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    BV致病菌群分布狀況及BV快速檢測試劑盒診斷細(xì)菌性陰道病的價值

    2015-04-14 08:49:38郝家明刁志宏黎永新楊志勇李明友
    海南醫(yī)學(xué) 2015年22期
    關(guān)鍵詞:細(xì)菌性試劑病原菌

    郝家明,刁志宏,黎永新,楊志勇,李明友

    (1.中國人民解放軍第187中心醫(yī)院檢驗科,海南 ???71157;2.廣東省第二人民醫(yī)院檢驗科,廣東 廣州510317)

    BV致病菌群分布狀況及BV快速檢測試劑盒診斷細(xì)菌性陰道病的價值

    郝家明1,刁志宏2,黎永新2,楊志勇2,李明友2

    (1.中國人民解放軍第187中心醫(yī)院檢驗科,海南 海口571157;2.廣東省第二人民醫(yī)院檢驗科,廣東 廣州510317)

    目的評價快速檢測試劑診斷細(xì)菌性陰道病(BV)的價值,并分析BV致病菌群的分布狀況。方法使用BV快速檢測試劑檢測108例疑似BV患者的陰道分泌物,以Amsel為金標(biāo)準(zhǔn)對其檢測結(jié)果進(jìn)行評價;同時進(jìn)行病原菌培養(yǎng),分析其致病菌群情況。結(jié)果BV快速檢測試劑的敏感性、特異性、陽性預(yù)期值和陰性預(yù)期值分別為97.3%、95.8%、92.3%和98.6%,與金標(biāo)準(zhǔn)符合率高達(dá)96.3%(Kappa系數(shù)=0.879,P=0.001);細(xì)菌培養(yǎng)檢出病原菌77例,23例(21.3%)發(fā)生合并感染,以假絲酵母菌合并其他病原菌體感染為多見。結(jié)論BV快速檢測試劑診斷BV具有較高的特異性和敏感性,但BV致病菌群呈現(xiàn)出多樣性,不能忽視需氧性菌所致BV的存在。

    細(xì)菌性陰道?。魂幍兰拥录{菌;陰道菌群

    細(xì)菌性陰道病(Bacterial vaginosis,BV)是目前臨床上婦科最常見的感染性疾病之一[1],其典型病理特征為陰道微生態(tài)失調(diào),正常菌群比例改變[2-4],表現(xiàn)為產(chǎn)H2O2乳酸桿菌數(shù)量減少,而類桿菌、支原體等厭氧菌、加德納菌等數(shù)量過度增加。如不及時治療,易于發(fā)生泌尿系感染、不良妊娠及盆腔炎等婦科疾病,故而其早期明確診斷至關(guān)重要。唾液酸酶由陰道菌群中的厭氧菌產(chǎn)生,最新研究證實其活性升高可反映陰道內(nèi)厭氧菌過度生長,與BV的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。BV快速檢測試劑對活性唾液酸酶具有高度特異性,本研究以Amsel法為金標(biāo)準(zhǔn),對其診斷效能進(jìn)行評估,同時進(jìn)行陰道菌群病原菌培養(yǎng),分析BV的致病菌群特征。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取2014年1~6月期間在廣東省第二人民醫(yī)院婦科門診接受診治疑似為BV的女性患者108例,患者年齡20~55歲,平均(33.6±4.2)歲。所有受檢者均未使用過灌注療法或陰道乳劑;排除72 h內(nèi)有性生活史者,妊娠期和行經(jīng)期女性。

    1.2 檢測試劑和儀器 BV細(xì)菌性陰道病快速檢測試劑由廣東珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號:YZB/粵0395-2008)。血液瓊脂培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、雙糖鐵瓊脂等常規(guī)試劑購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司。儀器采用美國BD公司的Phoenix100細(xì)菌鑒定系統(tǒng)。

    1.3 方法

    1.3.1 樣本收集 外陰消毒后,用兩支棉拭子(無菌生理鹽水浸濕)于陰道深部或后穹隆取材并立即送檢。一支行BV細(xì)菌性陰道病快速檢測、Amsel法檢測及陰道分泌物常規(guī)檢查;另一支行細(xì)菌培養(yǎng)和菌種分析。樣本陰道分泌物常規(guī)檢查按衛(wèi)生部《臨床檢驗操作規(guī)程》第三版進(jìn)行。BV細(xì)菌性陰道病快速檢測按試劑使用說明書操作,以陰陽性判定結(jié)果。

    1.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)方法 分別將檢材接種于血瓊脂、巧克力及麥康凱平板,35℃孵育24~48 h后,可疑菌落涂片,行革蘭染色、選擇性氧化酶試驗、觸酶試驗后選擇合適的ATB鑒定板條或使用美國BD公司的Phoenix100細(xì)菌鑒定系統(tǒng)行細(xì)菌鑒定。

    1.3.3 Amsel法 以Amsel法作為確診BV的金標(biāo)準(zhǔn):(1)陰道分泌物稀薄奶樣;(2)陰道pH>4.5;(3)胺試驗陽性;(4)線索細(xì)胞陽性;以上4項有3項陽性即為BV陽性。

    1.3.4 陰道加德納菌的鑒定 按文獻(xiàn)[5]將標(biāo)本劃種于含有50ml/L人血瓊脂平板上,在37℃、50ml/L CO2環(huán)境中生長良好,形成針尖大小、圓形、光滑、半透明、形似露滴狀的菌落,有狹窄的β溶血環(huán),48 h后菌落直徑增大。挑取典型菌落作氧化酶、觸酶試驗陰性,進(jìn)一步作葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等發(fā)酵試驗產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,不發(fā)酵肌醇和棉子糖,能水解馬尿酸和淀粉,硝酸鹽還原試驗陰性。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,實驗結(jié)果中的計數(shù)資料以頻數(shù)和百分率表示,兩種方法之間的比較采用Kappa一致性檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 兩種方法的BV檢測結(jié)果比較108例樣本中,Amsel法檢測陽性39例,陽性率為36.1%,BV細(xì)菌快速檢測試劑檢測陽性37例,陽性率為34.3%。以Amsel法為金標(biāo)準(zhǔn),BV細(xì)菌快速檢測試劑特異性為95.8%(68/71),敏感性為97.3%(36/37),陽性預(yù)測值為92.3%(36/39),陰性預(yù)測值為98.6%(68/69),兩種方法符合率為96.3%[(36+68)/108],Kappa=0.879,P=0.001,P=0.001,見表1。

    表1108例患者的兩種方法BV檢測結(jié)果比較(例)

    2.2 病原菌培養(yǎng)結(jié)果108例標(biāo)本中,檢出病原菌77例(71.3%),其中,假絲酵母菌31例(28.7%),大腸埃希氏菌20例(18.5%),陰道加德納菌16例(14.8%),金黃色葡萄球菌8例(7.4%),變形桿菌7例(6.5%),枸緣酸桿菌和糞腸球菌各4例(3.7%),克雷伯氏菌和淋病奈瑟氏菌各3例(2.8%),不動桿菌1例(0.9%)。此外,經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)23例(21.3%)發(fā)生合并感染,并以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見,其中合并陰道毛滴蟲(6例),大腸埃希桿菌(3例),加德納菌(3例)、克雷伯氏菌(1例);其次加德納菌合并陰道毛滴蟲(4例)、大腸埃希氏菌(1例);少數(shù)合并金黃色葡萄球菌、糞腸球菌或淋病奈氏菌感染。

    3 討論

    Amsel法是目前診斷BV唯一公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”[6-7],但此法操作繁瑣、取材較多、難度大、費用高,最大的缺陷是結(jié)果以主觀判斷為主[8]。正常情況下婦女陰道內(nèi)存在二十多種微生物,其相互制約、相互協(xié)調(diào),共同維持陰道微生態(tài)相對平衡。當(dāng)某種或某幾種微生物異常增多時,產(chǎn)H2O2的乳酸桿菌減少甚至消失,大量致病性厭氧菌取代了正常乳酸桿菌,粘附在上皮細(xì)胞表面使細(xì)胞溶解,是發(fā)生BV的主要原因。BV快速診斷試劑盒的檢測原理是試劑與病原菌產(chǎn)生的唾液酸酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成唾液酸,再加入顯色劑即可診斷BV。本研究對所有樣本同時采用Amsel法和BV快速檢驗法進(jìn)行診斷,經(jīng)Kappa一致性檢驗,發(fā)現(xiàn)兩種方法的診斷結(jié)果具有良好的一致性。BV快速檢驗法取得了較高敏感性和特異性,且具有操作簡便、耗時短、易于掌握、結(jié)果直觀、試劑可室溫保存等優(yōu)點。

    本研究在樣本收集過程中,未能進(jìn)行沙眼衣原體、解脲支原體感染的檢驗,而其他細(xì)菌、真菌、陰道毛滴蟲感染狀況與文獻(xiàn)報道基本相符。但本研究還發(fā)現(xiàn),BV患者存在相當(dāng)一部分混合感染,本組病例的混合感染率為21.3%,以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見,除合并其他細(xì)菌外,也可能合并陰道毛滴蟲、真菌等其他病原體。提示細(xì)菌性陰道病大多為非單一性感染,病原體可能顯示多態(tài)性。原因可能是BV病原菌可產(chǎn)生高水平磷脂酶A、唾液酸酶、黏蛋白酶等[9-10],上述酶對陰道保護(hù)性黏液層具有較強(qiáng)的溶解作用,破壞了陰道的自我保護(hù)機(jī)制,增加了致病性病原體的附著力;而琥珀酸的產(chǎn)生又可抑制趨化效應(yīng),阻止中性粒細(xì)胞向病原體聚集,使其他致病性病原體能夠逃避免疫攻擊,大量繁殖。二者共同作用,進(jìn)一步加重BV的感染和炎癥癥狀。本研究發(fā)現(xiàn),部分金標(biāo)準(zhǔn)檢測陽性病例采用BV快速試劑盒為陰性,可能是因為BV感染過程中尚未形成產(chǎn)生唾液酸酶的優(yōu)勢菌,唾液酸酶產(chǎn)量未達(dá)到檢測限;也有部分BV快速診斷試劑盒檢測為陽性的病例金標(biāo)準(zhǔn)診斷為陰性,可能是因為其他少數(shù)產(chǎn)唾液酸酶的細(xì)菌導(dǎo)致了假陽性反應(yīng)。

    值得注意的是,BV并非完全由厭氧菌引發(fā),不能忽視需氧菌導(dǎo)致BV的可能,本組病例細(xì)菌培養(yǎng)也發(fā)現(xiàn)了金黃色葡萄球菌、糞腸球菌等需氧菌或兼性厭氧菌。Shamim等[11]研究需氧菌致病陰道炎(Aerobe vaginosis,AV)的致病細(xì)菌和抗生素的敏感性發(fā)現(xiàn),該病的主要致病菌為金黃色葡萄球菌(40%)、E.coli(13%),糞腸球菌(20%)和B族鏈球菌(6%)。這些細(xì)菌對青霉素類和磺胺類抗生素的敏感性均在90%以上,為AV的診斷和治療提供了詳實的微生物學(xué)方面的實驗數(shù)據(jù)。因此Gilbert提出的AV的診斷,主要采用經(jīng)Tempera等[12]修改的綜合診斷方法,其中,AV評分為必備指標(biāo),需綜合陰道分泌物中乳酸桿菌分級、白細(xì)胞數(shù)量以及中毒白細(xì)胞所占比例、背景菌落數(shù)等指標(biāo)。需氧性細(xì)菌所致陰道炎也不容忽視。

    [1]朱園園,沈佐君,萬士林,等.一種檢測細(xì)菌性陰道病方法的建立及臨床評價[J].檢驗醫(yī)學(xué),2009,24(5):350-354.

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    [4]胡正強(qiáng),岳新愛,彭 英,等.兩種唾液酸酶試劑診斷細(xì)菌性陰道病的性能評價[J].中國婦幼保健,2014,29(36):6074-6076.

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    R711.73

    B

    1003—6350(2015)22—3412—02

    2014-11-28)

    10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1236

    郝家明。E-mail:haojm@sina.com

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