星形細(xì)胞上調(diào)基因-1在膀胱癌中的表達(dá)及意義

李生華，鐘騰飛，張 鑫，熊天華，劉 柳，蔣一強(qiáng)，陳 罡

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科1、病理科2，廣西 南寧530021)

星形細(xì)胞上調(diào)基因-1在膀胱癌中的表達(dá)及意義

李生華1，鐘騰飛2，張 鑫2，熊天華2，劉 柳2，蔣一強(qiáng)2，陳 罡2

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科1、病理科2，廣西 南寧530021)

目的探討星形細(xì)胞上調(diào)基因-1(AEG-1)在膀胱癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測224例膀胱癌組織及56例正常膀胱組織中AEG-1表達(dá)的差異及其與相關(guān)臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。結(jié)果AEG-1在膀胱癌組織中的表達(dá)顯著高于正常膀胱組織(P＜0.01)；男性膀胱癌患者AEG-1的表達(dá)明顯高于女性膀胱癌患者(P＜0.05)；膀胱癌高級別組中的表達(dá)顯著高于低級別組(P＜0.01)；膀胱癌Ⅲ、Ⅳ期者顯著高于Ⅰ、Ⅱ期者(P＜0.01)；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者AEG-1的表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P＜0.01)；腫瘤直徑≥3cm組AEG-1的表達(dá)顯著高于腫瘤直徑＜3cm組(P＜0.01)。膀胱癌復(fù)發(fā)組AEG-1的表達(dá)顯著高于無復(fù)發(fā)組(P＜0.01)。結(jié)論AEG-1的高表達(dá)與膀胱癌的發(fā)生與演變密切相關(guān)。

星形細(xì)胞上調(diào)基因-1；膀胱癌；免疫組化

星形細(xì)胞上調(diào)基因-1(Astrocyte elevated gene-1，AEG-1)位于人類染色體8q22.1，最早發(fā)現(xiàn)于人類免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的人胚胎初級星形細(xì)胞。AEG-1又稱MTDH或Lyric，該基因與腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移及血管生成相關(guān)，并能介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的自噬和化療耐藥[1]。多項研究表明，AEG-1可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的異常增殖[2-5]，很有可能成為一個新的腫瘤分子靶向治療的新靶點(diǎn)。但目前AEG-1在膀胱癌中的研究較少[6-7]，AEG-1在膀胱癌發(fā)生和演變過程中的作用尚未完全明確。故本研究在224例不同組織亞型膀胱癌組織中，檢測AEG-1的表達(dá)，探討AEG-1在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2004年1月至2006年10月膀胱癌標(biāo)本224例，包括膀胱尿路上皮癌166例，膀胱腺癌42例，膀胱鱗癌16例，構(gòu)建組織芯片。其中男性191例、女性33例；年齡27～96歲，平均(61.6±13.7)歲；低級別135例、高級別89例；TNMⅠ～Ⅱ期67例、Ⅲ～Ⅳ期157例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者209例、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例。采用電話方式進(jìn)行隨訪，隨訪時間6～40個月，106例隨訪至2008年9月。至隨防結(jié)束，無復(fù)發(fā)者81例、復(fù)發(fā)腫瘤者25例。另選取本院2009年1月至2013年2月經(jīng)尸體解剖獲取的正常膀胱組織共56例作為對照研究。本研究得到本院倫理委員會批準(zhǔn)，入選患者對該研究有知情同意權(quán)。

1.2 方法 鼠抗人AEG-1抗體購自Cell Signaling公司，使用免疫組織化學(xué)SuperVision兩步法(北京中杉公司)進(jìn)行染色，均照試劑盒說明書操作[7]。AEG-1主要定位于細(xì)胞胞漿中，且集中于核周[5]。由兩名病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片和雙評分半定量積分法進(jìn)行評分[8]：觀察并計算10個高倍鏡視野中的平均腫瘤細(xì)胞染色情況，其中靶細(xì)胞陽性率＜25%為0分，25%～＜50%為1分，51%～75%為2分，＞75%為3分；顯色程度按切片中細(xì)胞顯色有無及染色深淺記分，細(xì)胞無染色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩者相加，＜2分記為陰性，≥2分均視為陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，AEG-1在癌與非癌組織中的表達(dá)及在其余臨床病理參數(shù)中的表達(dá)差異均采用χ2檢驗，AEG-1在不同病理類型膀胱癌中表達(dá)差異采用非參數(shù)Kruskal-WallisH檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AEG-1在膀胱癌和正常膀胱中的表達(dá)差異 膀胱癌組織中AEG-1的陽性率為52.7%(118/224)，顯著高于正常膀胱組織的21.4%(12/56)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=-4.187，P＜0.01)，見表1，圖1。

表1 AEG-1表達(dá)與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系

圖1 AEG-1蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)情況

2.2 AEG-1表達(dá)與膀胱癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 AEG-1在男性組、膀胱癌高級別組、Ⅲ期、Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、腫瘤直徑≥3cm組、復(fù)發(fā)組的表達(dá)顯著高于各自對應(yīng)組(均P＜0.05)。AEG-1的表達(dá)在年齡、病理類型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤數(shù)量、生長方式分組中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。Spearman相關(guān)性分析顯示，AEG-1的表達(dá)與組織、分級、病理類型、浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、直徑、復(fù)發(fā)明顯相關(guān)(均P＜0.05)。

3 討 論

AEG-1基因位于染色體8q22.1，全長3611 bp，包含11個內(nèi)含子和12個外顯子。已有研究證實該染色體區(qū)域與多種惡性腫瘤的發(fā)生高度相關(guān)[1]。AEG-1作為Ras/PI3K/Akt/c-Myc信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的分子，可通過調(diào)控PI3K/Akt、NF-κB、Wnt/β-catenin、MAPK等多條信號途徑參與正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移和血管生成等惡性生物學(xué)行為，并能介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的自噬和化療耐藥，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[1，4，9]。膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中具有高度侵襲性和轉(zhuǎn)移能力的惡性腫瘤。膀胱癌包括尿路上皮癌、腺癌和鱗癌，其中最常見的是尿路上皮癌。其發(fā)生與發(fā)展是一個多步驟、多階段的過程，并受眾多因素的影響，如遺傳、基因多態(tài)性和染色體異常等[10-12]。至今為止，僅有兩項研究報道了AEG-1與膀胱癌的關(guān)系。Zhou等[7]在小樣本(n=60)膀胱尿路上皮癌中發(fā)現(xiàn)39例AEG-1為陽性，陽性率為65%(39/60)，明顯高于正常膀胱組織，但膀胱腺癌、鱗癌患者未被納入。Yang等[6]則僅在非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌中發(fā)現(xiàn)了AEG-1的高表達(dá)，陽性率為45%(46/102)，肌層浸潤者及腺癌、鱗癌也均未被納入。本課題使用更大的樣本量(n=224)及多種膀胱癌亞型(尿路上皮癌、腺癌、鱗癌)進(jìn)一步研究AEG-1的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AEG-1在總體膀胱癌中呈高表達(dá)，且AEG-1在不同病理類型膀胱癌中的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。其中在尿路上皮癌的表達(dá)率為48.8%，略低于Zhou等[7]的結(jié)果(65%)，但仍顯著高于非癌組織。同時，膀胱腺癌及鱗癌的AEG-1表達(dá)率也均高于非癌組織，提示AEG-1可能在各種亞型的膀胱癌發(fā)生中均發(fā)揮一定的作用。

既往對AEG-1與膀胱癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系研究結(jié)果也存在爭議。Yang等[6]發(fā)現(xiàn)在非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌AEG-1的陽性率為45%。而在本研究中，AEG-1在非肌層浸潤性膀胱癌中的表達(dá)僅為29.9%，而肌層浸潤膀胱癌中的表達(dá)為62.4%。兩項研究陽性率的差異可能與樣本大小及來源有關(guān)。Zhou等[7]研究發(fā)現(xiàn)AEG-1的表達(dá)與膀胱癌病理分級密切相關(guān)，低級別膀胱癌中AEG-1的陽性率高于高級別膀胱癌(P＜0.001)。同樣，Yang等[6]也發(fā)現(xiàn)在非肌層浸潤性膀胱癌中AEG-1的陽性率在低級別膀胱癌中較高(P=0.0002)。本課題中，高級別膀胱癌AEG-1的陽性率為68.5%，明顯高于低級別膀胱癌(42.2%，P＜0.001)，與之前的兩者的報道一致。Zhou等[7]研究的研究顯示AEG-1的表達(dá)與膀胱癌的臨床分期、腫瘤多發(fā)性和復(fù)發(fā)相關(guān)，本課題的結(jié)果也同樣驗證了AEG-1的表達(dá)與臨床分期、腫瘤大小和復(fù)發(fā)相關(guān)。此外，我們還發(fā)現(xiàn)在膀胱癌中AEG-1的表達(dá)與性別和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移同樣相關(guān)。本課題中男女樣本例數(shù)差別較大，故AEG-1與患者性別的關(guān)系有待進(jìn)一步大樣本的研究。以上結(jié)果提示AEG-1在膀胱癌的演變的過程中扮演著重要角色，并隨著膀胱癌病程的進(jìn)展，AEG-1的表達(dá)呈上升趨勢，且高表達(dá)AEG-1與不良預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，AEG-1與膀胱癌的發(fā)生與進(jìn)展密切相關(guān)，有望成為膀胱癌診斷、判斷預(yù)后及分子靶向治療的新指標(biāo)。

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Expression and clinical significance of AEG-1 in bladder cancer tissues.

LI Sheng-hua1,ZHONG Teng-fei2,ZHANG Xin2,XIONG Tian-hua2,LIU Liu2,JIANG Yi-qiang2,CHEN Gang2.Department of Urinary Surgery1,Department of Pathology2,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning530021,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of AEG-1 in bladder cancer tissues.MethodsImmunohistochemistry(IHC)was used to detect the expression of AEG-1 in224 cases of bladder cancer tissues and56 cases of normal bladder tissues.The relationships between AEG-1 expression and clinical pathological parameters were also analyzed.ResultsThe expression of AEG-1 was significantly higher in bladder cancer tissues than in normal bladder tissues(P＜0.01),in male patients than female patients(P＜0.05),in higher levels of bladder cancer than lower levels of bladder cancer(P＜0.01),in bladder cancer tissues of stageⅢandⅣthan bladder cancer tissues of stageⅠandⅡ(P＜0.01),in patients with lymphatic metastasis than those without lymphatic metastasis(P＜0.001),in patients with tumor diameter≥3cm than those with tumor diameter＜3cm(P＜0.01),as well as in patients with recurrence than those without recurrence(P＜0.001).ConclusionOverexpression ofAEG-1 is closely correlated with tumorigenesis and development of bladder cancer.

Astrocyte elevated gene-1;Bladder cancer;Immunohistochemistry

R737.14

A

1003—6350（2015）20—2973—03

2015-04-24)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.20.1083

廣西大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃(編號：201410598004)；廣西大學(xué)生未來學(xué)術(shù)之星課題(編號：WLXSZX1550)

陳 罡。E-mail：chen_gang_triones@163.com