丹參總酚酸提取物磷脂復(fù)合物制備工藝研究*

史亞軍 王 卉 鄧 輝 許 靜 張小飛

陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院(咸陽 712046)

·方藥縱橫·

丹參總酚酸提取物磷脂復(fù)合物制備工藝研究*

史亞軍 王 卉 鄧 輝 許 靜 張小飛

陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院(咸陽 712046)

目的：考察丹參總酚酸提取物與大豆卵磷脂形成磷脂復(fù)合物的最佳制備工藝。方法： 以丹參總酚酸提取物與磷脂結(jié)合百分率為評價(jià)指標(biāo)，采用單因素考察和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)系統(tǒng)研究了復(fù)合溶劑類型、藥物與磷脂比例、提取物的濃度、復(fù)合反應(yīng)時(shí)間、復(fù)合時(shí)的溫度等因素對磷脂復(fù)合物形成的影響。結(jié)果：確定了以甲醇作為反應(yīng)溶劑，丹參總酚酸與大豆卵磷脂比例為1∶2，丹參總酚酸投料濃度為3mg/mL，在60℃條件下復(fù)合1h為較佳條件。結(jié)論：復(fù)合物的形成受反應(yīng)溶劑、反應(yīng)物濃度和溫度的影響較大；優(yōu)選的工藝可以作為丹參總酚酸提取物磷脂復(fù)合物的制備。

丹參[1]為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根莖，是臨床上較為常用的活血化瘀類中藥，具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰之功效。丹參的主要有效成分為水溶性成分丹參總酚酸類,現(xiàn)代研究表明，丹參總酚酸對于組織缺血再灌注損傷有著顯著地保護(hù)作用[2-3]。臨床研究提示，丹參對中風(fēng)有著明顯的治療作用[4]。丹參總酚酸提取物雖然水溶性良好，但其脂溶性較差，導(dǎo)致生物利用度較低，影響了其臨床療效的充分發(fā)揮。磷脂復(fù)合物是近年來出現(xiàn)的一種改性技術(shù)，已被廣泛應(yīng)用于中藥、天然藥物有效成分的改性，該技術(shù)能明顯改善藥物的脂溶性而提升生物利用度，進(jìn)一步拓展藥物的臨床用途[5]。本文通過系統(tǒng)研究，將丹參總酚酸提取物制成磷脂復(fù)合物，為拓展其制劑學(xué)用途奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥 HJ-4B多頭磁力加熱攪拌器；AR1140型電子天平；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；布氏漏斗抽濾裝置；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵。丹參總酚酸提取物(自制)，大豆卵磷脂大豆卵磷脂(1003E03，PC77.9%，上海愛康精細(xì)化工有限公司)，四氫呋喃、甲醇、無水乙醇、氯仿等均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2.1 丹參總酚酸提取物制備工藝 取丹參，切成小段，加水于80℃提取兩次，合并提取液，濾過，濾液于60℃減壓濃縮至相對密度為1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量為70%，靜置12h，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮干燥，即得[6]。

2.2 制備方法及工藝評價(jià) 磷脂復(fù)合物的形成是將被改性藥物與磷脂按一定比例在非質(zhì)子傳遞類有機(jī)溶劑中(常采用無水乙醇、四氫呋喃、甲醇等)，通過一定的復(fù)合反應(yīng)條件干預(yù)(如加熱、攪拌)，使其二者發(fā)生結(jié)合而形成磷脂復(fù)合物(介于物理結(jié)合與化學(xué)結(jié)合的中間態(tài)結(jié)合)，再于減壓低溫條件下除去反應(yīng)溶劑或采用非溶劑沉淀法分離而獲得干燥固體磷脂復(fù)合物[7]。

磷脂復(fù)合物的復(fù)合效果通常采用復(fù)合率進(jìn)行評價(jià)，即利用被復(fù)合的藥物在氯仿中難溶，而形成的磷脂復(fù)合物在氯仿中易于溶解，向形成的磷脂復(fù)合物(精密稱定)中加入適量的氯仿，室溫下攪拌使其溶解，置于布氏漏斗中抽濾(濾紙預(yù)先干燥并精密稱重)，將濾紙與沉淀物干燥至恒重，精密稱量。藥物的反應(yīng)投料量與沉淀量(減去濾紙重量)的差值即為藥物和磷脂發(fā)生復(fù)合的藥物量，計(jì)算藥物與磷脂的復(fù)合百分率，復(fù)合率的計(jì)算公式為：復(fù)合率(%)=(W1-W2)/W1×100%(W1為被復(fù)合藥物初始投入量，W2為沉淀量)

2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 根據(jù)復(fù)合反應(yīng)發(fā)生過程，影響復(fù)合率的因素主要包括復(fù)合溶劑類型、復(fù)合反應(yīng)時(shí)間、復(fù)合時(shí)體系的溫度、藥物濃度、投料比等，采用單因素試驗(yàn)對上述各因素進(jìn)行篩選，確定主要影響因素。

2.3.1 反應(yīng)溶劑的考察:取丹參總酚酸1g，大豆卵磷脂3g，反應(yīng)溫度為55℃，反應(yīng)時(shí)間為1h，丹參總酚酸提取物的濃度為3mg/mL，對反應(yīng)溶劑進(jìn)行優(yōu)選，結(jié)果表明，四氫呋喃和無水乙醇的復(fù)合率分別為74.36%和66.02%，而甲醇的復(fù)合率為92.52%，因此選擇以甲醇為復(fù)合溶劑。

2.3.2 藥物與磷脂比例的考察:以甲醇為反應(yīng)溶劑，其余條件同上，測定丹參總酚酸提取物和磷脂質(zhì)量比為1∶1，1∶2，1∶4時(shí)的復(fù)合率，結(jié)果提示二者的投料比對復(fù)合率有一定的影響，磷脂比例越高，復(fù)合率越高，但超過2∶1時(shí)，復(fù)合率變化較小。

2.3.3 丹參總酚酸提取物濃度的考察:以甲醇為復(fù)合溶劑，藥物和磷脂的投料設(shè)定為1∶3進(jìn)行復(fù)合，其余反應(yīng)條件同上，設(shè)定反應(yīng)體系中丹參總酚酸提取物的濃度為3、6、9mg/mL，復(fù)合率分別為94.08%、81.03%和62.21%，提示隨著體系中丹參總酚酸提取物濃度的增加，復(fù)合率呈下降趨勢。

2.3.4 復(fù)合時(shí)的溫度和復(fù)合時(shí)間的考察:復(fù)合條件同上，結(jié)合磷脂的熱穩(wěn)定性，確定考察反應(yīng)溫度為40、50、60℃，反應(yīng)時(shí)間分別考察0.5、1、2、3h，測定復(fù)合率，結(jié)果表明，溫度對復(fù)合率有較大的影響，溫度越高復(fù)合率越大，60℃時(shí)復(fù)合率達(dá)92.86%。反應(yīng)時(shí)間結(jié)果提示，復(fù)合反應(yīng)時(shí)間在0.5～3h內(nèi)影響較小。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平表

2.4 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn) 單因素試驗(yàn)結(jié)果表明，反應(yīng)溶劑對復(fù)合有著顯著影響，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇甲醇作為復(fù)合溶劑，其余幾個(gè)因素均有一定程度的影響，采用正交試驗(yàn)對投料比例(w/w，A)、丹參總酚酸濃度(mg/mL， B)、反應(yīng)溫度(℃，C)、復(fù)合時(shí)間(h，D)進(jìn)行優(yōu)化，根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)正交表設(shè)計(jì)見表1，試驗(yàn)結(jié)果和方差分析結(jié)果分別見表2、3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

注： F1-0.50(2，2)=19.00，F(xiàn)1-0.10(2，2)=99.0

正交分析表明，B、C因素的影響均有顯著性，結(jié)合直觀分析，參考單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定丹參總酚酸與大豆卵磷脂的投料比為為1∶2(w/w)、丹參總酚酸提取物的濃度確定為3mg/mL,于60℃條件下反應(yīng)1h。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 對上述正交試驗(yàn)優(yōu)化的最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證，按照上述條件進(jìn)行3次復(fù)合反應(yīng)，測定復(fù)合率，結(jié)果見表4，結(jié)果提示，優(yōu)選的工藝具有較高而穩(wěn)定的復(fù)合率，表明確定的最佳復(fù)合工藝穩(wěn)定可行。

表4 工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)

3 討 論 大豆卵磷脂對溫度較為敏感，高于70℃條件下，磷脂獨(dú)極易氧化，因此反應(yīng)溫度設(shè)定在70℃以下。大豆卵磷脂極易吸濕，因此，干燥完全后應(yīng)及時(shí)密封保存以降低吸濕率。反應(yīng)溶劑的選擇，文獻(xiàn)中多采用四氫呋喃，考慮到溶劑的毒性和復(fù)合率，但本研究表明，四氫呋喃復(fù)合率較低，且毒性較強(qiáng)，在實(shí)驗(yàn)中，可明顯觀察到丹參提取物在其中溶解度較低，而磷脂復(fù)合物形成的本質(zhì)是磷脂和藥物的分子狀態(tài)下的一種弱結(jié)合，不能完全溶解會(huì)直接導(dǎo)致提取物中藥物分子與磷脂分子的結(jié)合，導(dǎo)致復(fù)合率低，而以甲醇為溶劑復(fù)合效果良好。

磷脂復(fù)合物能顯著地改善藥物的脂溶性，改善藥物的油水分配系數(shù)，特別是適用于脂溶性較差藥物原料的改性，顯著提高藥物生物利用度，同時(shí)，磷脂作為一種機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)，可有效增加藥物的順應(yīng)性，減少藥物不良反應(yīng)。結(jié)果表明，該技術(shù)能明顯改善其生物利用度[8]，目前尚沒有對丹參總酚酸進(jìn)行磷脂復(fù)合物改性的研究，而有效部位作為中藥制劑投料的特有形式，對提取物脂溶性的改善，可有效提高丹參有效成分血管外給藥的生物利用度，為高效新制劑的研制奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

[1] 趙 娜，郭治昕，趙 雪，等.丹參的化學(xué)成分與藥理作用[J].國外醫(yī)藥植物藥分冊，2007，22(4)：155-160.

[2] 陳 雯，郜鳳香，郭麗麗，等.丹參總酚酸對心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013,19(12)：242-245.

[3] 張鐵華，楊 濤，張永利，等.丹參注射液對兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后保護(hù)作用[J].陜西中醫(yī)，2013,34(2)：241-242.

[4] 韓景獻(xiàn)，韓 力.注射用丹參總酚酸治療缺血性中風(fēng)瘀血阻絡(luò)證臨床研究[J].天津中醫(yī)藥，2005，22(4):287-289.

[5] 史亞軍，吳品江，許潤春，等.黃芩苷磷脂復(fù)合物基本性質(zhì)研究[J].中草藥，2012，43(1)：78-82.

[6] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版[S].中國醫(yī)藥科技出版社，2010：373-374.

[7] 廉 潔，王伯初.藥物磷脂復(fù)合物工藝評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通訊，2006,17(5)：830-833.

[8] 劉莎莎，李 文，李俊松，等.磷脂復(fù)合物改善丹參素口服生物利用度的而研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014,30(2)：164-167.

(收稿2014-12-11;修回2015-01-10)

Research on preparation of salvia total phenolic acids-phospholipid complex

Pharmacy Faculty, Shaanxi University of Chinese Medicine(Xianyang 712046)

Shi Yajun Wang Hui Deng Hui et al

Objective: To study the optimum conditions for the formation of Salvia total phenolic acids complex with phospholipids.Method: With combined percentage as evaluation index，adopt single factor and orthogonal design test methods study the following factor: compound solvent type, drugs and phospholipid proportion, the concentration of the extract, reaction time and the temperature.Results: The optimized preparation conditions for Salvia total phenolic acids phytosomes were obtained as follows: Solvent was mathanol.The ratio of Salvia total phenolic acids to phospholipid was 1 to 2.Temperature was 60℃ .Reaction time was 1 h. Salvia total phenolic acids concentration was 3mg/mL. Conclusion: The formation of Salvia total phenolic acids complex with phospholipid is greatly influenced by the solvent, concentration and temperature; the optimized preparation is feasible and stable.

@Total salvianolic acids @Phospholipld complex Orthogonal test

*陜西省科技廳科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(2013K12-07-03)

陜西中醫(yī)學(xué)院創(chuàng)新基金項(xiàng)目(14XJZR01)

@丹參總酚酸 @磷脂復(fù)合物 正交試驗(yàn)

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.042

陜西省重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2013KCT-26)