王不留行催乳作用研究進展

李蘭蘭 虎亞光 魏秀娟 賈新燁 譚建偉

甘肅省婦幼保健院，甘肅 蘭州730050

王不留行（又名不留行，王不流行，王母牛，大麥牛，金剪刀草，金盞銀臺，麥藍子）為石竹科植物麥藍菜Vaccaria segetalis（Neck）Garcke的干燥成熟種子。廣泛分布于亞洲、歐洲等地，我國除華南外，全國各地區(qū)都有分布。王不留行呈球形，直徑約2mm，表面黑色，少數(shù)紅棕色，略有光澤，有細密顆粒狀突起，一側(cè)有一凹陷的縱溝，質(zhì)硬，胚乳白色，胚彎曲成環(huán)，子葉2，氣微，味微澀、苦。炒王不留行呈類球形爆花狀，表面白色，質(zhì)松脆。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，言其“主金瘡，止血逐痛。出刺，除風(fēng)痹內(nèi)寒?！蓖醪涣粜行晕犊啵?。歸肝、胃經(jīng)。具有活血通經(jīng)，下乳消腫，利尿通淋的作用；化學(xué)成分多樣，至少含有63種不同的化合物，包括三萜皂苷、環(huán)肽、黃酮類等化合物［1-2］。

1 對乳汁分泌量的影響

《本草綱目》言曰“王不留行能走血分，乃陽明沖任之藥，俗有穿山甲、王不留行，婦人服了乳長流?！痹趥鹘y(tǒng)應(yīng)用中，王不留行具有顯著催乳作用。給健康泌乳期荷斯坦奶牛每日添加19g王不留行水提取物，與對照組相比，在飼養(yǎng)22d、30d時，產(chǎn)奶量提高了8.44%和13.95%；增加每日王不留行添加量至38g，與對照組相比，在飼養(yǎng)22d、30d時，產(chǎn)奶量提高了7.14%和11.3%［3］，提示王不留行可能對奶牛產(chǎn)奶量的影響有“封頂”效應(yīng)，適宜的量效關(guān)系還需進一步研究。Wistar大鼠灌服王不留行提取物200mg/（kg·d），連續(xù)14天，每天泌乳量從（1.818±0.027）g/pup增加至（10.182±0.187）g/pup［4］。王不留行水提取物（1g/mL）可增加兔泌乳量，且呈一定的量效關(guān)系，連續(xù)灌服5天后各組泌乳量均顯著增加［5］。單味王不留行動物臨床應(yīng)用的研究較多，對哺乳期動物的泌乳量有明顯的促進作用，但也存在“封頂”效應(yīng)。王不留行用于產(chǎn)婦產(chǎn)后缺乳多配伍當(dāng)歸、通草、路路通等使用，其用量一般為10～60g［6］。

2 促進泌乳的作用機制

乳汁的分泌與乳腺上皮細胞的數(shù)量、體積、活力以及細胞間信號傳導(dǎo)密切相關(guān)，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)包括泌乳素介導(dǎo)的Jak2/Stat5細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；雌激素介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；過氧化物酶體增殖物激活受體等。王不留行水提取液可顯著提高奶牛乳腺上皮細胞活力以及增殖能力，促進絲裂原活化蛋白激酶和cyclin D1的表達；促進乳蛋白合成信號因子p-STAT5、p100、GAS、S6K1、AKT1、GARs、p-mTOR、泌乳素受體以及雌激素受體的表達，且效果優(yōu)于雌激素和泌乳素；王不留行激活或增強與雌激素相同的靶蛋白，提示王不留行具有和雌激素、泌乳素相似的作用，并在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平調(diào)節(jié)泌乳基因表達［7-8］。泌乳素與其受體結(jié)合，激活Jak2激酶，導(dǎo)致Stat5的磷酸化，激活cyclin D1，啟動cyclin D1的轉(zhuǎn)錄［9］，而且通過改變信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的活性來調(diào)控cyclin D1在細胞核的募集，進而調(diào)節(jié)乳腺發(fā)育。Stat5還可能在泌乳期通過協(xié)調(diào)脂肪酸和蛋白質(zhì)合成進而決定乳汁的組成。雌激素可以激活雌激素受體，促進導(dǎo)管的伸長；活化的雌激素受體激活PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使3-磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）激活A(yù)kt1并經(jīng)過一系列的級聯(lián)反映激活p-mTOR，最終激活其下游的S6K1促進蛋白的合成；活化的雌激素受體還可激活Src/Ras/ERK信號通路，進一步激活MAPK從而調(diào)節(jié)奶牛乳腺上皮細胞增殖；活化的雌激素受體還可能通過一系列級聯(lián)反應(yīng)進而激活Jak2/Stat5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

王不留行化學(xué)成分多樣，包括三萜皂苷類、環(huán)肽類、黃酮類、香豆素類等化合物，其中環(huán)肽類成分具有雌激素樣作用［10-11］。王不留行黃酮苷類成分能夠促進小鼠乳腺上皮細胞中cyclin D1的表達，促進細胞增殖，并通過激活Jak2-stat5信號通路β-酪蛋白基因的表達；但皂苷類成分對小鼠乳腺上皮細胞的增殖有抑制作用，這兩種成分如何協(xié)同發(fā)揮作用有待進一步研究；香豆素類成分對小鼠乳腺上皮細胞的增殖和β-酪蛋白的表達均無明顯作用［12］。王不留行催乳作用主要與黃酮類、環(huán)肽類及皂苷類成分等相關(guān)，通過促進絲裂原活化蛋白激酶和cyclin D1、乳蛋白合成信號因子、泌乳素受體以及雌激素受體的表達促進泌乳。

3 對乳汁成分的影響

乳蛋白、乳糖和乳脂是構(gòu)成乳汁的主要成分，普通牛乳中乳蛋白、乳脂肪和乳糖的含量分別為3.2%、3.9%和4.6%。乳蛋白主要由酪蛋白和乳清蛋白組成，β-乳球蛋白是乳清蛋白的主要蛋白，一定程度上反映乳腺上皮細胞的泌乳能力。乳蛋白的來源有兩個：一是由乳腺從頭合成，如酪蛋白、β-乳球蛋白等，這一部分蛋白是乳腺所特有的；二是來自血液中的蛋白質(zhì)，主要有免疫蛋白和血漿蛋白等。乳糖含量可體現(xiàn)乳腺上皮細胞泌乳量的高低。通過考察乳汁乳蛋白、乳糖和乳脂的改變可評價王不留行對乳汁成分的影響。高學(xué)軍等［13］研究顯示，連續(xù)注射王不留行提取單體鄰苯二甲酸二丁酯，5d后奶牛的泌乳能力提高，其中泌乳量增加了17.82%，乳脂率增加了6.39%，乳糖增加了6.97%，乳蛋白和非脂固形物變化不明顯。李楠等［14］研究顯示，王不留行2mg/mL（生藥濃度）時，β-酪蛋白的表達和乳糖分泌量達最高值。王不留行增乳活性單體成分鄰苯二甲酸二丁酯對可顯著提高β-酪蛋白的表達以及乳糖的分泌［2］。郭玉新［3］研究顯示，與對照組相（n=8）比，試驗組［低劑量組（n=8）：5.7g/（d·頭），中劑量組（n=8）19g/（d·頭），高劑量組（n=8）38g/（d·頭）］乳汁乳蛋白和乳脂率差異不顯著，各個試驗組乳糖含量隨著時間延長均有提高，但差異不顯著。王芳芳等［15］研究了王不留行黃酮苷對哺乳母豬乳汁成分的影響，結(jié)果提示，飼糧添加王不留行黃酮苷對初乳和常乳中乳脂肪、乳糖及乳蛋白含量無顯著影響，初乳中乳脂肪含量高于對照組，但初乳和常乳中胰島素樣生長因子Ⅰ含量高于對照組。在6～36h的觀察時間內(nèi)，王不留行活性單體鄰苯二甲酸二丁酯組乳腺上皮細胞中乳糖含量顯著高于對照組，隨著藥物作用時間的延長，乳糖表達量在48h后較對照組不顯著［16］。目前王不留行對乳汁成分的影響研究結(jié)果并不一致，可能與王不留行的提取部位不同有關(guān)。單體鄰苯二甲酸二丁酯在用藥初期可提高乳糖的分泌量，用藥2天后乳糖恢復(fù)至用藥前；水提取液可提高乳汁β-酪蛋白的表達和乳糖分泌量；黃酮苷初乳和常乳的主要成分無顯著影響。另外，已有研究的入組數(shù)量均較少，王不留行各提取部位對乳汁成分的影響還需進一步的大樣本研究。

4 對血液指標(biāo)的影響

有研究發(fā)現(xiàn)［3，17］，王不留行提取物對奶牛血液生化指標(biāo)的影響不顯著；與對照組相比，低劑量組泌乳素和生長激素水平有所提高，中劑量組和高劑量組泌乳素和生長激素水平均顯著提高。大鼠灌服王不留行100mg/kg提取液兩周后血清、乳腺和腦垂體中泌乳素含量與對照組之間存在顯著差異［4］。王不留行黃酮苷（0.2g/kg）連續(xù)飼喂哺乳母豬21d，與對照組相比，第1、10天血清雌激素含量無明顯差異，第21天血清雌激素含量高于對照組，第1、21天血清中生長激素含量高于對照組［15］。王不留行對血液生化指標(biāo)無顯著影響，中、高劑量時可顯著提高泌乳素和生長激素水平，對雌激素的影響可能與用藥療程相關(guān)。

谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是機體細胞內(nèi)清除自由基的主要內(nèi)源抗氧化物酶。丙二醛（MDA）是各種氧自由基損傷機體的重要指標(biāo)。王不留行黃酮苷可顯著升高血清中GSH-Px活性，降低MDA含量［15］，這可能與王不留行中含有多羥基酚類有關(guān)，其可與自由基結(jié)合，抑制自由基的產(chǎn)生，終止自由基連鎖反應(yīng)。奶牛日糧中添加王不留行提取物有提高泌乳中期奶牛血清中IgA水平的趨勢，對IgG和IgM無影響［3］。

綜上所述，王不留行可顯著增加泌乳量，潛在機制與其促進乳腺上皮細胞增殖、促進乳腺上皮細胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)重塑、促進乳腺上皮細胞吸收細胞外游離氨基酸有關(guān)，可顯著影響血清激素水平，不影響血液生化指標(biāo)。另外，王不留行有助于機體自由基的清除，提高IgA水平。不同提取部位對乳汁成分的影響有待進一步研究。