冠心病易感性及其與冠狀動脈病變嚴重程度的相關性分析

任 勇，劉 娟，徐 果，湯永謙，劉文衛(wèi)

(湖北文理學院附屬醫(yī)院、襄陽市中心醫(yī)院1．心血管內科;2．骨科，湖北 襄陽 441021)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病簡稱冠心病，是一種嚴重危害人類健康的心血管疾病，主要是由冠狀動脈發(fā)生粥樣硬化引起管腔狹窄或閉塞，導致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟?。?]。冠心病患者冠狀動脈病變的嚴重程度受年齡、血脂異常、吸煙、糖尿病等危險因素的影響。作為一種與冠狀動脈痙攣硬化有關的炎性標志物，C反應蛋白(C reactive protein，CRP)是在機體損傷或炎癥時肝臟迅速合成的急性時相蛋白。CRP水平與血脂、血壓、遺傳因素、生活方式、環(huán)境因素等有關，其中遺傳因素是導致CRP水平個體差異的關鍵因素［2]。為了探討冠心病易感性及其與冠狀動脈病變嚴重程度，本文以在我院接受治療的470例冠心病患者為研究對象進行研究，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取2009年1月至2013年12月在我院治療的冠心病患者470例，其中男性312例，女性158例，年齡37～80歲，平均(54．28±11．18)歲，同時選取在體檢中心體檢的健康者157例，其中男性97例，女性60例，年齡35～78歲，平均(53．84±10．26)歲。納入標準:(1)冠心病患者均經過冠脈造影確診;(2)患者臨床資料保存完好;(3)所有研究對象及家屬知情同意，能配合研究。排除標準:(1)嚴重肝腎功能不全、免疫系統(tǒng)性疾病、腫瘤、既往行冠狀動脈搭橋術等疾病;(2)近3個月接受過糖皮質激素治療;(3)合并細菌、病毒感染，近1月內有手術或創(chuàng)傷史。根據冠脈造影結果，將冠心病組患者再分為粥樣硬化組(冠狀動脈狹窄程度＜50%)和冠狀動脈病變組(有一支以上主要冠狀動脈狹窄程度≥50%)，三組研究對象在年齡、性別構成、體重指數等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)，見表1。

1．2 C反應蛋白基因多態(tài)性檢測 (1)提取外周血基因組DNA 取2 mL外周靜脈血，加入3．2%檸檬酸鈉抗凝，2 000 rpm離心5 min，分離上層血漿和下層白細胞細胞，用酚－氯仿法提取白細胞基因組DNA，于－70℃下冷凍保存。(2)引物設計與合成參照GENEBANK的CRP基因全DNA序列設計引物，并委托專門的生物公司合成。(3)目的DNA片段PCR擴增使用UVI自動凝膠成像及分析系統(tǒng)觀察擴增的結果，并通過DNA分子量標準判斷是否為314 bp的目的片段。(4)聚合酶鏈反應(PCR)擴增產物的限制性酶切 基因型包括TT純合型(314 bp)、GG純合型(234和80 bp)和TC雜合型(314，234和80 bp)。用含溴己錠的3%瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像系統(tǒng)儀判斷基因型。抽取部分PCR擴增產物進行測序鑒定。

表1 三組一般資料比較/例(x±s)

1．3 血漿C反應蛋白檢測 在所有行冠狀動脈造影術患者入院24 h內，對每一位患者取靜脈血4 mL，置于試管中，3 000 rpm離心10 min，收集上層血清。選用免疫散射比濁法，使用美國Bec km an CX－V型全自動生化儀檢測CRP。

1．4 冠狀動脈病變嚴重程度評價標準 冠狀動脈病變嚴重程度評價采用改良Gensini評分對每支血管病變程度進行評定，冠狀動脈左主干狹窄＜25%為2分，25% ～49%為4分，50% ～74%為6分，75% ～99%為8分，100%為10分，冠狀動脈左前降支、左回旋支和右冠狀動脈狹窄＜25%為1分，25% ～49%為2分，50% ～74%為3分，75% ～99%為4分，100%為5分。每例患者冠狀動脈病變程度積分為各分支積分之和。

1．5 統(tǒng)計學處理 應用采用SPSS19．0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用(x±s)表示，比較使用t檢驗，計數資料比較使用χ2檢驗，樣本遺傳平衡采用哈迪 －溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，以 P ＜0．05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 CRP基因多態(tài)性檢測 +1059G＞C(rs1800947)酶切分型，檢測到3種基因型分別為GC型、CC型和GC型，+1444C＞T(rs1130864)酶切分型，檢測到3種基因型分別為CT型、CC型和TT型，見圖1。

圖1 C反應蛋白基因多態(tài)性檢測

2．2 CRP基因在各組中等位基因及基因型頻率分析 冠心病組和對照組C反應蛋白基因等位基因和基因型頻率分布見表2、表3，通過統(tǒng)計分析，兩組CRP基因 +1059G＞C(rs1800947)和+1444C＞T(rs1130864)等位基因和基因型頻率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)。

表2 兩組+1059G＞C(rs1800947)等位基因和基因型頻率分布/n(%)

表3 兩組+1444C＞T(rs1130864)等位基因和基因型頻率分布/n(%)

2．3 各組CRP以及Gensini評分情況 冠狀動脈病變組、粥樣硬化組和對照組CRP和Gensini評分差異比較有統(tǒng)計學意義(p＜0．05)，其中冠狀動脈病變組CRP水平和Gensini評分最高，分別為(10．13 ±1．22)mmol·L－1和(44．39 ±11．26)分，其次為粥樣硬化組，對照組最低，見表4。

表4 各組CRP水平以及Gensini評分(x±s)

2．4 CRP與Gensini評分相關性分析 通過Pearson相關性分析，CRP水平與 Gensini評分呈正相關，r=0．770，P=0．016，見圖 2。

圖2 CRP與Gensini評分相關圖

3 討論

臨床醫(yī)學普遍把冠心病看做一種炎癥性疾病，糖尿病、血脂異常等是患者冠狀動脈病變嚴重程度的主要影響因素。國內外研究報道CRP不僅可以有效地預測心血管事件，而且對炎性反應和動脈粥樣硬化有一定的促進作用［3]。CRP是機體出現損傷、感染、炎癥時肝細胞在白細胞介素－6的刺激下迅速合成一種急性期蛋白，同時有研究者指出［4]受損的冠狀動脈也可以產生CRP。CRP具有穩(wěn)定性好、不隨時間和季節(jié)周期性變化、不受飲食影響、檢測技術成熟且成本低廉等優(yōu)點［5]，因此任何時刻C反應蛋白的測定值均具有臨床應用價值。遺傳、體重指數、血壓、血脂等多種因素共同決定著CRP基礎水平，其中遺傳因素在導致個體基礎CRP水平方面所起的作用達到35% ～40%。因此臨床上有必要進一步探討CRP基因多態(tài)性和冠心病患者的冠狀動脈病變程度的關系。

動脈粥樣硬化因動脈外膜上聚集著黃色粥樣脂質而得名，一般情況下其發(fā)展過程為從動脈內膜開始，然后復合糖類和脂質逐漸聚集，出血、血栓形成，纖維組織增生和鈣質沉著，并有動脈中層的逐漸退變和鈣化［6]。CRP水平的高低直接反應疾病炎癥反應的程度，血清中CRP水平越高表示冠狀動脈內粥樣硬化斑塊的局部炎癥反應就越強、范圍越大，即冠狀動脈的病變程度越嚴重。CRP主要集中在粥樣斑狀里，粥樣脂核的大小、纖維帽薄弱斑塊的數量以及巨噬細胞的密度都對其有一定的影響［7]。CRP可以通過與脂蛋白、溶血卵磷脂等配體結合激活補體系統(tǒng)［8]，釋放大量可以損傷血管內膜的反應蛋白和反應復合物。血管損傷主要由高糖化蛋白水平、血管剪切應力、吸煙等因素引起，高水平的CRP對此過程一定的促進作用;同時內皮細胞被激活，有助于增加細胞間黏附分子(ICAM-1)、細胞間黏附分子(ICAM-1)、E選擇素、單核細胞誘導蛋白－1(MCP-1)的表達，導致內皮功能障礙誘發(fā)動脈粥樣硬化［9－11]。CRP有利于單核細胞誘導蛋白MCP-1和內皮黏附分子的增加［12]，進而對單核細胞的產生和活化有一定的促進作用，并通過誘導單核細胞合成組織因子產生促凝血作用。CRP可以加速纖維蛋白的合成，以及促進巨噬細胞產生促血小板凝集素、纖維蛋白原、組織因子，并通過激活組織纖溶酶原激活物抑制物(PAI-1)和凝血相關因子使機體纖溶和凝血機制失衡，從而促進冠狀動脈內血栓形成［13－14]。本研究發(fā)現所有研究對象中冠狀動脈病變組CRP水平和Gensini評分最高，其次為粥樣硬化組，對照組最低，且冠狀動脈病變組、粥樣硬化組和對照組CRP和Gensini評分差異比較有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，但C反應蛋白基因多態(tài)性與冠心病易感性無關。由此可見，CRP可以直接作用于動脈粥樣硬化的發(fā)生過程。

綜上所述，C反應蛋白基因多態(tài)性與冠心病的易感性無直接的關系，但血清CRP水平與冠狀動脈的病變程度呈正相關。CRP作為一種急性時相蛋白，臨床上檢測技術成熟、快捷且價格低廉，可以作為預測冠狀動脈病變嚴重程度、病情以及預后的指標在臨床上推廣應用。

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