平哮合劑對(duì)過(guò)敏性哮喘豚鼠模型血清和肺泡灌洗液IL－5及IL－10水平的影響

張樂(lè)平 沈 健

(江蘇省中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210029)

過(guò)敏性哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病，其中白細(xì)胞介素5(IL－5)和白細(xì)胞介素10(IL－10)是參與調(diào)節(jié)哮喘氣道炎癥反應(yīng)的重要細(xì)胞因子［1］。平哮合劑是江蘇省中醫(yī)院院內(nèi)自制劑，臨床研究證實(shí)其治療支氣管哮喘療效肯定［2］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察平哮合劑對(duì)過(guò)敏性哮喘豚鼠模型血清和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中 IL－5和 IL－10水平的影響，以探討其治療哮喘的可能機(jī)制，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 豚鼠，60只，體質(zhì)量160～180 g，雌雄各半，由南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào) SCXK(蘇)2002－0004。

1.1.2 藥品及試劑 平哮合劑，由江蘇省中醫(yī)院制劑部提供(蘇藥制字Z04000538，批號(hào)150511，經(jīng)濃縮后每mL藥液含生藥4 g);卵清蛋白，武漢生命技術(shù)有限公司進(jìn)口分裝(Sigma);醋酸地塞米松片(天津天藥藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020686);戊巴比妥鈉，中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司。IL－5和IL－10酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒，上海史瑞可生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器 BIO－RAD 3550酶標(biāo)儀，Microplate Reader，美國(guó) Bio－Rad公司;S－888F型超聲霧化器，中外合資南京道芬電子有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型制備及分組 取豚鼠50只，按文獻(xiàn)［3］方法造模，每只豚鼠腹腔注射10%卵清蛋白溶液(卵清蛋白10 g加入0.9%氯化鈉注射液100 mL中進(jìn)行配比)1 mL，2周后進(jìn)行引喘。取1%卵清蛋白溶液(卵清蛋白1 g加入0.9%氯化鈉注射液100 mL中進(jìn)行配比)20 mL注入超聲霧化器，將豚鼠放入霧化箱內(nèi)，開動(dòng)霧化器，當(dāng)豚鼠出現(xiàn)喘促、咳嗽等呼吸道痙攣梗阻癥狀時(shí)，表示過(guò)敏性哮喘豚鼠造模成功。取造模成功的豚鼠40只，隨機(jī)分為4組，即模型對(duì)照組、平哮合劑1組、平哮合劑2組及地塞米松組，每組各10只。另選進(jìn)行造模的10只豚鼠為空白對(duì)照組。

1.2.2 給藥方法 模型對(duì)照組及空白對(duì)照組均予0.9%氯化鈉注射液5 mL/kg灌胃，平哮合劑1組、平哮合劑 2組分別予平哮合劑 5.0、

2.5 mL/kg灌胃給藥，地塞米松組予醋酸地塞米松0.1 mg/kg灌胃給藥。均每日1次，連續(xù)7 d。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法 檢測(cè)豚鼠血清及BALF中IL－5及IL－10含量。方法:末次給藥后1 h，5組豚鼠予1%戊巴比妥鈉3 mL/kg腹腔注射進(jìn)行麻醉，開胸充分暴露胸腔，結(jié)扎右主支氣管，氣管插管直至左主支氣管，固定，用注射器緩慢注入0.9%氯化鈉注射液5 mL，回抽3次，回收率＞80%，收集獲得BALF，EP管分裝，3 000 r/min離心10 min，取上清液。收集獲得BALF后，每只豚鼠頸動(dòng)脈插管取血，血液置37℃水浴凝固后，3 000 r/min離心10 min，取血清。用(ELISA)法測(cè)定血清及BALF中IL－5及IL－10水平，具體測(cè)定方法步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組樣本比較采用單因素方差分析(ANOVA)，并采用最小顯著差異法(LSD)行兩兩比較。

2 結(jié)果

2.1 5組豚鼠血清IL－5及IL－10水平比較見表1。

表1 5組豚鼠血清IL－5及IL－10水平比較 pg/mL，±s

表1 5組豚鼠血清IL－5及IL－10水平比較 pg/mL，±s

與空白對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別 n IL－5 IL－10空白對(duì)照組10 77.22±15.21 54.28±10.92模型對(duì)照組 10 114.24±24.56＊＊ 34.59±8.27＊＊平哮合劑1組 10 91.63±19.41△△ 46.33±9.37△△平哮合劑2組 10 105.13±20.42△ 41.75±9.11△地塞米松組 10 88.58±18.29△△ 50.85±11.19△△

由表1可見，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清IL－5水平顯著升高(P＜0.01)，IL－10水平顯著降低(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較，平哮合劑1組、平哮合劑2組及地塞米松組血清IL－5水平顯著降低(P＜0.01，P＜0.05)，IL－10水平顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)。平哮合劑1組、平哮合劑2組及地塞米松組血清IL－5及IL－10水平兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 5組豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平比較 見表2。

表2 5組豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平比較pg/mL，±s

表2 5組豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平比較pg/mL，±s

與空白對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別 n IL－5 IL－10空白對(duì)照組10 136.63±23.41 85.98±17.49模型對(duì)照組 10 186.40±35.80＊＊ 51.30±9.73＊＊平哮合劑1組 10 156.19±30.59△△ 73.38±17.23△△平哮合劑2組 10 171.36±28.93△ 66.54±14.81△地塞米松組 10 153.34±26.57△△ 75.68±15.87△△

由表2可見，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組豚鼠BALF中IL－5水平顯著升高(P＜0.01)，IL－10水平顯著降低(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較，平哮合劑1組、平哮合劑2組及地塞米松組豚鼠BALF中IL－5水平顯著降低(P＜0.01，P＜0.05)，IL－10水平顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)。平哮合劑1組、平哮合劑2組及地塞米松組豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)是哮喘炎癥反應(yīng)的重要細(xì)胞，在哮喘患者和哮喘動(dòng)物模型氣管壁、痰液和BALF 中都可找到大量 EOS［4－5］。IL－5 是輔助性T細(xì)胞(Th)2細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子，在EOS的成熟、活化、存活及向氣道的聚集方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。IL－5亦可刺激EOS釋放組胺、白三烯、前列腺素以及其他細(xì)胞因子，引起氣道炎癥［6－7］。IL－10是一種細(xì)胞因子合成抑制因子，主要由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌，可抑制多種炎癥前因子的轉(zhuǎn)錄。IL－10可通過(guò)抑制 IL－5，或直接作用于EOS凋亡，從而抑制 EOS，對(duì)抗氣道炎癥［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)敏性哮喘模型組豚鼠血清和BALF中IL－5水平與空白對(duì)照組相比均顯著升高(P＜0.01)，IL－10水平顯著降低(P＜0.01)，進(jìn)一步證明了IL－5和IL－10在哮喘中的作用。

哮喘屬中醫(yī)學(xué)哮病、喘證范疇，其基本病機(jī)為風(fēng)痰痹阻，夾瘀夾熱，痰隨氣升，氣因痰阻，相互搏結(jié)，壅塞氣道，肺氣郁滯，失于宣降。治療上應(yīng)重視祛風(fēng)化痰、清熱宣閉、氣血同調(diào)，著眼于胸陽(yáng)痹阻，開泄氣機(jī)［2］。平哮合劑是根據(jù)哮喘的病機(jī)特點(diǎn)，優(yōu)選經(jīng)現(xiàn)代藥理證實(shí)具有抗炎平喘、解痙化痰作用的中藥射干、杏仁、麻黃、瓜蔞、薤白、桃仁、僵蠶、黃芩、地龍、炙甘草等共同組合而成。方中麻黃宣肺散寒，射干開結(jié)消痰，并為君藥。杏仁降利肺氣，與麻黃相伍，一宣一降，以恢復(fù)肺之宣降，加強(qiáng)宣肺平喘之功;桃仁止咳平喘，瓜蔞滌痰散結(jié)，開胸通痹，薤白通陽(yáng)散結(jié)，化痰散寒，能散胸中凝滯之陰寒，化上焦結(jié)聚之痰濁，宣胸中陽(yáng)氣以寬胸，共為臣藥。僵蠶化痰散結(jié)，黃芩瀉火除煩止渴，地龍瀉熱平喘，共為佐藥。炙甘草調(diào)和諸藥，為使藥。諸藥相合，共奏祛風(fēng)化痰、開肺泄?jié)?、降逆平喘之功效。前期研究證實(shí)，平哮合劑具有明確的平喘、抗炎作用［9］，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，平哮合劑能顯著降低哮喘豚鼠模型血清和BALF中IL－5水平，升高IL－10水平。雖然本研究中平哮合劑1組與平哮合劑2組豚鼠血清和BALF中IL－5、IL－10水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但平哮合劑1組(高劑量組)呈現(xiàn)出改善效果更好的趨勢(shì)，可能存在一定的量效關(guān)系，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

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