復(fù)合酶制劑降解黃曲霉毒素B1對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

胡常英， 胡科峰， 秦慧娟， 范 星， 王云鵬

(1. 河北省微生物研究所， 河北 保定 071051； 2. 電子科技大學(xué)， 成都 610054；3. 石家莊理工職業(yè)學(xué)院， 石家莊 050228； 4. 石家莊醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校， 石家莊 050061)

復(fù)合酶制劑降解黃曲霉毒素B1對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

胡常英1， 胡科峰2， 秦慧娟3， 范 星4， 王云鵬1

(1. 河北省微生物研究所， 河北 保定 071051； 2. 電子科技大學(xué)， 成都 610054；3. 石家莊理工職業(yè)學(xué)院， 石家莊 050228； 4. 石家莊醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校， 石家莊 050061)

試驗(yàn)旨在研究葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase, GOD )和過(guò)氧化氫酶(catalase, CAT)復(fù)合酶制劑降解污染飼料中黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1, AFB1)對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響。選用210只180日齡京粉蛋雞，隨機(jī)分為7組(CK、BA1、BA2、BA3、BD1、BD2和BD3)，7個(gè)處理組分別是飼喂不添加污染玉米和復(fù)合酶的CK組，污染飼料中含有17.22, 53.27和 134.56 μg/kg AFB1的BA1,BA2和BA3組，在有毒玉米中添加0.5%復(fù)合酶的BD1、BD2和BD3組。結(jié)果顯示，蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)在BA1、BA2和BA3組均有不同程度下降，在BD1、BD2 3期(T1,T2和T3)和BD3組第1期(T1)均達(dá)到對(duì)照組水平，BD3組第3期與BA3組同期相比，蛋雞月產(chǎn)量從9枚提高到17枚，受精蛋孵化率從41%提高到57%，蛋黃重量從14.34 g提高到15.53 g，單枚蛋重從42.39 g提高到48.49 g，蛋殼厚度從0.28 mm提高到0.31 mm。由此可知，復(fù)合酶制劑基本消除或減輕了AFB1對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)不良影響。

復(fù)合酶； 黃曲霉毒素B1； 蛋雞； 生產(chǎn)性能； 蛋品質(zhì)

眾多真菌種屬可產(chǎn)生對(duì)人或畜禽有害的物質(zhì)，尤以霉菌毒素為多見(jiàn)，黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1) 是若干毒素中的一種，也是目前發(fā)現(xiàn)毒性最強(qiáng)的一種。有研究得知[1]，黃曲霉毒素B1的毒性是氰化鉀的10倍，是砒霜的68倍。黃曲霉毒素B1主要是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的，在每年夏秋季節(jié)，在濕度和溫度合適的條件下，黃曲霉菌在飼料中生長(zhǎng)、繁殖，同時(shí)產(chǎn)生大量的次級(jí)代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素，一旦被蛋雞飼用，輕者厭食、腹瀉、嗜睡，生長(zhǎng)緩慢，生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)下降，繁殖率降低[2]；重者毒素大量集聚肝臟，使肝臟腫大病變，繼續(xù)發(fā)展到組織壞死致畜禽死亡。黃曲霉毒素還通過(guò)食物鏈方式由畜禽及其產(chǎn)品傳遞，危害人的健康和生命。

目前，國(guó)內(nèi)外降解黃曲霉毒素B1毒性的方法可分為三大類(lèi)，物理、化學(xué)和生物學(xué)法[3]。物理方法分為礦物質(zhì)吸附法、射線(xiàn)照射及水洗處理等方法。此方法受材料限制，飽和后不再發(fā)揮作用，另外對(duì)維生素和礦物質(zhì)也有吸附作用?；瘜W(xué)法主要采用強(qiáng)氧化劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等物質(zhì)，破壞毒素分子結(jié)構(gòu)，作用效果明顯，但或多或少均產(chǎn)生二次污染，危害畜禽的健康。生物學(xué)法主要是通過(guò)微生物酶作用，在溫和條件下破壞黃曲霉毒素B1的分子結(jié)構(gòu)，失去其毒性[4-10]。在已知的降解酶中，尚未發(fā)現(xiàn)酶制劑產(chǎn)品對(duì)畜禽產(chǎn)生二次危害，為此，科技工作者把工作重點(diǎn)放在了可降解黃曲霉毒素B1酶制劑研究上，葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase, GOD)就是其中一種。新的研究發(fā)現(xiàn)，該酶制劑對(duì)降解黃曲霉毒素B1毒性有很好的效果[11-12]，值得重視和深入研究。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)蛋雞：選用“京粉”品種180～280日齡蛋雞210只為試驗(yàn)對(duì)象。

復(fù)合酶制劑：復(fù)合酶制劑分別以固體劑型葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化氫酶為防霉和解毒酶制劑，其中含葡萄糖氧化酶25 U/g、過(guò)氧化氫酶50 U/g，產(chǎn)品由河北省微生物研究所提供。

有毒飼料：以含17.22、53.27和134.65 μg/kg黃曲霉毒素B1的玉米飼料為有毒飼料，保定達(dá)康飼料廠(chǎng)提供。

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：磁縣新源養(yǎng)雞場(chǎng)為實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)，河北磁縣。

1.2 試驗(yàn)方法

分組和喂養(yǎng)成分：將210只蛋雞平均分為7組，分別為CK、BA1、BA2、BA3、BD1、BD2和BD3組。CK為空白對(duì)照組，空白對(duì)照組飼料中不含黃曲霉毒素B1,也不添加復(fù)合酶制劑。BA1為飼料中含黃曲霉毒素B117.22 μg/kg組，BA2為含黃曲霉毒素B153.27 μg/kg組，BA3組為飼料中含黃曲霉毒素B1134.65 μg/kg； BD1、BD2、BD3組分別為BA1、BA2、BA3組飼料中再加入0.5%固體葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化氫酶制劑試驗(yàn)組。

試驗(yàn)時(shí)間：全部試驗(yàn)在小雞孵出180～280 d內(nèi)完成。每項(xiàng)試驗(yàn)時(shí)間為3期(T1、T2、T3)，采用連續(xù)喂養(yǎng)方式進(jìn)行。產(chǎn)蛋量試驗(yàn)每期時(shí)間30 d；孵化率試驗(yàn)每15 d為1期，每期每組取其中100枚受精蛋孵化；雞蛋重、蛋黃重、蛋殼厚度試驗(yàn)每期10 d。每組數(shù)據(jù)取平均值為試驗(yàn)結(jié)果。

測(cè)試項(xiàng)目：每組分別進(jìn)行每月產(chǎn)蛋數(shù)量、單枚蛋重量、蛋黃重量、蛋殼厚度和受精蛋孵化率項(xiàng)目測(cè)試。

2 結(jié)果與討論

2.1 復(fù)合酶制劑解毒對(duì)產(chǎn)蛋量的影響

由產(chǎn)蛋量試驗(yàn)數(shù)據(jù)得出，BA1、BA2和BA3 3個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，均表現(xiàn)了同一組蛋雞中3期相比，隨著毒玉米喂養(yǎng)天數(shù)增加，產(chǎn)蛋數(shù)量下降；不同組間相比，毒素含量越高，產(chǎn)蛋量下降明顯，結(jié)果見(jiàn)表1。BA3組第3期(T3)產(chǎn)蛋量?jī)H為對(duì)照組的39.13%。添加復(fù)合酶制劑，解毒效果明顯，BD1和BD2組在3期中(T1、T2、T3)均恢復(fù)到或接近對(duì)照組水平，BD3組在第3期(T3)提高到對(duì)照組的73.91%。

表1 復(fù)合酶降解黃曲霉毒素 B1對(duì)產(chǎn)蛋數(shù)量的影響

表中數(shù)據(jù)為30只雞平均產(chǎn)蛋數(shù)，按4舍5入取整數(shù)計(jì)。

資料顯示[13]肝臟是重要的解毒器官，也是AFB1中毒主要靶器官之一。AFB1中毒主要損傷肝臟，組織形態(tài)學(xué)對(duì)中毒肝臟觀(guān)察結(jié)果表明，早期病變以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的脂肪變性和水樣變性為特征；后期病變是肝小葉之間以及肝細(xì)胞之間界限消失，肝細(xì)胞被大量空泡所充滿(mǎn)。組織病變使器官功能不同程度受阻，肝臟中類(lèi)脂輸出發(fā)生困難，肝脂含量升高，血漿脂肪含量下降，肝臟輸出的類(lèi)脂化合物是合成卵黃中脂肪和蛋白質(zhì)的前體物質(zhì)，因此，卵黃的形成受到前提物質(zhì)供應(yīng)不足影響，延長(zhǎng)了雞蛋形成時(shí)間，產(chǎn)蛋的數(shù)量下降。

試驗(yàn)結(jié)果與資料解釋一致，進(jìn)一步證實(shí)肝臟是AFB1中毒受損重要器官之一，肝臟組織病變，肝功能降低，嚴(yán)重影響產(chǎn)蛋數(shù)量。

添加復(fù)合酶制劑，可恢復(fù)產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能。復(fù)合酶制劑可間接發(fā)揮作用，在有葡萄糖存在的前提下，酶促反應(yīng)產(chǎn)生葡萄糖酸，增加胃腸酸性環(huán)境，有利于飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收；葡萄糖氧化酶作用還可消耗胃腸中的氧，促進(jìn)厭氧環(huán)境形成，為厭氧菌生長(zhǎng)繁殖創(chuàng)造良好條件，對(duì)保護(hù)胃腸組織和促進(jìn)消化吸收功能發(fā)揮十分有利。良好的胃腸功能有利于自身免疫力增強(qiáng)，可提高自身解毒能力[14-15]。

2.2 復(fù)合酶制劑解毒對(duì)入孵蛋孵化率的影響

孵化率試驗(yàn)每15 d為一期，每組每期取受精蛋100枚，連續(xù)取3期進(jìn)行孵化試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為，BA1、BA2、BA3 3組均表現(xiàn)出按飼喂時(shí)間(T1、T2、T3)孵化率依次下降現(xiàn)象；不同組間同一期中毒素濃度增加孵化率呈下降趨勢(shì)。BA2、BA3組第3期(T3)孵化率為64%和41%(對(duì)照組是81%)。添加酶制劑解毒后，BD3組第3期(T3)孵化率上升到57%，比BA3組提高了16%，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)合酶降解黃曲霉毒素 B1對(duì)入孵雞蛋孵化數(shù)量的影響

每一組入孵受精蛋是100枚。

飼料中黃曲霉毒素B1含量在17.22 μg/kg以?xún)?nèi)，對(duì)雞蛋孵化影響很小，這一含量也是飼料國(guó)標(biāo)中允許量(≦20 μg/kg)；表2中統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果表明，毒素含量在53.27 μg/kg以上，黃曲霉毒素B1對(duì)雞蛋孵化率有影響，主要表現(xiàn)為雞蛋沒(méi)有孵化，小雞孵化過(guò)程死亡。經(jīng)分析認(rèn)為有幾種原因，卵泡沒(méi)有受精，或者卵泡發(fā)育不成熟，黃曲霉毒素B1干擾了正常卵泡形成，出現(xiàn)畸形卵，功能不全，不能受精；毒素抑制了受精卵發(fā)育過(guò)程需要的某種酶產(chǎn)生，受精卵發(fā)育受阻，發(fā)育不能最終完成。在試驗(yàn)的3種毒素飼料中，添加葡萄糖氧化酶解毒，對(duì)受精蛋孵化率恢復(fù)發(fā)揮了很好作用。

有毒飼料中加入葡萄糖氧化酶制劑，受精蛋孵化率顯著提高，證明該酶制劑有很好的降解黃曲霉毒素B1作用。推測(cè)葡萄糖氧化酶本身對(duì)黃曲霉毒素B1有氧化作用，它破壞呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)，使環(huán)打開(kāi)，毒性消失；葡萄糖氧化酶刺激胃腸產(chǎn)生解毒酶，誘發(fā)機(jī)體自身解毒能力增強(qiáng)，破壞黃曲霉毒素B1分子結(jié)構(gòu)，毒性消失[16]?？梢耘袛啵蟛糠侄舅氐亩拘韵г谖改c階段，進(jìn)入肝臟毒素量很少，對(duì)受精卵在生理學(xué)性質(zhì)上影響較小，孵化率得以恢復(fù)。表明添加酶或者被激發(fā)的自身解毒酶是在胃腸階段發(fā)揮了作用。當(dāng)毒素含量提高到134.65 μg/kg時(shí)，飼料中添加25 U/g葡萄糖氧化酶解毒，孵化率有提高，但解毒不完全。增加酶活含量或提高添加比例，是否可提高解毒效果，有待進(jìn)一步試驗(yàn)。

2.3 復(fù)合酶制劑解毒對(duì)蛋品質(zhì)的影響

表3中數(shù)據(jù)得出，黃曲霉毒素B1對(duì)雞蛋重量、蛋黃重量、蛋殼厚度影響明顯，均表現(xiàn)了同一毒素濃度下，飼喂時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)3項(xiàng)指標(biāo)危害越大；在同一試驗(yàn)期，毒素含量增加，危害加重。在有毒飼料中添加復(fù)合氧化酶制劑解毒，對(duì)所產(chǎn)雞蛋的3項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)作用顯著。BD1和BD2組在第1期、第2期中(T1、T2)恢復(fù)到或者接近對(duì)照組水平，BD3組第3期中(T3)，單枚蛋重由加酶前(BA3組)的42.39 g提高到48.49 g，恢復(fù)到對(duì)照組的88.26%；單枚蛋黃重由14.34 g提高到15.53 g，恢復(fù)到對(duì)照組的91.35%；蛋殼厚度由0.28 mm增加到0.31 mm，恢復(fù)到對(duì)照組的91.18%。

表3 復(fù)合酶降解黃曲霉毒素 B1對(duì)蛋品質(zhì)影響

表中數(shù)據(jù)為30枚雞蛋平均值。

肝臟是合成蛋黃的器官之一。黃曲霉毒素B1主要危害肝臟，蛋黃形成受干擾，同時(shí)產(chǎn)蛋器官也受到危害，功能減退，不但雞蛋成熟速度減慢，成蛋蛋黃重量下降，蛋清產(chǎn)量減少，單枚蛋重量減輕。

蛋殼主要成分是鈣，來(lái)源于飼料中，在腸道被吸收、轉(zhuǎn)化，由于毒素?fù)p傷胃腸組織細(xì)胞，吸收功能減退，合成蛋殼需求元素量不能滿(mǎn)足，蛋殼質(zhì)量下降。

根據(jù)表3中試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出黃曲霉毒素B1對(duì)蛋品質(zhì)的危害，與毒素濃度成正比，因飼喂時(shí)間長(zhǎng)而加重。

推測(cè)黃曲霉毒素B1還可能阻滯胃腸和肝臟有益酶(消化酶和解毒酶)產(chǎn)生，胃腸消化吸收功能下降，體重減輕，功能減退；肝臟正常代謝酶和解毒酶數(shù)量和產(chǎn)量下降，解毒能力減退，正常生命活動(dòng)嚴(yán)重制約。

葡萄糖氧化酶降解黃曲霉毒素B1毒性除有直接作用外，其反應(yīng)產(chǎn)物也有作用。進(jìn)入胃腸中的葡萄糖氧化酶作用于飼料中葡萄糖而產(chǎn)生過(guò)氧化氫。過(guò)氧化氫是一種強(qiáng)氧化劑，破壞黃曲霉毒素B1分子結(jié)構(gòu)，其毒性消失[17]。

過(guò)氧化氫具有降解毒素分子結(jié)構(gòu)之功能，尤其對(duì)霉菌毒素有很好的降解作用。但它又不能長(zhǎng)期存在于體內(nèi)，它是一種活性氧自由基，正常情況下，家禽肝臟產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶，具備清除機(jī)體活性自由基能力。當(dāng)肝臟長(zhǎng)時(shí)間受到較大濃度活性氧自由基刺激時(shí)，要產(chǎn)生自由基清除酶，降解活性自由基，保證肌體正常生理代謝。當(dāng)超出機(jī)體的清除能力時(shí)，致氧化和抗氧化狀態(tài)失去平衡，造成肝臟氧化損傷。肝臟是動(dòng)物的重要代謝器官，極易發(fā)生代謝性氧化損傷，使肝臟組織逐漸損傷、病變，嚴(yán)重影響動(dòng)物的生命活動(dòng)[18]。過(guò)氧化氫酶的專(zhuān)一底物是過(guò)氧化氫，飼料中添加過(guò)氧化氫酶，可幫助家禽肝臟盡快清除過(guò)氧化氫活性氧自由基，減輕肝臟負(fù)擔(dān)，免受代謝性氧化損傷，保證肝臟正常生命活動(dòng)進(jìn)行。

3 結(jié)論

由試驗(yàn)數(shù)據(jù)得出，蛋雞飼用被黃曲霉毒素B1污染的玉米飼料，其生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)均有不同程度下降。飼料中黃曲霉毒素B1濃度增加對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)毒害作用加大；同一種毒素含量飼料，飼喂時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)危害加重。添加0.5% 復(fù)合酶制劑，對(duì)玉米飼料中黃曲霉毒素B1有降解作用。黃曲霉毒素B1含量在53.27 μg/kg以?xún)?nèi)，添加復(fù)合酶解毒后，蛋雞產(chǎn)蛋數(shù)量、入孵蛋孵化率、單枚蛋重量、蛋黃重量和蛋殼厚度各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到或接近對(duì)照組水平；當(dāng)飼料中黃曲霉毒素B1含量達(dá)134.65 μg/kg時(shí)，復(fù)合酶制劑仍有較好的解毒作用。由此可知，復(fù)合酶制劑基本消除或減輕了被污染玉米飼料中AFB1對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)不良影響。

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The effects of complex enzymes for detoxicated aflatoxin B1on production performance and egg quality of laying hens

HU Chang-ying1, HU Ke-feng2, QIN Hui-juan3, FAN Xing4, WANG Yun-peng1

(1. Hebei Institute of Microbiology, Baoding 071051; 2. University Electronic Science and Technology of China, Chengdu 610054; 3. Shijiazhuang Institute of Technology， Shijiazhuang 050228;4. Shijiazhuang Medical College, Shijiazhuang 050061, China)

In this study, we investigated effects of aflatoxin B1degradation complex enzymes(GOD and CAT) on production performance and egg quality of laying hens fed with naturally moldy corn with AFB1. Two hundred and ten 180-day-old Jing Fen laying hens were randomly divided into seven groups(CK, BA1, BA2, BA3, BD1, BD2 and BD3). The seven dietary treatments consisted of conventional feed without moldy corn or complex enzymes as a control diet(CK), AFB1content of moldy corn were 17.22,53.27 and 134.56 g/kg (BA1, BA2 and BA3), respectively and moldy corns were added into 0.5% complex enzymes (BD1, BD2 and BD3). Results showed the production performance and egg quality of laying hens in BA1,BA2 and BA3 groups were all decreased in different degrees, the production performance and egg quality of laying hens in BD1,BD2 groups at three phases(T1,T2 and T3) and BD3 at the first phase(T1) of experimental time continuously were all increased compared to that in CK groups.In BD3 group was compared with in BA3 group at third phase(T3) of experimental time continuously, and the monthly output of eggs has gone up from 9 to 17, the hatching rate of fertilized eggs has gone up from 41% to 57%, the yolk weight has gone up from 14.34 g to 15.53 g , the egg weight has gone up from 42.39 g to 48.49 g, the eggshell thickness has gone up from 0.28mm to 0.31mm. As a result, the complex enzymes could reduce or almost eliminate the negative effects of AFB1on production performance and egg quality of laying hens .

complex enzymes; aflatoxin B1; egg-laying hens; production performance; quality

2014-09-25；

2014-10-25

河北省省級(jí)科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(No,13252804D)

胡常英，研究員，主要研究方向?yàn)槊腹こ?，E-mail:qimingxing105@126.com。

S831.5

A

2095-1736(2015)02-0024-04

doi∶10.3969/j.issn.2095-1736.2015.02.024