不同品種金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量測定

雷華平，秦 韋，劉純一，張 輝，楊德俊

(1.湘南學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)系，湖南 郴州 423000；2.湖南濟(jì)草堂金銀花科技開發(fā)有限公司，湖南 桂陽 424400)

不同品種金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量測定

雷華平1，秦 韋1，劉純一2，張 輝1，楊德俊1

(1.湘南學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)系，湖南 郴州 423000；2.湖南濟(jì)草堂金銀花科技開發(fā)有限公司，湖南 桂陽 424400)

目的：測定不同季節(jié)‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花的花蕾、莖、葉中綠原酸和木犀草苷的含量。方法：按2010年版《中國藥典》中金銀花含量測定項規(guī)定的方法測定樣品中綠原酸和木犀草苷的含量。結(jié)果：湘南產(chǎn)‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花都是綠原酸含量在花蕾中最高，木犀草苷含量在葉中最高。兩個品種金銀花的花蕾中綠原酸含量從5月到9月都迅速減少，而莖、葉中綠原酸含量變化趨勢因品種而異；兩個品種的花蕾、莖和葉中木犀草苷含量從5月到9月都逐漸減少。結(jié)論：湘南產(chǎn)‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花較佳的采收季節(jié)都是5月份。

金銀花；綠原酸；木犀草苷；含量測定

金銀花(LonicerajaponicaThunb.)又名忍冬，為忍冬科多年生半常綠纏繞木質(zhì)藤本植物，常以干燥花蕾或初花入藥[1]。其主要活性成分為綠原酸類，三萜皂苷類化合物及木犀草苷[2]。金銀花既能宣散風(fēng)熱，還善清解血毒，用于各種熱性病，如身熱、發(fā)疹、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等證，均效果顯著，是中醫(yī)臨床清熱解毒之良藥，另外在抑制突變、抗腫瘤、保護(hù)心血管及降血壓方面也有顯著療效。

金銀花品種多，來源廣，全國大部分地區(qū)有產(chǎn)，不同品種金銀花的外觀性狀、有效成分含量存在差異。陳豪[3]、郭艷文[4]、周日寶[5]等通過對不同品種金銀花中有效成分的研究，表明了不同品種金銀花的綠原酸含量有很大差異。李昌愛[6]、李煥榮[7]等通過對河南密縣、山西太谷、山東平邑、四川重慶、云南大理及吉林長春、渾江、通化、撫松、靖宇、老爺嶺等地的金銀花進(jìn)行有效成分的測定，顯示不同產(chǎn)地的金銀花中綠原酸的含量也是有差別的。金銀花品種多，來源廣，以往的研究證實了不同品種不同產(chǎn)地的金銀花有效成分含量不同。但湘南地區(qū)的金銀花有效成分的分析還未見報道。本研究通過對不同季節(jié)湘南產(chǎn)‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花各部位綠原酸和木犀草苷的含量測定，為金銀花的合理綜合利用提供理論依據(jù)。

1 實驗部分

1. 1 儀器與試劑

儀器：高效液相色譜儀(泵L-7100,UV-Vis檢測器L-7420，柱溫箱L-7300，Hitachi型)；色譜柱1：Kromasil 100-5 C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；色譜柱2：Agilent ZORBAX SB-phenyl(5 μm，4.6 mm×250 mm)；電子天平(AUY220，日本島津公司)；超聲提取器(KQ2200E型，昆山市超聲儀器有限公司)；三重純水蒸餾器 (SZ-97，上海勇規(guī)分析儀器有限公司)；快速水分測定儀(MF-50型，日本Android公司)。

試劑：乙腈(色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，其他試劑均為分析純。綠原酸(批號：110753-200413，購于中國藥品生物制品檢定所)。木犀草苷(批號：720-200905，購于中國藥品生物制品檢定所)。

1.2 樣品采集

‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花于2012年5月20日、7月21日、9月26日采于湖南省郴州市桂陽縣，經(jīng)湘南學(xué)院彭名勇副教授鑒定為Lonicerajaponica。

1.3 實驗方法

1.3.1 綠原酸含量測定[8]

1.3.1.1 色譜條件 Kromasil 100-5 C18色譜柱，以乙腈-0.4%磷酸溶液(13 ∶87)為流動相，柱溫25 ℃，檢測波長為327 nm。

1.3.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品11.3 mg，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1mL含45.2 μg的溶液，即得(10 ℃以下保存)。

1.3.1.3 供試品溶液的制備 按2010年版《中國藥典》金銀花綠原酸含量測定中“供試品溶液制備項”操作。

1.3.1.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜議,測定,即得。

1.3.2 木犀草苷含量測定[8]

1.3.2.1 色譜條件 Agilent ZORBAX SB-phenyl色譜柱；以乙腈為流動相A，以0.5%冰醋酸溶液為流動相B，按藥典規(guī)定的流動相梯度進(jìn)行梯度洗脫[8]；柱溫40 ℃；檢測波長為350 nm。

1.3.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取木犀草苷對照品10.6 mg，加70%乙醇制成每1 mL含42.4 μg的溶液，即得。

1.3.2.3 供試品溶液的制備 按2010年版《中國藥典》金銀花木犀草苷含量測定中“供試品溶液制備項”操作。

1.3.2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜議,測定,即得。

2 結(jié)果與分析

綠原酸對照品、木犀草苷對照品和金銀花樣品HPLC圖譜見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

由表1可知，‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’都以花蕾中綠原酸含量最高，在5月份‘濟(jì)草堂一號’金銀花中綠原酸含量明顯比‘九豐一號’金銀花中高，約高出41.36%。在5月份‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花的葉和莖中綠原酸含量都遠(yuǎn)低于花蕾的。兩個品種金銀花的花蕾中綠原酸含量從5月到9月都迅速減少，而莖、葉中綠原酸含量變化趨勢因品種而異?？梢姡煌贩N的金銀花綠原酸含量有差異；同一品種的金銀花不同部位的綠原酸含量也有明顯差異。此外，同一品種金銀花的同一部位綠原酸含量在不同季節(jié)差異很大。在金銀花的綜合利用過程中應(yīng)考慮到采收季節(jié)、品種和部位差異，以利于合理應(yīng)用。

表2 不同季節(jié)‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花各部位木犀草苷含量

由表2可知，不同季節(jié)的‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花都以葉中木犀草苷含量最高，而莖中的含量都不高，這與楊敏麗[9]和王柯[10]的分析結(jié)果相吻合。因此，若以木犀草苷為考察指標(biāo)，金銀花葉的利用價值較大。兩個品種各部位對比，木犀草苷含量差異不大。并且兩個品種金銀花的花蕾、莖和葉中木犀草苷含量從5月到9月都逐漸減少。

3 討 論

本文按照2010版《中國藥典》金銀花含量測定項方法測定‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量。實驗顯示：兩個品種金銀花的綠原酸含量都以花蕾中最高；而木犀草苷量含量都以葉中最高。兩品種對比，在5月份‘濟(jì)草堂一號’金銀花的花蕾中綠原酸含量明顯高于‘九豐一號’的，而木犀草苷含量兩者差別不大。此外，‘濟(jì)草堂一號’每年5月至10月均不間斷性地開花，比‘九豐一號’開花頻次多，產(chǎn)量高。因此,‘濟(jì)草堂一號’比 ‘九豐一號’金銀花具有更高開發(fā)利用價值。比較不同月份兩個品種金銀花各部位綠原酸和木犀草苷的含量，發(fā)現(xiàn)湘南產(chǎn)‘濟(jì)草堂一號’和‘九豐一號’金銀花較佳的

采收季節(jié)都是5月份。該結(jié)果支持藥典描述的金銀花在夏初采收的觀點[8]。

金銀花藥用價值廣泛，所含化學(xué)成分復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油類、黃酮類、有機(jī)酸類和三萜皂苷類物質(zhì)，其標(biāo)志性成分為綠原酸和木犀草苷[2]，據(jù)2010版《中國藥典》規(guī)定，金銀花的質(zhì)量控制以綠原酸和木犀草苷的含量為指標(biāo)，并常以是否含有木犀草苷區(qū)別金銀花和山銀花。金銀花的質(zhì)量受諸多因素的影響，來自不同產(chǎn)地、品種、采收季節(jié)，用不同加工方法、炮制方法所得金銀花的綠原酸和木犀草苷含量均不相同[11]。因而，在實施金銀花的GAP生產(chǎn)以及采收加工過程中，應(yīng)充分考慮這些影響因素，以提高金銀花的質(zhì)量和產(chǎn)量，為臨床提供質(zhì)優(yōu)效高的金銀花藥材。

[1] 石任賓，陸溫如.我國藥用金銀花資源、化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中國藥學(xué)雜志,1999,34(1):724-727.

[2] 羅集鵬.中藥鑒定學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2001:75.

[3] 陳豪.2種不同來源金銀花的鑒別及綠原酸含量分析[J].福建中醫(yī)藥，2004,35(2)：38-39.

[4] 郭艷文，朱兆儀，陳建民，等.黃褐毛忍冬花與金銀花的比較研究[J].藥物分析雜志，1990,10(1)：2-5.

[5] 周日寶，童巧珍.灰氈毛忍冬與正品金銀花的綠原酸含量比較[J].中藥材，2003,26(6)：399-400.

[6] 李昌愛，姚滿生，郭宏濱.金銀花產(chǎn)地和類型對其質(zhì)量的影響[J].中藥材，1993,16(5)：56.

[7] 李煥榮，崔健，宋玉環(huán).不同產(chǎn)地的金銀花中綠原酸、異綠原酸的含量測定—雙波長薄層掃描法[J].吉林中醫(yī)藥，1989(2)：39-40.

[8] 國家藥典委員會.中國藥典：一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：205-206.

[9] 楊敏麗,王麗婷. 金銀花不同品種及不同部位木犀草素含量的比較[J].中華中醫(yī)藥雜志,2007,22(10):666-668.

[10] 王柯,王艷艷, 趙東保,等. HPLC法測定金銀花不同部位中木犀草素及其苷的含量[J].河南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2011,41(1):39-43.

[11] 司曉萍,宋輝.淺析金銀花質(zhì)量的影響因素[J].時珍國醫(yī)國藥,2005,16(8):785-786.

Content Determination of Chlorogenic Acid and Luteoloside inLonicerajaponicaof Different Cultivars in Different Seasons

Lei Huaping1, Qin Wei1, Liu Chunyi2, Zhang Hui1, Yang Dejun1

(1.Department of Chemistry and Life Science, Xiangnan University, Chenzhou 423000, China; 2.Hunan Jicaotang Honeysuckle Technology Development Limited Company, Guiyang 424400，China)

Objective: To determine the content of chlorogenic acid and luteoloside in the flower bud, stem and leaf of ‘Jicaotang 1’ and ‘Jiufeng 1 ’ honeysuckles in different seasons. Methods: The content of chlorogenic acid and luteoloside were measured with the honeysuckle content determination method according to the Chinese Pharmacopoeia in 2010. Results: The ‘Jicaotang 1’ and ‘Jiufeng 1’ honeysuckles originated from Xiangnan both had the highest content of chlorogenic acid in the flower bud, and the highest luteoloside in the leaf. The content of chlorogenic acid in the flower bud of the 2 cultivars decreased remarkably from May to September. But the variation trend of chlorogenic acid content in stems and leaves were different between the 2 cultivars. And the content of luteoloside in the flower, stem and leaf of the 2 cultivars decreased gradually from May to September. Conclusion: The ‘Jicaotang 1’ and ‘Jiufeng 1 ’ honeysuckles originated from Xiangnan should be harvested in May.

LonicerajaponicaThunb.; chlorogenic acid; luteoloside; content determination

2015-03-21

雷華平(1979-)，男，博士，副教授，主要從事中藥提取分離和分析研究。E-mail：audenlei@163.com

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.05.008

R284

A

1006-9690(2015)05-0030-03