• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    氣相色譜—質譜法測定肉制品中的9種揮發(fā)性N—亞硝胺類物質

    2015-04-08 12:37何淑娟等
    肉類研究 2015年1期
    關鍵詞:固相萃取亞硝胺肉制品

    何淑娟等

    摘 要:研究建立一種適用于肉制品中9 種揮發(fā)性N-亞硝胺含量的氣質聯(lián)用快速檢測方法。實驗優(yōu)化提取溶劑和色譜柱對提取和分離檢測影響的條件,同時考察4 種固相萃取單柱(酸性氧化鋁、C18、活性炭、PSA)和1種雙填料的混合固相萃取柱(PSA-C18)的凈化效果。結果表明:本檢測方法的線性系數(shù)均可達到0.999 2以上;線性范圍為0~10 μg/mL;重現(xiàn)性良好,相對標準方差均≤3.2%;回收率為85%~98%;檢測限分別為N-亞硝基二甲基胺

    1.0 μg/kg、N-亞硝基甲基乙基胺2.1 μg/kg、N-亞硝基二丁基胺0.8 μg/kg;其他均為0.5 μg/kg。該方法能夠滿足測定肉及肉制品中N-亞硝胺的殘留含量的需要。

    關鍵詞:氣質聯(lián)用;肉制品;N-亞硝胺;固相萃取

    Determination of Nine N-Nitrosocompounds in Meat Products by Gas Chromatograph-Mass Spectrometry

    HE Shujuan, ZHAO Limin, LI Qiang, CAI Lipeng, ZHANG Yan*

    (Hebei Institute of Food Quality Supervision Research, Shijiazhuang 050091, China)

    Abstract: This research has established a rapid detection method for nine volatile N-nitrosamines in meat and meat products by using gas chromatograph-mass spectrometry (GC-MS). In this experiment, we investigated the effect of extraction solvent type and chromatographic conditions on the extraction and separation of the target compounds. Meanwhile, comparison of solid-phase extraction (SPE) cartridges packed with acidic alumina, C18, activated carbon or PSA, or both C18 and PSA was carried out for the purification of the N-nitrosamines. Results showed that the linear range of the proposed method was

    0?10 μg/mL with correlation coefficients more than 0.999 2. Good reproducibility was observed with relative standard deviation (RSD) not exceeding 3.2% and the mean recoveries were in the range of 85%?98%. The detection limits for N-nitrosodimethyl amine (NDMA), N-nitrosomethyl ethyl amine (NMEA), N-nitro sodibutyl amine (NDBA) and six other N-nitrosamines were 1.0, 2.1, 0.8 and 0.5 mg/kg, respectively. This method can meet the requirement for the determination of N-nitrosamine residues in meat and meat products.

    Key words: gas chromatograph-mass spectrometry (GC-MS); meat products; N-nitrosamines; solid phase extraction

    中圖分類號:TS254 文獻標志碼:A 文章編號:1001-8123(2015)01-0027-04

    doi: 10.7506/rlyj1001-8123-201501007

    亞硝酸鹽在肉制品加工中起到很好的作用,不僅可以抑制梭狀肉毒桿菌的生長繁殖和產生毒素,對典型腌肉風味的產生起重要作用,還具有抗氧化的效果。但是,亞硝酸鹽在腌肉中可以轉化為亞硝酸,很容易和次級胺類物質反應產生致癌性物N-亞硝胺類化合物。N-亞硝胺物質一般結構為R2(R1)N—N=O,食品中N-亞硝胺主要在食品加工和貯藏過程中形成,常見于腌制、煙熏、焙烤等制品中。N-亞硝胺類化合物不僅具有致畸性和致突變性,而且對神經和腎臟有害[1-8]。

    目前用于檢測食品中的亞硝胺的前處理方法有很多,包括水蒸氣蒸餾法[9-10]、低溫真空蒸餾法[11]、溶劑液液萃取法[12]及固相萃取法[13]等。由于肉類食品的基質復雜性和食品中亞硝胺逐漸下降的趨勢[14-15],因此合適的前處理提取方法對準確檢測亞硝胺至關重要。

    目前熟肉制品中N-亞硝胺物質的檢測方法主要有氣相色譜法[16]、液相色譜法[17]、氣相色譜-串聯(lián)質譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質譜法、氣相色譜-熱能分析法等[18-21]。在

    GB/T 5009.26—2003《食品中N-亞硝胺類的測定方法》中氣相色譜-熱能分析樣品前處理復雜、耗時長、儀器方法成本高,實際可操作性不強。而氣相色譜-質譜聯(lián)用法(gas chromatograph-mass spectrometer,GC-MS)是最常見的檢測N-亞硝胺物質的方法。本研究選擇9種常見的揮發(fā)性亞硝胺,利用GC-MS的高效分離能力和高靈敏性建立了一種適用于肉制品的快速、準確的檢測方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    熟制豬肉制品為市售。

    N-亞硝基二甲基胺(NDMA)(純度>99.9%) 美國Sigma公司;N-亞硝基甲基乙基胺(NMEA)、N-亞硝基二乙基胺(NDEA)、N-亞硝基吡咯烷(NDEA)、N-亞硝基嗎啉(NDEA)、N-亞硝基二丙基胺(NDPA)、N-亞硝基哌啶(NPIP)、N-亞硝基二丁基胺(NDBA)、N-亞硝基二苯基(NDPhA)(純度

    均>98%) 德國Dr.Ehrenstorfer公司;二氯甲烷(色

    譜純) 美國J.T.Baker公司。

    1.2 儀器與設備

    Agilent 7890A/MS 5973i氣相色譜-質譜聯(lián)用儀(配

    有電子轟擊離子源(EI)) 美國Agilent 公司;HGB550高速組織搗碎機 美國Waring公司;K15高速冷凍離心機 美國Sigma公司;Visiprep DL固相萃取

    裝置 美國Supelco 公司;KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲波儀器有限公司;數(shù)顯型漩渦混合器 美國Talboys公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品制備

    將熟肉制品切成小塊,在組織搗碎機粉碎成勻漿或粉末狀均勻樣品。準確稱取粉碎的熟肉樣品20.0 g,置于50 mL具塞離心管中,加入30 mL二氯甲烷,渦旋振蕩1 min,超聲提取20 min,4 ℃條件下8 000 r/min離心10 min;吸取有機相層以20 mL二氯甲烷重復提取1次,合并2 次萃取相;將合并液放入100 mL雞心瓶中,于40 ℃水浴中旋轉蒸發(fā)至2 mL左右,待凈化。

    1.3.2 樣品凈化

    用10 mL二氯甲烷活化固相萃取柱,將2 mL待凈化樣品轉移至固相萃取柱,并用10 mL二氯甲烷分3 次洗脫固相萃取柱,收集所有洗脫液,于35 ℃雞心瓶中旋轉濃縮至近干,用1.0 mL二氯甲烷復溶,過0.22 μm有機膜,備用。

    1.3.3 色譜條件

    色譜柱:DB-WAXETR(30 m×0.25 mm,0.25 ?m);升溫程序:40 ℃保持4 min;以5 ℃/min升至100 ℃,再以20 ℃/min升至250 ℃,保持2 min;進樣口溫度:250 ℃;載氣(N2)流速1.5 mL/min;隔墊吹掃流量:3 mL/min;不分流進樣;進樣量:1.0 ?L。

    1.3.4 質譜條件

    電子轟擊離子源(EI);電子能量70 eV;離子源溫度230 ℃;四極桿溫度150 ℃;接口溫度240 ℃;離子掃描模式。上述條件下,9 種N-亞硝胺類化合物的保留時間定性及定量離子如表1所示。

    2 結果與分析

    2.1 色譜柱的優(yōu)化

    考察不同極性的氣相色譜柱非極性柱HP-5MS(30 m×0.25 mm,0.25 ?m)、中等極性柱DB-1701(30 m×0.25 mm,0.25 ?m)、極性柱DB-WAXETR(30 m×0.25 mm,0.25 ?m)對9 種待測N-亞硝胺類化合物分離的影響。結果表明,選用非極性柱HP-5MS時,

    N-亞硝胺二甲基胺的色譜峰受溶劑峰影響大,且有色譜峰展寬的現(xiàn)象,峰形有拖尾現(xiàn)象;選用中等極性柱DB-1701時,仍有峰展寬的現(xiàn)象,而選用強極性柱DB-WAXETR時,獲得的色譜峰峰形對稱,分離度好。這是因為亞硝胺分子質量小,具有強極性和強揮發(fā)性,當使用強極性柱DB-WAXETR時有利于9 種物質很好的分離。因此,本實驗選用DB-WAXETR作為色譜柱。

    2.2 柱溫升溫速率的優(yōu)化

    N-亞硝胺類化合物的分子質量小、沸點低、出峰時間快,因此需要優(yōu)化柱溫的升溫速率,以獲得最佳的分離效果。選擇柱溫的起始溫度為40 ℃,分別比較了升溫速率為5 ℃/min和10 ℃/min時的分離效果,結果顯示,當初期升溫速率為10 ℃/min時,溶劑峰影響較大,且

    N-亞硝基吡咯烷、N-亞硝基嗎啉、N-亞硝基二丙基胺的色譜峰不能很好地分開;當升溫速率為5 ℃/min時,9 種物質能夠很好地分開,所以選擇升溫速率為5 ℃/min。當柱溫升至100 ℃時,較難分離的N-亞硝基二丙基胺已經出峰,此時將升溫速率提高至20 ℃/min,當柱溫升高到250 ℃時,待測物均已出峰。在上述優(yōu)化條件下,對9 種N-亞硝胺混合標準溶液進行分析,得到標準品的總離子流圖見圖1。

    從左至右依此為N-亞硝基二甲基胺、N-亞硝基甲基乙基胺、N-亞硝基二乙基胺、N-亞硝基吡咯烷、N-亞硝基嗎啉N-亞硝基二丙基胺、N-亞硝基哌啶、N-亞硝基二丁基胺、N-亞硝基二苯基胺。

    2.3 樣品前處理條件的選擇

    2.3.1 樣品提取方法的優(yōu)化

    水蒸氣蒸餾法操作繁瑣,耗時長,適用性不強,且操作溫度高,易使被測物質亞硝胺損失。趙華[22]、吳燕燕[23]等采用超聲振蕩提取法提取水產品中的N-亞硝胺,樣品添加回收率均在70%~105%,因此本研究采用超聲振蕩提取法對樣品進行前處理。

    本研究中9 種N-亞硝胺的極性不同,因此分別選用不同極性的二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、正己烷、甲醇作為提取溶劑,結果表明,以二氯甲烷作為提取溶劑時目標物的回收率最高,正己烷次之。這是因為正己烷和二氯甲烷為親油性,乙酸乙酯為親油性同時有一定的親水性,丙酮、甲醇為親水性,對于含油脂較多的熟肉制品樣品,正己烷和二氯甲烷提取效率相對較高,但是正己烷的親油性太強,對水溶性的N-亞硝基二甲基胺溶解性較差,有峰形展寬的現(xiàn)象,綜合考慮選擇二氯甲烷作為提取溶劑,經過超聲法提取樣品中的N-亞硝胺。

    2.3.2 萃取溶劑體積的優(yōu)化

    在其他實驗條件相同的情況下,對20.00 g空白樣品加入固定質量濃度的混合N-亞硝胺標準溶液進行加標實驗,比較二氯甲烷用量20、30、40、50、60 mL 5個水平的萃取效果。由圖2可知,二氯甲烷體積20~40 mL時,二氯甲烷用量與色譜圖對應的峰響應強度成正比;用量40~60 mL時平均峰響應強度基本不變。因此選用40 mL為萃取體積。

    2.3.3 固相萃取凈化柱的優(yōu)化

    乙二胺-N-丙基硅烷(primary secondary amine,PSA)為一種弱陰離子交換吸附劑,主要去除脂肪酸、油脂和極性色素,ODS-C18(C18)具有疏水作用,可去除油脂和非極性極強的干擾物,目前這兩種填料被廣泛應用于食品中農藥殘留檢測。王秀元等[24]采用活性炭柱凈化腌制水產品,對亞硝胺的回收率達87%,楊寧等[25]采用氧化鋁和C18混合小柱凈化腌菜中9種亞硝胺,回收率在75.7%~116.1%。

    本實驗對5種固相萃取柱(PSA柱、PSA-C18混合柱、C18柱、活性炭柱、酸性氧化鋁柱)的凈化效果進行了比較。通過樣品加標實驗,比較每種萃取柱分別對9 種N-亞硝胺的回收率以確定最佳的固相萃取柱。由表2可知,PSA和C18混合柱的凈化效果最好,回收率可達83.43%~94.92%。這是因為肉制品中含有大量的油脂和脂肪酸,PSA和C18可以很好地去除油脂和脂肪酸,因此本實驗采用PSA和C18混合柱對樣品進行凈化。

    2.4 標準曲線和靈敏度

    分別配制9 種N-亞硝胺系列質量濃度的混合標準溶液進行GC-MS測定,每個水平重復測定3 次,采用外標法進行定量,以定量離子的峰面積(Y)為縱坐標,以其質量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸,得到的9 種N-亞硝胺的線性方程見表3。該方法重現(xiàn)性好,靈敏度高,相關系數(shù)達0.999 2以上。

    2.5 回收率及精密度

    3 結 論

    本研究所建立的氣相色譜-質譜聯(lián)用法快速測定肉制品中9 種揮發(fā)性N-亞硝胺含量的分析方法,通過比較不同提取方法和不同固相萃取小柱凈化效果的影響,優(yōu)化了實驗分析條件。較GB/T 5009.26—2003前處理簡單快速,特異性強,重現(xiàn)性好,大幅縮短檢測時間,適用于高通量分析檢測N-亞硝胺類化合物,是一種易于操作,靈敏度高的測定方法。

    參考文獻:

    [1] LIJINSKY W. N-Nitroso compounds in the diet[J]. Mutation Research, 1999, 43(1): 129-138.

    [2] 楊華, 馬儷珍, 王瑞, 等. 肉制品中N-亞硝胺及亞硝酸鹽測定及其相關性分析[J]. 保鮮與加工, 2006, 35(4): 21-23.

    [3] 丁紅梅, 陳彬, 楊興龍, 等. 氣質聯(lián)用法測定生食水產品中揮發(fā)性

    N-亞硝胺[J]. 食品與機械, 2010, 26(6): 54-69.

    [4] 劉法佳, 吳燕燕, 李來好, 等. 降低腌制食品中亞硝酸鹽含量的研究進展[J]. 廣東農業(yè)科學, 2011, 38(1): 165-167.

    [5] 魏法山, 徐幸蓮, 周光宏. 揮發(fā)性N-亞硝基化合物的分析方法[J]. 食品科學, 2008, 29(7): 479-483.

    [6] 王瑞, 馬儷珍, 方長發(fā). 毛細管氣相色譜法對冷卻豬肉中揮發(fā)性

    N-亞硝胺類化合物含量的測定分析[J]. 天津農學院學報, 2006, 13(1): 10-13.

    [7] 馬麗珍, 張建斌, 孟培培. 食品中亞硝胺類化合物的危害及控制研究進展[J]. 保險與加工, 2012, 12(2): 1-4.

    [8] 方長發(fā), 馬儷珍, 劉會平, 等. 固相微萃取技術及其在N-亞硝胺分析中的應用[J]. 肉類研究, 2008, 22(4): 49-50.

    [9] DRABIK-MARKIEWICZ G, DEJAEGHER B, de MEY E, et al. Influence of putrescine, cadaverine, spermidine or spermine on the formation of N-nitrosamine in heated cured pork meat[J]. Food Chemistry, 2011, 4: 1539-1545.

    [10] WEI F, XU X, ZHOU G, et al. Irradiated Chinese Rugao ham: changes in volatile N-nitrosamine, biogenic amine and residual nitrite during ripening and post-ripening[J]. Meat Science, 2009, 3: 451-455.

    [11] RAOUL S, GREMAUD E, BIAUDET H, et al. Rapid solid-phase extraction method for the detection of volatile nitrosamines in food[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1997, 12: 4706-4713.

    [12] CAMPILLO N, VI?AS P, MART?NEZ-CASTILLO N, et al. Determination of volatile nitrosamines in meat products by microwave-assisted extraction and dispersive liquid-liquid microextraction coupled to gas chromatography-mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2011, 14: 1815-1821.

    [13] YURCHENKO S, M?LDER U. The occurrence of volatile N-nitrosamines in Estonian meat products[J]. Food Chemistry, 2007, 4: 1713-1721.

    [14] GL?RIA M B A, BARBOUR J F, SCANLAN R A. Volatile nitrosamines in fried bacon[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1997, 5: 1816-1818.

    [15] 楊榮靜, 戴雪, 衛(wèi)碧文, 等. 固相萃取-氣相色譜-質譜聯(lián)用法檢測嬰兒奶嘴中11種N-亞硝胺物質的遷移量[J]. 環(huán)境化學, 2012(8): 1283-1286.

    [16] 王瑞, 馬儷珍, 方長發(fā), 等. 氣相色譜法測定熟肉制品中揮發(fā)性N-亞硝胺類化合物[J]. 中國食品學報, 2007, 7(2): 124-127.

    [17] 陳忠林, 徐冰冰, 齊虹, 等. 高效液相色譜測定水中痕量亞硝基二甲胺[J]. 中國給水排水, 2007, 23(8): 84-87.

    [18] 李玲, 徐心蓮, 周光宏. 氣質聯(lián)用檢測傳統(tǒng)中式香腸中的九種揮發(fā)性亞硝胺[J]. 食品科學, 2012, 33(26): 158-164.

    [19] 胡麗芳, 尹德鳳, 周瑤敏, 等. 氣質聯(lián)用法測定咸魚中N-二甲基亞硝胺含量[J]. 江西農業(yè)科學, 2009, 21(9): 135-136.

    [20] 羅茜, 王東紅, 王炳一, 等. 超高效液相色串聯(lián)質譜快速測定飲用水中9種N-亞硝胺的新方法[J]. 中國科學: 化學, 2011, 41(1): 83-90.

    [21] 張秋菊, 郭祖鵬, 李明珠, 等. 頂空固相微萃取-氣相色譜-質譜法測定7 種亞硝胺類化合物[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2009, 19(6): 1234-1236.

    [22] 趙華, 王秀元, 王萍亞, 等. 氣相色譜-質譜聯(lián)用法測定腌制水產品中的揮發(fā)性N-亞硝胺類化合物[J]. 色譜, 2013(3): 223-227.

    [23] 吳燕燕, 劉法佳, 李來好, 等. GC-MS檢測咸魚中N-亞硝胺的條件優(yōu)化[J]. 南方水產科學, 2012(4): 16-22.

    [24] 王秀元, 趙華, 蔣玲波, 等. GC-MS 法測定腌制水產品中3 種N-亞硝胺含量[J]. 浙江海洋學院學報: 自然科學版, 2012(6): 521-526.

    [25] 楊寧, 陳穎慧, 鄧莉, 等. 雙填料固相萃取-高效液相色譜/質譜法同時檢測腌菜中9種N-亞硝胺[J]. 分析化學, 2013(7): 1044-1049.

    猜你喜歡
    固相萃取亞硝胺肉制品
    生姜對亞硝胺合成及體內代謝活化的抑制作用
    蘇丹將擴大牲畜和肉制品出口市場
    藤茶抑制N-亞硝胺的生成及誘導人前列腺癌PC-3細胞凋亡作用
    離子液體—基質固相分散—超聲霧化—固相萃取結合高效液相色譜法檢測人參中三嗪類除草劑
    GC-O風味分析及R-index法在發(fā)酵肉制品排序中的應用
    黑糯玉米色素清除亞硝酸鹽及阻斷亞硝胺合成的研究
    肉制品致腐微生物溯源技術構建
    調理鴨胸肉制品滾揉腌制工藝優(yōu)化
    不同產地和品種白肋煙煙草特有亞硝胺與前體物關系
    精品一区在线观看国产| 久久久久国产精品人妻一区二区| 波多野结衣av一区二区av| 免费在线观看完整版高清| 男女免费视频国产| 一级片'在线观看视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日本黄色日本黄色录像| av福利片在线| 青青草视频在线视频观看| 一二三四在线观看免费中文在| 黄色 视频免费看| 亚洲精品一二三| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲av成人精品一二三区| 日本爱情动作片www.在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 丝袜喷水一区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 成人国产麻豆网| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲精品国产av蜜桃| 18禁国产床啪视频网站| 久久99精品国语久久久| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产一级毛片在线| 伦理电影大哥的女人| 一区在线观看完整版| 在线观看国产h片| 久久久久精品性色| 免费看不卡的av| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲国产欧美在线一区| 最近2019中文字幕mv第一页| 18+在线观看网站| 伊人亚洲综合成人网| 一级片'在线观看视频| 亚洲四区av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 男女免费视频国产| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲精品一区蜜桃| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成人免费观看mmmm| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品亚洲成国产av| 亚洲欧美精品自产自拍| √禁漫天堂资源中文www| 在线 av 中文字幕| 精品一品国产午夜福利视频| 18在线观看网站| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产成人精品久久久久久| 亚洲av成人精品一二三区| 国产1区2区3区精品| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产成人精品福利久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 午夜免费鲁丝| a级毛片黄视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 男女无遮挡免费网站观看| 国产成人精品久久久久久| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 大话2 男鬼变身卡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 97人妻天天添夜夜摸| 久热这里只有精品99| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 丰满乱子伦码专区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美最新免费一区二区三区| av网站在线播放免费| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 欧美97在线视频| 男女下面插进去视频免费观看| 一边亲一边摸免费视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 黄片小视频在线播放| 中文欧美无线码| 我的亚洲天堂| 97在线人人人人妻| 精品国产乱码久久久久久男人| 十分钟在线观看高清视频www| 人妻人人澡人人爽人人| 免费少妇av软件| 中文天堂在线官网| 天堂8中文在线网| 国产一级毛片在线| 免费观看在线日韩| 亚洲内射少妇av| 亚洲精品国产av成人精品| 9热在线视频观看99| 亚洲美女视频黄频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 大片电影免费在线观看免费| 中文字幕精品免费在线观看视频| 女性被躁到高潮视频| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 蜜桃国产av成人99| 午夜福利,免费看| 亚洲人成77777在线视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| av在线播放精品| av女优亚洲男人天堂| 久久久精品区二区三区| 日日啪夜夜爽| 国产毛片在线视频| 男女下面插进去视频免费观看| 26uuu在线亚洲综合色| 搡老乐熟女国产| 高清欧美精品videossex| 亚洲av综合色区一区| 成人午夜精彩视频在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 超色免费av| 午夜激情久久久久久久| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲第一av免费看| 最近中文字幕2019免费版| 制服诱惑二区| 咕卡用的链子| 久久亚洲国产成人精品v| 看非洲黑人一级黄片| 丝袜美足系列| 成人午夜精彩视频在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 99热国产这里只有精品6| 9191精品国产免费久久| 蜜桃在线观看..| 婷婷色综合大香蕉| 五月天丁香电影| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 春色校园在线视频观看| 少妇的逼水好多| 国产精品无大码| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲国产看品久久| 少妇被粗大猛烈的视频| av女优亚洲男人天堂| 欧美人与善性xxx| 亚洲av成人精品一二三区| 在现免费观看毛片| 国产在线视频一区二区| 亚洲内射少妇av| 亚洲精品中文字幕在线视频| av.在线天堂| 男女高潮啪啪啪动态图| 91成人精品电影| 伊人亚洲综合成人网| 天堂8中文在线网| 国产深夜福利视频在线观看| 在线看a的网站| 国产精品一区二区在线不卡| 久久久国产欧美日韩av| 国产成人精品久久二区二区91 | 国产白丝娇喘喷水9色精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 午夜av观看不卡| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 亚洲国产最新在线播放| 欧美 日韩 精品 国产| 宅男免费午夜| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲av.av天堂| 91在线精品国自产拍蜜月| 男女啪啪激烈高潮av片| 一区二区三区精品91| √禁漫天堂资源中文www| 日本欧美国产在线视频| 五月天丁香电影| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 深夜精品福利| 国产成人免费观看mmmm| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 天天影视国产精品| 看非洲黑人一级黄片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久av网站| 99热网站在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美最新免费一区二区三区| 观看美女的网站| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲国产最新在线播放| 欧美日本中文国产一区发布| 男女边吃奶边做爰视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品.久久久| 国产精品免费大片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 欧美 日韩 精品 国产| 十分钟在线观看高清视频www| 国产成人精品婷婷| 午夜日韩欧美国产| 国产精品蜜桃在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久午夜福利片| 中文字幕制服av| 国产精品不卡视频一区二区| 永久免费av网站大全| 成人国产av品久久久| 视频在线观看一区二区三区| 大码成人一级视频| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩电影二区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲视频免费观看视频| 国产男人的电影天堂91| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 美女大奶头黄色视频| 久久 成人 亚洲| 久久久精品免费免费高清| 最黄视频免费看| 黄色视频在线播放观看不卡| 在线天堂最新版资源| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 老汉色∧v一级毛片| 成年美女黄网站色视频大全免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲视频免费观看视频| 久久久国产一区二区| 国产爽快片一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产一区二区三区综合在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| av在线老鸭窝| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 少妇 在线观看| 国产精品av久久久久免费| 青青草视频在线视频观看| 日韩视频在线欧美| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 人妻人人澡人人爽人人| 女人久久www免费人成看片| www.熟女人妻精品国产| 久久狼人影院| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久99蜜桃精品久久| 老司机影院成人| av有码第一页| av天堂久久9| 国产又爽黄色视频| 七月丁香在线播放| av线在线观看网站| 一区在线观看完整版| 国产精品免费视频内射| 欧美精品一区二区大全| 日韩免费高清中文字幕av| 成年人免费黄色播放视频| www.精华液| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 婷婷色综合大香蕉| 国产一级毛片在线| 亚洲美女黄色视频免费看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 色94色欧美一区二区| 国产成人av激情在线播放| av不卡在线播放| 久久青草综合色| 一级毛片我不卡| 青春草视频在线免费观看| 日韩一本色道免费dvd| 久久综合国产亚洲精品| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 99热网站在线观看| 午夜老司机福利剧场| 欧美在线黄色| 午夜日本视频在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 18禁观看日本| 久久女婷五月综合色啪小说| 日韩大片免费观看网站| 丝袜脚勾引网站| 国产不卡av网站在线观看| 久久99精品国语久久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品蜜桃在线观看| 大陆偷拍与自拍| 国产一区亚洲一区在线观看| 丝袜脚勾引网站| 亚洲第一青青草原| 人人妻人人澡人人看| 美女福利国产在线| 久久精品国产亚洲av天美| 免费在线观看完整版高清| 国产精品蜜桃在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲av中文av极速乱| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲国产日韩一区二区| 午夜福利视频精品| 欧美人与善性xxx| 亚洲精品国产色婷婷电影| 免费黄频网站在线观看国产| 99热网站在线观看| 丁香六月天网| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产在线一区二区三区精| 日本色播在线视频| 久久久精品区二区三区| 日本av免费视频播放| 少妇熟女欧美另类| 国产黄色免费在线视频| 午夜激情av网站| 亚洲av日韩在线播放| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 黑丝袜美女国产一区| 在线观看免费高清a一片| 国产精品二区激情视频| 综合色丁香网| 亚洲国产日韩一区二区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 99国产精品免费福利视频| 精品一区在线观看国产| 国产午夜精品一二区理论片| 多毛熟女@视频| 美女午夜性视频免费| 中国三级夫妇交换| 欧美av亚洲av综合av国产av | 久久午夜综合久久蜜桃| 尾随美女入室| 校园人妻丝袜中文字幕| www.av在线官网国产| 我的亚洲天堂| 在线天堂中文资源库| 国产精品女同一区二区软件| 午夜福利,免费看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 欧美精品国产亚洲| 久久精品久久久久久久性| 亚洲人成网站在线观看播放| 丁香六月天网| 欧美激情高清一区二区三区 | 夫妻午夜视频| 久久婷婷青草| 精品一区在线观看国产| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品女同一区二区软件| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 黑人猛操日本美女一级片| 一区福利在线观看| 欧美另类一区| 熟女av电影| 国产精品女同一区二区软件| 国产一区二区三区综合在线观看| 高清不卡的av网站| 欧美最新免费一区二区三区| 一本大道久久a久久精品| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 婷婷色综合www| 中文字幕人妻丝袜制服| a级毛片黄视频| 中文天堂在线官网| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲人成电影观看| 另类精品久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 韩国精品一区二区三区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 777米奇影视久久| 男女无遮挡免费网站观看| 国产激情久久老熟女| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 制服人妻中文乱码| 亚洲国产日韩一区二区| 久久精品国产综合久久久| 国产有黄有色有爽视频| 不卡av一区二区三区| 在线看a的网站| www日本在线高清视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 在线 av 中文字幕| 最新的欧美精品一区二区| 性色av一级| 一区在线观看完整版| 久久久久久久国产电影| 精品久久久久久电影网| 欧美在线黄色| 国产精品一区二区在线不卡| 日本黄色日本黄色录像| 精品国产国语对白av| 最近中文字幕2019免费版| 99久久精品国产国产毛片| 久久99一区二区三区| 九色亚洲精品在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲综合色惰| 成年动漫av网址| 欧美另类一区| 日本黄色日本黄色录像| 丰满少妇做爰视频| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲精品第二区| 国产精品无大码| 18禁观看日本| 国产一区亚洲一区在线观看| 另类亚洲欧美激情| 观看美女的网站| videosex国产| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产成人精品无人区| 少妇人妻精品综合一区二区| 波多野结衣一区麻豆| 欧美成人午夜免费资源| xxx大片免费视频| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产精品一区三区| videosex国产| 女性被躁到高潮视频| 午夜日本视频在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 中国三级夫妇交换| 另类亚洲欧美激情| 高清不卡的av网站| 久久人妻熟女aⅴ| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| videos熟女内射| 一边亲一边摸免费视频| 深夜精品福利| 咕卡用的链子| 一级,二级,三级黄色视频| 超碰97精品在线观看| 亚洲美女视频黄频| 久久狼人影院| 日本av手机在线免费观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 美女国产高潮福利片在线看| 一区二区三区精品91| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 在线观看三级黄色| 午夜免费男女啪啪视频观看| 一二三四中文在线观看免费高清| av.在线天堂| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲熟女精品中文字幕| 日本91视频免费播放| 日韩av免费高清视频| 深夜精品福利| 一区二区三区乱码不卡18| 精品福利永久在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 精品国产一区二区久久| 午夜福利乱码中文字幕| 91在线精品国自产拍蜜月| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 在现免费观看毛片| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲伊人色综图| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 成人免费观看视频高清| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 一级毛片我不卡| 久久国产精品大桥未久av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产男女内射视频| av在线app专区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久精品国产a三级三级三级| 777米奇影视久久| 熟女av电影| 亚洲成人手机| 精品人妻偷拍中文字幕| 婷婷成人精品国产| 色吧在线观看| 亚洲,欧美精品.| 午夜日韩欧美国产| 男女边摸边吃奶| 中文字幕亚洲精品专区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 18禁国产床啪视频网站| 99九九在线精品视频| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久久久人人人人人| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲国产精品999| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 男人舔女人的私密视频| 午夜激情久久久久久久| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 两性夫妻黄色片| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 飞空精品影院首页| 亚洲av.av天堂| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 9191精品国产免费久久| 最新的欧美精品一区二区| 老熟女久久久| 国产亚洲最大av| 国产精品一区二区在线观看99| 水蜜桃什么品种好| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 在线观看免费视频网站a站| 91在线精品国自产拍蜜月| 大话2 男鬼变身卡| 欧美 日韩 精品 国产| 国产成人精品婷婷| 岛国毛片在线播放| 欧美日韩av久久| 最新中文字幕久久久久| 男人添女人高潮全过程视频| 日日爽夜夜爽网站| 久久久久久久久久久久大奶| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲av电影在线进入| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲成人手机| 2022亚洲国产成人精品| 免费黄频网站在线观看国产| 我的亚洲天堂| 男女下面插进去视频免费观看| 中文字幕制服av| 亚洲欧洲日产国产| 夫妻性生交免费视频一级片| 99热全是精品| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美人与善性xxx| 国产精品熟女久久久久浪| 免费观看a级毛片全部| 国产xxxxx性猛交| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产成人精品久久二区二区91 | 婷婷成人精品国产| 2018国产大陆天天弄谢| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲av.av天堂| 国产毛片在线视频| www日本在线高清视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 大片免费播放器 马上看| 交换朋友夫妻互换小说| 三级国产精品片| 黄片无遮挡物在线观看| 午夜福利视频精品| 自线自在国产av| 亚洲国产av新网站| 亚洲第一av免费看| 久久久精品94久久精品| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲国产最新在线播放| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久久久久久久久久久大奶| 丰满饥渴人妻一区二区三| 91aial.com中文字幕在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲伊人久久精品综合| 国产野战对白在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲国产看品久久| 欧美精品av麻豆av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 精品国产乱码久久久久久男人| 色婷婷久久久亚洲欧美| 男女啪啪激烈高潮av片| 丝袜在线中文字幕| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产野战对白在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久韩国三级中文字幕| videosex国产| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 香蕉精品网在线| 桃花免费在线播放| h视频一区二区三区| 亚洲情色 制服丝袜| 免费高清在线观看日韩| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 香蕉国产在线看| 91成人精品电影| 国产亚洲最大av| 国产精品.久久久| 女性被躁到高潮视频| 国产黄频视频在线观看| videos熟女内射| 成人漫画全彩无遮挡| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产 精品1| 欧美日韩精品成人综合77777| 日日啪夜夜爽| 久久久久国产网址| 性色avwww在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲欧美一区二区三区久久|