金標(biāo)斑點(diǎn)法定量快速檢測(cè)C反應(yīng)蛋白的方法學(xué)評(píng)價(jià)

金 娣

C 反應(yīng)蛋白(C-reactve protein，CRP)是最早認(rèn)識(shí)的一種非特異性急時(shí)相反應(yīng)蛋白，當(dāng)炎癥發(fā)生、組織損傷、各種急性和慢性感染、心肌梗塞、創(chuàng)傷、惡性腫瘤等疾病時(shí)，CRP 血中濃度升高，并且隨病程進(jìn)展而變化［1］。近年來(lái)國(guó)內(nèi)采用快速定量方法分析對(duì)CRP 進(jìn)行分析。本文選用金標(biāo)斑點(diǎn)定量法對(duì)56例患者血清CRP 含量進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 來(lái)源于本院門(mén)診和住院隨機(jī)抽取的56 例患者血清標(biāo)本。

1.2 方法 儀器:Qpad 型金標(biāo)斑點(diǎn)定量分析儀由上海奧普公司提供、7600 全自動(dòng)生化分析儀由日本日立公司提供。試劑:奧普公司提供的全量程快速金標(biāo)斑點(diǎn)C 反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑合:日本和光株式會(huì)社提供的CRP 試劑盒及校準(zhǔn)品。測(cè)定和分析方法:奧普公司的金斑點(diǎn)定量試劑盒嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定;日立7600 的C 反應(yīng)蛋白測(cè)定按照儀器常規(guī)程序進(jìn)行測(cè)定。采用線性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、準(zhǔn)確性試驗(yàn)、對(duì)比試驗(yàn)和干擾試驗(yàn)對(duì)Qpad 金標(biāo)班點(diǎn)定量C 反應(yīng)蛋白分析儀進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 線性試驗(yàn) 取CRP 高濃度混合血清(125.0 mg/L)1 份，依次作80%、60%、40%、20%、10%稀釋?zhuān)悦庖甙唿c(diǎn)定量法測(cè)定CRP 值。每個(gè)濃度標(biāo)本測(cè)定2 次取均值。將測(cè)定結(jié)果與理論值進(jìn)行回歸分析。結(jié)果:相關(guān)系數(shù)R2=0.999，回歸方程為Y=0.9533x+1.38。見(jiàn)圖1。

2.2 精密度試驗(yàn) 分別選取CRP 的高、中、低值新鮮標(biāo)本各l 份，每份標(biāo)本重復(fù)測(cè)定20 次，計(jì)算其批內(nèi)變異系數(shù)(CV):把上述血清標(biāo)本分裝20 份后于－20℃保存，每天各取一份穩(wěn)定至室溫充分混勻后測(cè)定，連續(xù)測(cè)定20 天，計(jì)算其批間變異系數(shù)(CV)。見(jiàn)表1。

圖1 Qpad 金標(biāo)班點(diǎn)定量C 反應(yīng)蛋白分析儀的CRP 線性試驗(yàn)

表1 CRP 金標(biāo)斑點(diǎn)法的批內(nèi)、批間精密度試驗(yàn)(CV%)

2.3 回收試驗(yàn) 取數(shù)份無(wú)溶血、脂血及黃疸的新鮮血清混合后分為三份，每份0.9 ml。一份加入0.1 ml 生理鹽水作為基礎(chǔ)管;另外兩份分別加入濃度為93.1 mg/L 和150.3 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)液各0.1 ml。每份樣本重復(fù)檢測(cè)4 次，結(jié)果取平均值。測(cè)得回收率分別為98.2%和97.8%，平均回收率為98.1%?；厥赵囼?yàn)結(jié)果，見(jiàn)表2。

表2 血清CRP 干化學(xué)法的回收試驗(yàn)結(jié)果

2.4 對(duì)比試驗(yàn) 用金標(biāo)斑點(diǎn)法和濕化學(xué)法分別對(duì)56 例臨床隨機(jī)標(biāo)本進(jìn)行定量測(cè)定。對(duì)其結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。相關(guān)性良好R2=0.9893，回歸方程為Y =0.9701x +0.3856。并進(jìn)行t檢驗(yàn)，兩者結(jié)果比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2 金標(biāo)斑點(diǎn)、濕化學(xué)對(duì)比試驗(yàn)。

2.5 干擾試驗(yàn) 在1 份已知濃度(181.0 mg/L)新鮮混合血清中分別加入一定量的血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯后測(cè)定其含量。當(dāng)血紅蛋白濃度在2.8 g/L 以下，膽紅素濃度156 μmo1/L 以下，甘油三酯濃度5.3 mmol/L 以下對(duì)本法測(cè)定基本無(wú)干擾(偏差＜5%)。見(jiàn)表3。

表3 血清CRP 干擾試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

CRP 長(zhǎng)期以來(lái)一直被臨床看作細(xì)菌感染等炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物，可以用于診斷多種炎性疾?。?］。一些資料報(bào)道可根據(jù)患者血中CRP 濃度的變化預(yù)測(cè)冠心病病程進(jìn)展，并指導(dǎo)臨床治療及療效判斷［3-4］。

目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)CRP 主要有免疫比濁法及金標(biāo)斑點(diǎn)快速定量法。免疫比濁法測(cè)定CRP 靈敏、準(zhǔn)確，在臨床得到廣泛應(yīng)用。但是需要大型儀器，操作復(fù)雜，價(jià)格昂貴，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，難以實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，從而限制了其在急診檢測(cè)中的應(yīng)用。用金標(biāo)斑點(diǎn)快速定量檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)本用量少，檢測(cè)快速，價(jià)格低廉，尤其適合急診常規(guī)感染患者的篩查及床邊檢測(cè)(POCT)，臨床檢測(cè)中顯示出良好的應(yīng)用前景。為了全面了解其檢測(cè)CRP 的性能是否達(dá)到到臨床需求以及與傳統(tǒng)方法之間的差別，我們進(jìn)行了全面性能評(píng)估與比對(duì)。結(jié)果顯示金標(biāo)快速斑點(diǎn)法與免疫比濁法相關(guān)性良好，具有較好的精密度，不易受到干擾。由于實(shí)驗(yàn)條件的限制，本次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CRP 濃度在125 mg/L 以下表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，實(shí)際檢測(cè)中線性范圍可能更高。

值得注意的是，在Qpad 的檢測(cè)過(guò)程中，完成最后一點(diǎn)洗滌過(guò)程后，如測(cè)試板放置的時(shí)間控制不當(dāng)，很可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高;在我們的實(shí)驗(yàn)中推薦放置30 s 以上，最好不要超過(guò)5min，這樣測(cè)出的結(jié)果重復(fù)性更好。同時(shí)在采用全血模式下必須根據(jù)紅細(xì)胞壓積測(cè)定結(jié)果來(lái)手工乘以相應(yīng)的校正系數(shù)，這可能會(huì)導(dǎo)致較大的誤差，限制了全血檢測(cè)CRP 的應(yīng)用。

［1］張玲玲，王園園，張潤(rùn)香，等.CRP 監(jiān)測(cè)在ICU 早期感染診斷中的價(jià)值［J］.實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2007，8(12):12-13.

［2］伊學(xué)軍，翟建新.血清降鈣素原與C 反應(yīng)蛋白在細(xì)菌感染性疾病中的臨床應(yīng)用［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，4(35):490-491.

［3］周建光，楊 梅.超敏C 反應(yīng)蛋白對(duì)冠心病的診斷預(yù)測(cè)及預(yù)后判斷的意義［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2008，15(4):500-502.

［4］易朝陽(yáng)，游其勇.高敏性CRP 在心血管疾病中的應(yīng)用［J］.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2009，20(2):81-82.