碼的單鏈膜表面糖蛋白家族,具有高度異質(zhì)性,基因定位于第11號染色體短臂上[4],CD44v6是CD44家族中的一種變異形,它能與透明質(zhì)酸結(jié)合,通過影響腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)的結(jié)合從而改變腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移能力。該研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌組織中CD44v6蛋白的表達(dá)均高于正常胃組織;CD44v6在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌浸潤深度及TNM分期密切相關(guān),但與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤的大小及生長位置無關(guān)。Okayama等[5]發(fā)現(xiàn)在胃腺癌組織中CD44v6陽性表達(dá)率明顯高于其在非典型增生胃黏膜及正常胃黏膜中的表達(dá)率,隨著腫瘤細(xì)胞浸潤深度的增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,CD44v6陽性表達(dá)率顯著升高,但與年齡、性別及有無脈管侵犯無關(guān)。CD44v6強(qiáng)陽性表達(dá)的胃癌患者術(shù)后生存率均明顯降低,表明胃癌CD44v6的過度表達(dá)可能使胃癌細(xì)胞產(chǎn)生侵襲表型,以利于癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[2]。該研究結(jié)果與以上結(jié)果基本相符,即胃癌的浸潤深度及TNM分期與CD44v6的表達(dá)有關(guān),說明CD44v6確實(shí)在胃癌浸潤中扮演著重要的角色。

    MMP-9是MMPs中的重要成員,能降解細(xì)胞外多種基質(zhì)成分,其中就包括基底膜的主要成分Ⅳ型膠原[6]。腫瘤細(xì)胞表達(dá)MMP-9與其侵襲轉(zhuǎn)移能力有關(guān)[7]。Littlepage等[8]報(bào)道MMP-9參與了腫瘤新生血管的生成,新生微血管在結(jié)構(gòu)上不完善,缺乏肌層,基膜不連續(xù),這些結(jié)構(gòu)特點(diǎn)喪失了組織對腫瘤侵犯的屏障作用,增加了腫瘤進(jìn)入淋巴、血液循環(huán)的可能。有研究[9]表明MMP-9的表達(dá)和活性隨乳癌分級的增加而增高。對于胃癌既往研究[10]顯示,MMP-表達(dá)與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病期密切相關(guān),MMP-9強(qiáng)陽性表達(dá)者術(shù)后生存率顯著下降,提示MMP-9表達(dá)與胃癌的發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān),而MMP-9強(qiáng)陽性表達(dá)常常意味著胃癌病期較晚[2]。以上結(jié)果一定程度上說明了MMP-9在胃癌惡性生物學(xué)行為中發(fā)揮著重要的作用,其中在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面的結(jié)果與該實(shí)驗(yàn)結(jié)果不完全一致。然而也有學(xué)者[11]表明MMPs在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中的作用尚無統(tǒng)一結(jié)論。該研究有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)MP-9蛋白的表達(dá)未見顯著差異,原因可能有:①無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的樣本量偏少。②胃癌特殊的“跳躍式”淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方式。

    該研究結(jié)果顯示胃癌組織中CD44v6和MMP-9蛋白表達(dá)有關(guān)聯(lián)。以往有研究[12]表明CD44v6有利于MMP-9錨定在細(xì)胞膜表面,通過影響細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白的構(gòu)型和分布從而介導(dǎo)腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移。該研究結(jié)果與以上理論相符,可以推斷出CD44v6與MMP-9在胃癌浸潤轉(zhuǎn)移過程中相互關(guān)聯(lián)、協(xié)同作用。因此,聯(lián)合檢測兩者對胃癌治療的臨床實(shí)踐具有一定的指導(dǎo)意義,即對兩者表達(dá)均陽性的患者應(yīng)采取更積極的治療措施。

    [1]張成武,徐文娟,趙仲生,等.CD44V-6和E-CD的表達(dá)與胃癌生物學(xué)特性的關(guān)系[J].中華普通外科雜志,2000,15(4):4

    [2]張成武,鄒壽椿,徐文娟,等.胃癌基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的臨床意義[J].中國胃腸外科雜志,2000,3(1):25

    [8]Littlepage LE,Sternlicht MD,Rougier N,et al.Matrix metalloproteinases contribute distinct roles in neuroendocrine prostate carcinogenesis, metastasis, and angiogenesis progression[J].Cancer Res,2010,70(6):2224

    (2014-10-01 收稿 責(zé)任編輯李沛寰)

    Expression of CD44v6 and MMP-9 proteins in gastric cancer tissue

    WANGShuisheng,ZHAOChunlin,DINGChaohui,XUHuanan,YEYanwei

    DepartmentofGastrointestinalSurgery,theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052

    gastric neoplasm;CD44v6;MMP-9;invasion and metastasis

    10.13705/j.issn.1671-6825.2015.03.031

    R735.2

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