雞肝細(xì)胞中L-BABP基因表達(dá)對脂類代謝基因及甘油三酯和總膽固醇的影響

高廣亮，張慶秋，李 輝*，王啟貴*

(1.農(nóng)業(yè)部雞遺傳育種重點實驗室，哈爾濱 150030； 2.黑龍江省普通高等學(xué)校動物遺傳育種與繁殖重點實驗室，哈爾濱 150030； 3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱 150030； 4.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460)

雞肝細(xì)胞中L-BABP基因表達(dá)對脂類代謝基因及甘油三酯和總膽固醇的影響

高廣亮1,2,3,4，張慶秋1,2,3，李 輝1,2,3*，王啟貴1,2,3,4*

(1.農(nóng)業(yè)部雞遺傳育種重點實驗室，哈爾濱 150030； 2.黑龍江省普通高等學(xué)校動物遺傳育種與繁殖重點實驗室，哈爾濱 150030； 3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱 150030； 4.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460)

本研究以雞原代肝細(xì)胞為試驗材料，探討雞L-BABP基因?qū)χ惔x相關(guān)基因及生化指標(biāo)(總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密脂蛋白)的影響。利用RNAi和過表達(dá)技術(shù)下調(diào)和上調(diào)該基因的表達(dá)，分別在干擾和過表達(dá)24、36、48、60和72 h時檢測雞肝細(xì)胞中脂類代謝相關(guān)基因的表達(dá)量變化及細(xì)胞培養(yǎng)基中脂類代謝相關(guān)生化指標(biāo)的變化。結(jié)果顯示，雞L-BABP基因表達(dá)量的變化顯著或極顯著影響APOB、APOAΙ和PERILIPIN基因表達(dá)，且顯著地改變細(xì)胞培養(yǎng)基中的甘油三酯和總膽固醇的含量。基于以上結(jié)果，本研究推測雞肝細(xì)胞中L-BABP基因可能參與禽類脂肪沉積、總膽固醇代謝和脂解過程。

雞肝細(xì)胞；L-BABP基因；APOB基因；APOAΙ基因；Perilipin基因；總膽固醇；甘油三酯

脂肪酸結(jié)合蛋白家族(Fatty acid binding proteins，F(xiàn)ABPs)對細(xì)胞內(nèi)脂肪酸的運輸起著重要的作用[1-3]，通過與脂肪酸結(jié)合增加脂肪酸的可溶性，并將其運輸?shù)骄€粒體、過氧化氫酶體等位置進(jìn)行氧化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等位置酯化成甘油三酯或磷脂[4]。肝膽汁酸結(jié)合蛋白(Liver basic acid binding protein，L-BABP)屬于FABPs中的一員，對脂肪酸結(jié)合能力較弱，而對膽汁酸具有較強的親和力，且能夠結(jié)合兩分子的膽汁酸[5-6]，該基因特異地存在于禽類的肝組織中[7]。禽類的膽固醇在肝中可以分解為膽汁酸，所以膽汁酸對日糧中脂肪的消化和吸收有重要影響[8]，膽固醇經(jīng)肝左右管—肝總管—膽總管，進(jìn)入十二指腸，參加消化，小腸中的膽汁酸被重吸收，經(jīng)肝門靜脈進(jìn)入肝完成循環(huán)。目前對于膽汁酸進(jìn)出肝細(xì)胞和小腸上皮細(xì)胞的受體系統(tǒng)和外排系統(tǒng)的分子機理較為清楚，而膽汁酸在肝和小腸細(xì)胞中的運輸機制仍不是非常清晰，晶體結(jié)構(gòu)的研究中證實L-BABP基因可能為膽汁酸的運輸者[9]，推測L-BABP基因可能參與膽汁酸的運輸并在膽汁酸代謝途徑中發(fā)揮重要的作用。

前期研究結(jié)果表明，L-BABP基因的SNP突變位點對雞體重、腹脂重和腹脂率有顯著影響[10]，這預(yù)示著L-BABP基因在脂類代謝通路中具有重要的作用。為了進(jìn)一步揭示L-BABP調(diào)節(jié)肝細(xì)胞脂類代謝的分子機制，本研究選擇了與脂類代謝相關(guān)的PPARα(Peroxisome proliferators-activated receptor alpha, PPARα)基因；檢測對脂肪酸轉(zhuǎn)運到線粒體的相關(guān)CPTΙ(Carnitine palmitoyltransferaseΙ，CPTΙ)基因；檢測合成載脂蛋白APOAΙ和APOB基因；檢測膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)的基因SREBPΙ(Sterol regulatory element binding proteinΙ,SREBPΙ)和PERILIPIN基因；以及在肝細(xì)胞中表達(dá)的另一個脂肪酸結(jié)合蛋白家族成員L-FABP(Liver fatty acid binding protein，L-FABP)基因作為檢測的靶基因，檢測L-BABP基因被上調(diào)或下調(diào)表達(dá)后這些基因表達(dá)量以及脂類代謝生化指標(biāo)的變化，分析它們在肝細(xì)胞脂類代謝過程中的調(diào)控關(guān)系，此結(jié)果將為家禽脂類代謝遺傳機理的解析奠定良好的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株、質(zhì)粒和試驗動物

大腸桿菌DH5a、L-BABP真核表達(dá)載體均為本實驗室保存，siRNA由北京英駿生物技術(shù)有限公司合成。體重?zé)o明顯差異的16～18日齡的AA肉仔雞購自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)孵化場。

1.2 主要試劑

質(zhì)粒提取試劑盒和膠回收試劑盒購自Axygen生物科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄相關(guān)試劑購自Promega公司；辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的羊抗兔IgG和辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的羊抗小鼠IgG購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；GAPDH抗體和BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)購自碧云天生物技術(shù)研究所；增強型ECL顯色液和RIPA細(xì)胞裂解液購自哈爾濱?；锛夹g(shù)有限公司；限制性內(nèi)切酶購自寶生物工程(大連)有限公司；Real-time試劑購自Roche生物公司；Willian E、膠原酶Ⅳ和胰蛋白酶購自GIBCO公司；總RNA提取試劑Trizol和轉(zhuǎn)染試劑lipofectamine2000購自Invitrogen公司；優(yōu)級胎牛血清購自天津灝洋生物制品有限公司；化學(xué)發(fā)光成像儀器購自北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司；總膽固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和甘油三酯(TG)的檢測試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司；其余試劑購自哈爾濱鑫豐生物有限公司。

1.3 雞原代肝細(xì)胞培養(yǎng)

取16～18日齡AA仔雞，手術(shù)前雞禁食3 h，無菌條件下打開腹腔，輕輕把腸道拉向軀體左側(cè)，暴露腸系膜靜脈，在其中1條肝門靜脈中插管并剪斷另一條肝門靜脈，分別灌流42 ℃預(yù)熱的A液500 mL(EDTA 1.861 g·L-1，HEPES 2.383 g·L-1，NaCl 8.006 g·L-1，KCl 0.224 g·L-1和Na2HPO4·12H2O 1.074 g·L-1)，B液100 mL(HEPES 2.383 g·L-1，NaCl 8.006 g·L-1，KCl 0.224 g·L-1和Na2HPO4·12H2O 1.074 g·L-1)，于37 ℃預(yù)熱的C液(HEPES 2.383 g·L-1，NaCl 8.006 g·L-1)過程中每5 min震蕩1次。消化完畢，加入培養(yǎng)液20 mL(10% 胎牛血清、10-6mol·L-1胰島素、10-6mol 地塞米松、10 mg·L-1維生素C、40 mg·L-1促肝細(xì)胞生成素和100 mg·L-1胰高血糖素及雙抗的基礎(chǔ)培養(yǎng)液，調(diào)pH為7.4)終止消化，200目的不銹鋼篩網(wǎng)過濾。濾液分裝入離心管，800 r·min-1離心5 min；紅細(xì)胞裂解液重懸沉淀，37 ℃靜置10 min，800 r·min-1離心5 min；再用紅細(xì)胞裂解液重懸沉淀，800 r·min-1離心5 min；Willian E培養(yǎng)基重懸沉淀，800 r·min-1離心5 min；PBS重懸沉淀，800 r·min-1離心5 min；將分離的肝細(xì)胞計數(shù)后，按5×105個·mL-1左右的密度接種，置于5% CO2培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)，每隔24 h換液洗去未貼壁的物質(zhì)。待細(xì)胞匯合度達(dá)到80%～90%時，此時的細(xì)胞可用于L-BABP基因干擾和過表達(dá)試驗中。

1.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

選擇lipofectamine2000作為轉(zhuǎn)染試劑，具體的轉(zhuǎn)染步驟(以24孔板為例)：首先將質(zhì)粒DNA稀釋于不含血清的培養(yǎng)基中，室溫孵育5 min。再將lipofectamine2000稀釋于不含血清的培養(yǎng)基中，室溫孵育5 min。將lipofectamine2000稀釋液滴加入DNA中，混勻后，室溫孵育20 min，100 μL上述混合液滴加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，在37 ℃，5% CO2條件下培養(yǎng)，4～6 h后換液，以除去轉(zhuǎn)染試劑。

1.5 細(xì)胞蛋白的提取

去除培養(yǎng)液，用PBS洗1遍，胰酶消化細(xì)胞之后加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基終止消化，將終止消化的細(xì)胞轉(zhuǎn)移進(jìn)入1.5 mL EP管中，2 000 r·min-1離心3 min，加入用PBS懸浮沉淀，2 000 r·min-1離心 3 min。按照6孔板每孔加入100～200 μL含有1 mmol·L-1PMSF(苯甲基磺酰氟)的細(xì)胞裂解液。充分裂解后，振蕩混勻，室溫靜置30 min，12 000 r·min-1，取上清，用BCA方法測定蛋白濃度，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 Western blot

每孔蛋白上樣量為50 μg，經(jīng)SDS-PAGE電泳分離后，電轉(zhuǎn)至NC膜上；將膜放入脫脂牛奶中，室溫封閉3 h，用PBST洗滌后加入1∶3 000稀釋的一抗(本實驗室保存的雞L-FABP抗血清)，室溫孵育2 h；洗滌后用1∶5 000稀釋的二抗(辣根過氧化酶標(biāo)記的羊抗兔IgG)，室溫振蕩1 h；洗滌后用增強型ECL顯色液顯色3 min，化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)進(jìn)行成像。

1.7 RT-PCR檢測基因表達(dá)

脂類代謝相關(guān)基因(PPARα、CPTΙ、APOAΙ、APOB、ATGL4、SREBPΙ、PERILIPIN和L-FABP)的mRNA表達(dá)情況，采用Real-time方法進(jìn)行檢測。按照Roche公司提供的Fast Start Universal SYBR Green Master(ROX)試劑盒說明書，反應(yīng)體系：ROX 5 μL，F(xiàn)orward primer(30 μmol·L-1) 0.1 μL，reverse primer(30 μmol·L-1) 0.1 μL，Water 3.8 μL，Template 1 μL，10 ng cDNA，總體積為10 μL。將上述混合物加到ABI7500系統(tǒng)中，設(shè)置反應(yīng)條件：50 ℃激活2 min；95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃延伸60 s，共40個循環(huán)。每個樣品設(shè)3個孔重復(fù)。選擇NONO(Non-POU domain containing，octamer-binding，NONO)基因作為內(nèi)參。用于分析這些基因表達(dá)水平的引物序列見表1。引物由北京英駿生物技術(shù)有限公司合成。

表1 RT-PCR特異性引物序列

Table1 Gene-sepecific primers used for RT-PCR

基因名稱GeneGenBank登錄號AccessionNo.引物序列(5'-3')PrimersequenceL-BABPAF380998F:CCTCCATAATGGCATTCAGTR:AGTAGTAATGTCAGCCTCTTTNONONM_001031532.1F:AGAAGCAGCAGCAAGAACR:CCTCCATCCTCCTCAGTPPARαNM_001001464F:TTTAACGGAGTTCCAATCGCR:AAACCCTTACAACCTTCACAACPT1NM_001012898F:AGAGGGCGTGGACCAATAAR:CTGGGATGCGGGAGGTATTAPOAIM96012F:GCATTCGGGATATGGTGGR:CTCAGCGTGTCCAGGTTGTAPOBDQ630943F:GACTTGGTTACACGCCTCAR:TAACTTGCCTGTTATGCTCSREBP-1AY029224F:GGTCCGGGCCATGTTGAR:CAGGTTGGTGCGGGTGAPERILIPINNM_001127439F:GGGGTGACTGGCGGTTGTAR:GCCGTAGAGGTTGGCGTAGL-FABPAY563636F:GCAGAATGGGAATAAGTTR:TTGTATGGGTGATGGTGT

2 結(jié) 果

2.1 雞L-BABP基因干擾和過表達(dá)效果檢測

采用Western blot方法分析干擾組和對照組以及過表達(dá)組和對照組細(xì)胞中的L-BABP的表達(dá)差異。結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)染L-BABP的siRNA 24、36、48、60和72 h后，干擾組細(xì)胞中的蛋白表達(dá)量均顯著低于對照組，過表達(dá)組細(xì)胞中的L-BABP蛋白表達(dá)量均顯著低于對照組(圖1)。

1.過表達(dá)組；2.過表達(dá)對照組；3.干擾對照組；4.干擾組1.Overexpression；2 .Control of overexpression；3.Control of interference；4.Interference圖1 L-BABP基因干擾、過表達(dá)效果Western blot檢測Fig.1 Analysis of interference and overexpression effect of L-BABP by Western blot

2.2L-BABP基因干擾對脂類代謝相關(guān)基因在mRNA水平上的表達(dá)情況的影響

采用RT-PCR的方法，以NONO基因為內(nèi)參檢測干擾組和干擾對照組細(xì)胞中脂類代謝相關(guān)基因(PPARα、CPTΙ、APOAΙ、APOB、SREBPΙ、PERILIPIN和L-FABP)的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，L-BABP基因干擾36、48和60 h時，APOAΙ基因顯著或極顯著上升；24、36和60 h時，PERILIPIN基因極顯著上升；24、36、48和60 h時，SREBPΙ基因極顯著地上升，72 h時，極顯著下降；與PPARα、CPTΙ、APOB和L-FABP基因表達(dá)無一致性規(guī)律(圖2)。

2.3 雞L-BABP基因過表達(dá)對脂類代謝相關(guān)基因在mRNA水平上的表達(dá)情況的影響

RT-PCR方法檢測過表達(dá)組和對照組細(xì)胞中與脂類代謝相關(guān)基因(PPARα、CPTΙ、APOAΙ、APOB、SREBPΙ、PERILIPIN和L-FABP)的表達(dá)情況，結(jié)果顯示：L-BABP基因過表達(dá)24、36和48 h時，APOAΙ和PERILIPIN基因極顯著下降，與PPARα、CPTΙ、APOB、SREBPΙ和L-FABP基因表達(dá)無一致性規(guī)律(圖3)。

2.4 雞L-BABP基因干擾對培養(yǎng)基中生化指標(biāo)變化的影響

半自動生化分析儀測定L-BABP基因干擾之后培養(yǎng)基中生化指標(biāo)變化，分別測定了總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和甘油三酯等4項生化指標(biāo)，結(jié)果顯示，L-BABP基因干擾24和72 h時，培養(yǎng)基中總膽固醇含量極顯著下降。L-BABP基因干擾24 h時，培養(yǎng)基中高密度脂蛋白顯著下降；60 h時，極顯著上升。L-BABP基因干擾24和72 h時，培養(yǎng)基中低密度脂蛋白顯著下降，48和60 h時，極顯著上升。L-BABP基因干擾24、60和72 h時，培養(yǎng)基中甘油三酯顯著或極顯著上升(圖4)。

2.5 雞L-BABP基因過表達(dá)對培養(yǎng)基中生化指標(biāo)變化的影響

半自動生化分析儀測量L-BABP基因過表達(dá)之后培養(yǎng)基中生化指標(biāo)變化，分別測量了總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和甘油三酯等4項生化指標(biāo)，結(jié)果顯示，L-BABP過表達(dá)24和72 h時，培養(yǎng)基中的總膽固醇含量極顯著上升。L-BABP基因過表達(dá)24和48 h時，培養(yǎng)基中的高密度脂蛋白極顯著下降，36 h時，顯著上升。L-BABP基因過表達(dá)36 h時，培養(yǎng)基中的低密度脂蛋白極顯著上升，48和72 h時，顯著或極顯著下降。L-BABP基因過表達(dá)24和72 h時，培養(yǎng)基中的甘油三酯含量極顯著下降(圖5)。

3 討 論

禽類脂質(zhì)代謝及其調(diào)控與哺乳動物不盡相同而有其自身的特點，脂質(zhì)合成主要是在肝中進(jìn)行，而脂肪組織只是貯存的場所[9,11]。脂肪沉積取決于甘油三酯水平，肝外合成脂肪能力有限，日糧中的脂肪含量一般低于10%，因此家禽脂類代謝過程中肝起著至關(guān)重要的作用[12]。與哺乳動物不同，禽類、兩棲類、爬行類和魚類等非哺乳動物肝中均有L-BABP基因的表達(dá)[13]，且特異性存在于雞肝組織中[7]，預(yù)示著其在該種組織或細(xì)胞的生理過程中發(fā)揮重要的作用[14]，所以推測L-BABP可能在雞脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要的作用。

本實驗室在生理條件下成功地從雞肝組織中分離出單個游離、高活性肝細(xì)胞，并通過檢測肝細(xì)胞中特異的蛋白L-FABP[15]和L-BABP基因，以及對所培養(yǎng)的肝細(xì)胞特有的形態(tài)學(xué)觀察和特征性的超微結(jié)構(gòu)的觀察，最終鑒定出其試驗材料是高濃度的雞原代肝細(xì)胞[16]，為進(jìn)一步研究L-BABP基因在肝中的功能研究提供可靠的試驗材料。

*.差異顯著(P<0.05)；**.差異極顯著(P<0.01)。下同*.Means differ significantly(P<0.05)；**.Means highly differ significantly(P<0.01).The same as below圖2 L-BABP基因干擾對脂類相關(guān)代謝基因變化的影響Fig.2 The effect of L-BABP interference on the expression levels of genes related to lipid metabolism

圖3 L-BABP基因過表達(dá)對相關(guān)脂類代謝基因變化的影響Fig.3 The effect of L-BABPoverexpression on expression levels of genes related to lipid metabolism

圖4 L-BABP基因干擾對培養(yǎng)基中脂類相關(guān)生化指標(biāo)變化的影響Fig.4 The effect of L-BABP interference on lipid changes related biochemical indicators in medium

圖5 L-BABP基因過表達(dá)對培養(yǎng)基中脂類相關(guān)生化指標(biāo)變化的影響Fig.5 The effect of L-BABPoverexpression on lipid changes related biochemical indicators in medium

晶體學(xué)結(jié)構(gòu)研究證實L-BABP可以結(jié)合膽汁酸[17]，推測L-BABP可能參與肝內(nèi)膽汁酸的運輸并在膽汁酸代謝途徑中發(fā)揮重要的作用。L-BABP基因且具有較強的膽汁酸結(jié)合能力，膽汁酸具有較高的溶解性，在膽固醇代謝中具有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，L-BABP基因表達(dá)量與培養(yǎng)基中的總膽固醇含量有顯著正相關(guān)關(guān)系，因此本研究推測L-BABP可能通過參與膽汁酸代謝途徑，間接參與到總膽固醇的代謝過程中起重要作用。同時，本研究發(fā)現(xiàn)，L-BABP基因表達(dá)量與培養(yǎng)基中的甘油三酯含量有負(fù)相關(guān)關(guān)系，禽類的脂肪沉積取決于甘油三酯水平，結(jié)合趙玉芳等發(fā)現(xiàn)該基因SNP位點顯著影響腹脂重、腹脂率和體重等性狀[10]，本研究推測L-BABP基因參與到禽類脂肪沉積過程中。

禽類肝內(nèi)脂肪酸代謝主要包括3個環(huán)節(jié)：肝內(nèi)脂肪合成、脂肪的脂解和肝合成的脂肪向肝外組織的轉(zhuǎn)運。禽類脂肪的轉(zhuǎn)運主要是通過血漿VLDL途徑實現(xiàn)的，本研究發(fā)現(xiàn)，L-BABP基因與APOAΙ基因表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，APOAΙ是高密度脂蛋白的重要組成成分，是體內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運過程的關(guān)鍵因子[18]，禽類脂肪的轉(zhuǎn)運主要是通過血漿VLDL途徑實現(xiàn)的，血漿中VLDL變化與雞腹部脂肪沉積顯著相關(guān)，APOAΙ基因與腹脂重和腹脂率顯著相關(guān)[19-21]，對血漿VLDL的合成具有調(diào)節(jié)作用[22]，同時，本研究發(fā)現(xiàn)L-BABP與膽固醇含量呈正相關(guān)關(guān)系，因此，本研究推測L-BABP基因通過影響ApoAΙ基因參與到膽固醇運輸過程中。

禽類肝內(nèi)脂類發(fā)生脂解作用，圍脂滴蛋白(Perilipin)在酯酶由胞液易位至脂滴表面的脂解反應(yīng)中發(fā)揮了重要的作用，基礎(chǔ)狀態(tài)下，Perilipin位于脂滴表面作為生理屏障，防止胞漿內(nèi)的脂酶接近脂滴，使甘油三酯不被脂肪酶水解。在脂解刺激下，脂滴發(fā)生斷裂，形成許多微脂滴，其總表面積增大，而Perilipin的量沒有顯著增加，因此PERILIPIN的屏蔽作用相對減弱[23]。在肝細(xì)胞中過表達(dá)PERILIPIN基因促進(jìn)甘油三酯的沉積[24]，填飼四川白鵝和朗德鵝的過程中，肝細(xì)胞中PERILIPIN基因表達(dá)以及甘油三酯都顯著升高[25]。本研究發(fā)現(xiàn)，干擾L-BABP基因使PERILIPIN基因表達(dá)量明顯上升；過表達(dá)L-BABP基因使PERILIPIN基因表達(dá)量顯著或極顯著下降。本研究推測L-BABP基因通過對PERILIPIN基因的影響，對脂解反應(yīng)和甘油三酯含量有一定的影響。

結(jié)合研究結(jié)果和文獻(xiàn)報道，本研究推測，L-BABP基因可能參與到禽類脂肪沉積過程，總膽固醇的代謝和脂解過程中，具體的研究需要進(jìn)一步深入研究。

4 結(jié) 論

本研究在雞肝細(xì)胞中進(jìn)行L-BABP基因功能研究，發(fā)現(xiàn)L-BABP基因?qū)poAΙ和PERILIPIN基因的表達(dá)量有顯著或極顯著的影響，L-BABP基因表達(dá)量與肝細(xì)胞中的甘油三酯和總膽固醇含量有存在負(fù)相關(guān)，這些結(jié)果為進(jìn)一步探討L-BABP基因在雞肝中脂類代謝過程中的作用以及該基因與脂類代謝相關(guān)基因間的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控關(guān)系提供了有益參考。

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(編輯 郭云雁)

The Effect ofL-BABPGene Expression on the Lipid Metabolism Genes and Cholesterol and Triglyceride in Chicken Hepatocytes

GAO Guang-liang1，2，3，4，ZHANG Qing-qiu1,2,3，LI Hui1，2，3*，WANG Qi-gui1，2，3，4*

(1.KeyLaboratoryofChickenGeneticsandBreedingofMinistryofAgriculture，Harbin150030，China； 2.KeyLaboratoryofAnimalGenetics，BreedingandReproduction，EducationDepartmentofHeilongjiangProvince，Harbin150030，China；3.CollegeofAnimalScienceandTechnology，NortheastAgriculturalUniverity，Harbin150030，China；4.ChongqingAcademyofAnimalScience，Chongqing402460,China)

This study was designed to investigate the role ofL-BABPgene in lipid metabolism of hepatocytes and the effect ofL-BABPgene on the genes related to lipid metabolism in chicken.L-BABPgene expression was downregulated by siRNA interference and upregulated via overexpression plasmids method.The genes expression level in chicken hepatocytes were detected at 24，36，48，60 and 72 h after transfection with the siRNAs and overexpression plasmids ofL-BABP.The results showed thatAPOAΙ，APOB，PERILIPINgene expression levels，the amount of cholesterol and triglyceride in the medium are significantly affected byL-BABPgene expression changes.Therefore，L-BABPmay involve in fat deposition，metabolism of total cholesterol and the process of lipolysis lipid metabolism.

chicken hepatocytes；L-BABPgene;APOBgene；APOAΙgene；PERILIPINgene；cholesterol；triglyceride

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.01.005

2014-05-16

國家自然科學(xué)基金項目(30771542)；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項目(CARS-42)；黑龍江省高等學(xué)?？萍紕?chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)項目(2010td02)

高廣亮(1987-)，男，吉林白城人，碩士，主要從事家禽遺傳育種研究，E-mail：guanglianggao@sina.com

*通信作者：李 輝，博士，教授，主要從事家禽遺傳育種研究，E-mail：lihui@neau.edu.cn；王啟貴，博士，教授，主要從事家禽遺傳育種研究，E-mail: wangqigui@hotmail.com

S831.2

A

0366-6964(2015)01-0032-09