腦復(fù)康軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

馬曉玲，白夢(mèng)娜，譚 睿

（西南交通大學(xué)，四川 成都 610031）

腦復(fù)康軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

馬曉玲，白夢(mèng)娜，譚 睿

（西南交通大學(xué)，四川 成都 610031）

目的 建立腦復(fù)康軟膠囊的定性鑒別方法和葛根素的含量測(cè)定方法。方法 采用薄層色譜法對(duì)腦復(fù)康軟膠囊進(jìn)行薄層色譜（TLC）鑒別。采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定軟膠囊中葛根素含量，色譜柱為Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 βm），流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)，檢測(cè)波長為250 nm，流速為1.0 mL／min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為10 βL，理論板數(shù)按葛根素計(jì)算應(yīng)不低于2 500。結(jié)果 TLC法重復(fù)性良好。葛根素進(jìn)樣質(zhì)量濃度在84.4～422.0 βg／mL范圍與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均回收率為98.36%，RSD為0.64%（n=6）。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

腦復(fù)康軟膠囊；葛根素；薄層色譜法；高效液相色譜法

腦復(fù)康軟膠囊是四川康達(dá)藥業(yè)研制的現(xiàn)代復(fù)方制劑，由野葛、丹參、紅花等中藥材組方，具有解痙止痛、增強(qiáng)腦及冠狀動(dòng)脈血流量等功效，臨床主要用于高血壓頭痛、頭暈、頸項(xiàng)疼痛、冠心病、心絞痛、神經(jīng)性頭痛、早期突發(fā)性耳聾等疾病。腦復(fù)康軟膠囊主要活性成分為葛根素、大豆苷元等。本研究中采用薄層色譜（TLC）法對(duì)方中丹參、紅花、葛根進(jìn)行了定性鑒別，并應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定葛根素的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了可行的方法[1-2]?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

HP1100型高效液相色譜儀（美國惠普公司）。原兒茶醛對(duì)照品、紅花對(duì)照藥材、葛根素對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院）；腦復(fù)康軟膠囊（研制品，批號(hào)為130501，130502，130503）；陰性樣品（按處方工藝制得缺各組分的樣品）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別（TLC法）

丹參[3-4]：取本品10片，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL溶解后，置分液漏斗中，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另稱取陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取供試品及陰性對(duì)照品溶液10 μL、對(duì)照品溶液1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(4∶0.5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾（見圖1 A）。

紅花[5]：取本品 5片，研細(xì)，加醋酸乙酯 20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解后，置分液漏斗中，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，加氨水振搖提取2次，每次20 mL，棄去氨水層，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制成紅花對(duì)照藥材溶液。另稱取陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯(5∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同的玫瑰紅色斑點(diǎn)，陰性無干擾（見圖1 B）。

葛根：稱取軟膠囊內(nèi)容物約1 g，加水10 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取3次，每次10 mL，合并萃取液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状?0 mL溶解，作為供試品溶液。取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另稱取陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。照TLC法2010年版[《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾（見圖1 C）。

圖1 薄層色譜圖

2.2 葛根素含量測(cè)定

2.2.1色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；檢測(cè)波長：250 nm；流速：1.0 mL／min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按葛根素計(jì)算應(yīng)不低于2 500[6-8]。在此條件下，葛根素的峰保留時(shí)間約為12 min，與其相鄰峰的分離度大于2，以葛根素峰計(jì)算理論板數(shù)約7 000，其他成分對(duì)葛根素的含量測(cè)定沒有影響，陰性樣品對(duì)測(cè)定無干擾。色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取葛根素對(duì)照品21.10 mg，加甲醇制成每1 mL含4.22 mg葛根素的溶液，作為對(duì)照品溶液。稱取軟膠囊內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，加甲醇稀釋并定容至 10 mL容量瓶中，吸取0.5 mL溶液，加甲醇稀釋至10 mL容量瓶中，用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。稱取陰性樣品0.5 g，置10 mL容量瓶中，同法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取葛根素對(duì)照品溶液，稀釋成質(zhì)量濃度分別為84.4，126.6，168.8，211.0，253.2，316.5，422.0 μg／mL，取10 μL進(jìn)樣，按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y= 16.156 X-108.04，r=0.999 3（n=7）。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣質(zhì)量濃度在84.4～422.0 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為253.2 μg／mL的葛根素對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果葛根素峰面積積分值的 RSD為0.56%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品(批號(hào)為140520)5份，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果平均含量為 2.86 mg／g，RSD= 1.11%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：同一供試品溶液，分別于制備后 0，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果葛根素峰面積積分值的 RSD為1.099%（n=6），表明供試品溶液在4 h內(nèi)較穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為140520）0.5 g，加入葛根素對(duì)照品溶液適量，揮干，按供試品溶液制備方法及擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 葛根素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取5批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為 140520，140521，140522，140803，140806的樣品中葛根素含量分別為 2.68，2.77，2.56，3.01，2.98 mg／g。

3 討論

3.1 定性鑒別中薄層板與展開劑的選擇

方中葛根的薄層色譜鑒別，曾用硅膠H-羧甲基纖維素鈉（CMCNa）作薄層板，醋酸乙酯-丙酮-水（6.5∶4.5∶1.2）作展開劑，鑒別效果不理想，各斑點(diǎn)與葛根素主斑點(diǎn)未能分開。經(jīng)摸索并查閱相關(guān)文獻(xiàn)后，采用氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）進(jìn)行展開，在樣品色譜斑點(diǎn)中，葛根素和大豆苷元斑點(diǎn)均能與其他斑點(diǎn)達(dá)到很好分離，且斑點(diǎn)圓整，無拖尾現(xiàn)象。因此本試驗(yàn)中所建立的TLC試驗(yàn)方法可靠，可用于腦復(fù)康軟膠囊中主要藥效成分的鑒別檢查。

3.2 含量測(cè)定指標(biāo)的選擇

葛根為腦復(fù)康軟膠囊制劑的處方主藥，葛根素為葛根中的主要有效成分，因此測(cè)定葛根素含量可作為樣品質(zhì)量控制的一個(gè)重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中采用HPLC法測(cè)定腦復(fù)康軟膠囊中葛根素含量，降低流動(dòng)相的pH，加入磷酸，可得到較好的分離效果。測(cè)定葛根素含量，在一定程度上能有效監(jiān)控該藥品的內(nèi)在質(zhì)量，有助于保證臨床用藥的療效與安全。方法學(xué)考察結(jié)果表明，所建立的HPLC法操作簡單、快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于腦復(fù)康軟膠囊的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：59-60.

[2]苗明三，李振國.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生

出版社，2000：694.

Study on the Quality Standard of Naofukang Soft Capsule

Ma Xiaoling,Bai Mengna,Tan Rui
（College of Life Science and Engineering,Southwest Jiaotong University,Chengdu,Sichuan,China 610031）

Objective To establish a method for identification of Naofukang Soft Capsule and determination of Purerain in Naofukang Soft Capsule.M ethods Radix Puerarin in Naofukang Soft Capsule was qualitatively identified by thin layer chromatographic method.A HPLC method was also developed for the determination of Puerarin in Naofukang Soft Capsule.The chromatographic column was Agilent C18Colume(250 mm×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was methanol-water-phosphoric acid(47∶53∶0.2);the detection wavelength was 250 nm,the flow rate was 1.0 mL／min;the column temperature was room temperature,the injection volume was 10 μL.Number of theoretical plates calculated puerarin should not be less than 2 500.Results Reproductively was good by TLC.Puerarin in the range of 84.4-422.0 μg／mL showed a good linear relationship with the peak area,and the average recovery was 98.36%,RSD was 0.64% (n=6).Conclusion The method is simple,accurate,reliable,and can be used as quality control method for this preparation.

Naofukang Soft Capsule;puerarin;TLC;HPLC

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2015)23－0094－03

馬曉玲（1990-），女，四川蒼溪人，碩士研究生，研究方向?yàn)樗帉W(xué)，(電子信箱)981397098＠qq.com；譚睿，博士研究生，教授，研究方向?yàn)樗帉W(xué)，本文通訊作者，(電話)028-87601764。

2015－10－12)

β國家科技重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”（川藏高原道地藥材冬蟲夏草化學(xué)成分、品質(zhì)和資源保護(hù)可持續(xù)利用關(guān)鍵技術(shù)研究），項(xiàng)目編號(hào)：VQ21SS1113Y14004。