梅毒檢測(cè)假陽性的探討

甘紅輝　胡靜　李文橋

摘要：目的 探討現(xiàn)有條件下梅毒檢測(cè)方法的選擇，以減少和降低假陽性。方法 應(yīng)用RPR、ELISA，TPPA法檢測(cè)。結(jié)果 在54例RPR陰性、ELISA陽性的樣本中，TPPA法有49例陽性（91.2%），5例陰性（8.8%）。結(jié)論 可以用ELISA法作為常規(guī)檢測(cè)篩選方法，對(duì)陽性樣本必須作TPPA、RPR法檢測(cè)，TPPA法陽性時(shí)方可報(bào)告。

關(guān)鍵詞：梅毒；RPR；ELISA；TPPA；假陽性

近年來，我國(guó)梅毒患病率有上升趨勢(shì)。梅毒是一種性傳播疾病，它可以侵犯皮膚、黏膜、心臟血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等多種組織器官，嚴(yán)重影響人們的健康，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜，容易漏診和誤診。梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查方法較多，早期使用的康，華氏反應(yīng)已于1991年由衛(wèi)生部頒文廢止。梅毒螺旋體不能進(jìn)行體外培養(yǎng)，所以梅毒螺旋體檢查兔感染試驗(yàn)（RIT）仍是最特異最準(zhǔn)確的診斷方法，該法能證實(shí)活的梅毒螺旋體存在，是檢測(cè)梅毒螺旋體常用的標(biāo)準(zhǔn)方法.但靈敏度低，不能作為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)方法。目前常用的有梅毒血清學(xué)試驗(yàn)包括：非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)，如快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）、不加熱血清反應(yīng)素玻片試驗(yàn)（USR）試驗(yàn)等，此為篩查試驗(yàn)，梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)，如梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）、熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）試驗(yàn)等，為證實(shí)試驗(yàn)。我院于1997年將梅毒的血清學(xué)檢查作為患者輸血前的必檢項(xiàng)目。由于梅毒血清反應(yīng)存在假陽性（包括技術(shù)性假陽性和生物學(xué)假陽性），目前使用的檢測(cè)方法有RPR、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）和TPPA。我們對(duì)這3種血清學(xué)試驗(yàn)做了比較試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 2011年1月～12月全市皮膚性病科患者及孕產(chǎn)婦RPR檢測(cè)陰性而ELISA檢測(cè)陽性樣本54例。其中男性17例，女性37例，年齡22～82歲。

1.2試劑 上海科華RPR試劑盒、珠海麗珠ELISA試劑盒、日本富士株式會(huì)社TPPA試劑盒。

1.3儀器 Thermo well wash4 mk3酶標(biāo)儀、梅毒旋轉(zhuǎn)振蕩器、恒溫水浴箱、顯微鏡。

1.4非梅毒螺旋體檢測(cè)方法，見表1。

2討論

54例梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果，見表2。

梅毒的診斷，除了臨床表現(xiàn)外，在很大程度上，取決于實(shí)驗(yàn)室的檢查結(jié)果。

國(guó)家衛(wèi)生部提出的《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》中對(duì)梅毒血清學(xué)檢查方法及臨床適應(yīng)證作出了相應(yīng)的要求。梅毒螺旋體檢查是最特異最準(zhǔn)確的診斷方法，但因其靈敏度太低而未被臨床所常用。在正常情況下，人體感染梅毒螺旋體后大約2 w即可檢測(cè)出特異性抗體Iu。非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)（如RPR試驗(yàn)）中，有時(shí)由于血清抗體水平過高，抗原抗體比例不合適，而出現(xiàn)弱陽性、不典型或陰性的結(jié)果，但臨床上又有典型的二期梅毒體征，將此血清稀釋后再做血清學(xué)試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，稱為"前帶現(xiàn)象"。RPR法為非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)，對(duì)一期梅毒、三期梅毒和治療后梅毒檢測(cè)的不同步性，往往也可出現(xiàn)假陰性，造成漏檢。如患者感染不足2～3 w，RPR試驗(yàn)可為陰性。梅毒治療后的患者RPR也可為陰性反應(yīng)，故可以用于臨床的療效觀察。ELISA法為梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)，它采用梅毒螺旋體特異性抗原包被微孔板，用以檢測(cè)患者血清中的梅毒抗體，對(duì)各期梅毒均有較高的敏感性和特異性[2]，尤其是早期梅毒的檢出率較高。梅毒感染人體后，其產(chǎn)生的抗體可以長(zhǎng)期存在，故ELISA陽性不能確定感染期，也不能用于臨床的療效觀察。由于ELISA實(shí)驗(yàn)影響因素較多，所以本法也存在一定的假陽性，表2的數(shù)據(jù)表明約為8.8%，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一 致[3-4]。TPPA與TPHA均是梅毒特異性血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，敏感度為99%，高于ELISA法。國(guó)外普遍用TPPA，TPHA做為篩查試劑，在國(guó)內(nèi)常被用作梅毒的確證試驗(yàn)。但與ELISA法一樣，同樣也不能用于臨床的療效觀察。

目前梅毒的發(fā)病有增加趨勢(shì)，梅毒檢查日漸增多。由于梅毒血清反應(yīng)本身存在假陽性，而患者的自我保護(hù)意識(shí)也逐步增強(qiáng)，極易引發(fā)醫(yī)療糾紛。我們先后遇有20余例梅毒檢測(cè)假陽性樣本（經(jīng)送外院、上級(jí)單位檢測(cè)證實(shí)為假陽性）。其中1例是采用了美國(guó)進(jìn)口的金標(biāo)試紙條檢測(cè)（該試紙條在說明中指出與TPHA比較，特異度100%，敏感度99%以上），結(jié)果為陽性，但其他的試驗(yàn)（RPR、ELISA、TPPA）結(jié)果都是陰性。通過這個(gè)事例，我們對(duì)多種梅毒的檢測(cè)方法進(jìn)行選擇比較。目前我們的做法是：常規(guī)檢測(cè)方法采用ELISA法，對(duì)陽性的樣本再作TPPA和RPR檢測(cè)，必須ELISA法陽性和TPPA法都陽性的結(jié)果我們才發(fā)陽性報(bào)告（由于感染的病程不同，RPR法有可能陰性）。湖北省疾控中心對(duì)80例USR、TPPA陽性的樣本用蛋白印跡（WB）法進(jìn)行了檢測(cè)。對(duì)于梅毒檢測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)的特異度為100%，敏感度為93%。WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)：1個(gè)條帶為可疑，需結(jié)合結(jié)合臨床分析。2個(gè)條帶為陽性。結(jié)果在80例樣本中有3例陰性，13例可疑，而這16例年齡在65～86歲。這項(xiàng)研究資料表明，TPPA對(duì)老年人的檢測(cè)結(jié)果有一定程度的假陽性。我院自2007年下半年以來，也在臨床擇其手術(shù)的患者血清中發(fā)現(xiàn)了7例梅毒陽性。其中有5例都是年齡>68歲的患者，由于WB成本過高，而中國(guó)又無注冊(cè)試劑盒，我們尚不能開展WB的檢測(cè)。但經(jīng)過向臨床咨詢，這5例未發(fā)現(xiàn)有梅毒的臨床表現(xiàn)，所以對(duì)老年人的陽性結(jié)果一定要結(jié)合臨床慎重考慮。同時(shí)，也希望國(guó)內(nèi)有關(guān)研究單位和生產(chǎn)廠商能盡快研究生產(chǎn)出WB試劑盒，以滿足臨床診斷的需求，進(jìn)一步提高梅毒的診斷水平。

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編輯/張燕