禽流感病毒PA-N182與雞COPD蛋白互作的鑒定

王 巧，李慶賀，劉冉冉，鄭麥青，文 杰，趙桂蘋

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193)

禽流感病毒PA-N182與雞COPD蛋白互作的鑒定

王 巧，李慶賀，劉冉冉，鄭麥青，文 杰，趙桂蘋*

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193)

宿主蛋白質(zhì)廣泛參與流感病毒基因組在宿主體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制和翻譯。病毒蛋白質(zhì)和宿主蛋白質(zhì)的互作對(duì)于病毒的感染有重要影響。PA-N182是新發(fā)現(xiàn)的PA基因的轉(zhuǎn)錄形式，關(guān)于其宿主互作蛋白質(zhì)的研究目前尚少。COPD(coatomer protein complex，subunit delta)是負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)新合成蛋白質(zhì)從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)的基因，COPD基因敲除后細(xì)胞內(nèi)流感病毒滴度降低，表明COPD基因可能參與流感病毒的復(fù)制。COPD基因影響流感病毒感染的機(jī)制仍未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)構(gòu)建PA-N182和COPD過(guò)表達(dá)載體并共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，利用免疫共沉淀、Western blot的方法，證實(shí)在雞細(xì)胞內(nèi)H5N1禽流感病毒PA-N182蛋白和COPD蛋白有相互作用，表明COPD對(duì)流感病毒感染的影響可能與其和PA-N182蛋白的互作并影響PA-N182蛋白從宿主細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向高爾基體的轉(zhuǎn)運(yùn)有著密切的聯(lián)系。

雞；禽流感病毒；PA-N182；COPD；蛋白互作；免疫共沉淀

禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)屬甲型流感病毒，其遺傳物質(zhì)為單股負(fù)鏈RNA。禽流感病毒核酸包括HA(hemagglutinin)、NA(neuraminidase)、PB1(polymerase basic protein 1)、PB2(polymerase basic protein 2)、PA(polymerase acidic protein)、NP(nucleoprotein)、M1(matrix protein 1)和NS1(non-structure protein 1)等8個(gè)基因片段[1]。上述基因直接編碼或者其編碼的蛋白質(zhì)經(jīng)剪切或修飾后最多成為17種蛋白質(zhì)[2-3]。PA和PB1、PB2蛋白組成依賴于RNA的RNA聚合酶復(fù)合體，參與流感病毒的復(fù)制。PA蛋白具有調(diào)控蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、內(nèi)切酶活性、RNA帽子結(jié)構(gòu)結(jié)合及啟動(dòng)子結(jié)合等功能[4]。聚合酶復(fù)合體捕獲宿主細(xì)胞的mRNA后，PA蛋白發(fā)揮其核酸內(nèi)切酶活性切割宿主基因mRNA，用于病毒自身RNA的合成[5]。從不同的位置起始翻譯或移碼突變，PA基因除編碼PA蛋白外還編碼PA-X、PA-N155和PA-N182三種蛋白質(zhì)。PA-N182是從PA基因的第182位核苷酸(第13個(gè)AUG)起始翻譯的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。通過(guò)對(duì)11 000余株流感病毒毒株的序列分析發(fā)現(xiàn)99.3%的流感病毒毒株都有PA-N182蛋白翻譯起始所需要的AUG密碼子，不具有PA-N182翻譯起始所需AUG位點(diǎn)的流感病毒毒株多為禽類和豬的H9N2毒株[6]。

禽流感病毒自身并不具有復(fù)制能力，感染宿主后須借助宿主的細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)制。流感病毒的組成蛋白和宿主蛋白質(zhì)有著廣泛的相互作用，這些相互作用對(duì)于流感病毒的感染、復(fù)制和傳播有著極為重要的作用。流感病毒PB1和PB2蛋白和人細(xì)胞中的PP6蛋白(protein phosphatase 6)有直接作用，PP6蛋白的敲除導(dǎo)致由細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)輸出的病毒核糖核蛋白量減少，病毒復(fù)制減緩，病毒滴度降低[7]。TRIM22基因是流感病毒的抗性基因，TRIM22對(duì)流感病毒的抗性是通過(guò)和流感病毒NP蛋白的互作實(shí)現(xiàn)的，TRIM22促使NP蛋白發(fā)生泛素化并通過(guò)蛋白酶體途徑降解病毒的NP蛋白，使流感病毒喪失生物學(xué)活性[8]。PA-N182是2013年新發(fā)現(xiàn)的PA基因的新翻譯形式，其缺失了PA蛋白的N端。PA-N182在雞細(xì)胞內(nèi)有哪些互作蛋白質(zhì)及其生物學(xué)功能仍知之甚少。

COPD(coatomer protein complex，subunit delta)，又名ARCN1，是Coatomer復(fù)合物的組成亞基之一。Coatomer復(fù)合物參與細(xì)胞內(nèi)合成的蛋白質(zhì)從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的運(yùn)輸。COPD基因突變的小鼠由于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)恼系K導(dǎo)致毛色變淺，同時(shí)伴有運(yùn)動(dòng)失調(diào)等癥狀[9]。在多個(gè)全基因組RNAi掃描研究中都發(fā)現(xiàn)了COPD等Coatomer復(fù)合物亞基的表達(dá)被抑制后會(huì)阻礙流感病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，表明COPD是影響流感病毒侵染的重要宿主因子[10]。

在本研究中，作者利用蛋白質(zhì)免疫沉淀等技術(shù)分析了H5N1 AIVPA-N182基因和COPD基因的互作情況。我們?cè)陔u胚胎成纖維細(xì)胞系(DF1)中過(guò)表達(dá)了H5N1 AIV的PA-N182基因和雞COPD基因，并成功的利用免疫共沉淀技術(shù)富集了PA-N182蛋白，Western blot顯示PA-N182基因的免疫共沉淀產(chǎn)物可以檢測(cè)到COPD蛋白的存在，表明H5N1禽流感病毒PA-N182基因在雞細(xì)胞內(nèi)和COPD基因有相互作用。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、毒株及病毒cDNA的合成

DF1細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。本研究所用H5N1禽流感病毒毒株為A/Chicken/ShanXi/2/2006(H5N1)，毒株RNA由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所惠贈(zèng)。cDNA反轉(zhuǎn)錄參照PrimerScriptTMRT Master Mix試劑盒(TaKaRa，大連)操作說(shuō)明進(jìn)行，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 引物設(shè)計(jì)

根據(jù)Influenza research database公布的A/Chicken/ShanXi/2/2006(H5N1)的PA-N182基因序列、NCBI上公布的雞COPD基因(GenBank登錄號(hào)：NM_001079499.1)序列，利用Oligo6軟件設(shè)計(jì)引物(表1)，引物均包含NheⅠ和BamHⅠ酶切位點(diǎn)。引物由金維智生物科技(蘇州)有限公司合成。

表1 引物序列

Table 1 Primer sequences

引物Primer上游序列Upstream(5′?3′)下游序列Downstream(5′?3′)PA?N182CCCAAGCTGGCTAGCGCCACCATGGCCAG?TAGGGGTCTATGGGATTTTTGTAGTCGGATCCTTTCAGTGCATGT?GTGAGGAAGGACOPDATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCGCCAC?CATGGTGCTGTTGGCGGCAGCTGTGTGGTGGTGGTGGTGGTGGGATCCCAG?GATTTCATACTTGTCCACCAGG

1.3 蛋白質(zhì)表達(dá)載體的構(gòu)建

1.3.1 PCR擴(kuò)增 根據(jù)TransPCR SuperMix(全式金)操作說(shuō)明進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PA-N182和COPD基因的引物退火溫度都為55 ℃，35個(gè)循環(huán)。

1.3.2 目的基因與載體連接 雙酶切pcDNA3.1-3Flag-C載體和pcDNA3.1-6His-C載體，根據(jù)無(wú)縫連接試劑盒(Clonesmarter)說(shuō)明書(shū)分別與PCR產(chǎn)物PA-N182和COPD連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞后均勻涂在氨芐瓊脂糖平板上培養(yǎng)過(guò)夜，挑取單個(gè)菌落劃線并進(jìn)行PCR鑒定，選取陽(yáng)性菌落提取質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定并測(cè)序。

1.3.3 質(zhì)粒提取 液體LB培養(yǎng)基培養(yǎng)轉(zhuǎn)化后的陽(yáng)性單菌落12 h后，12 000 r·min-1離心15 min收集菌液，根據(jù)EndoFree?Plasmid Maxi Kit(Qiagen)說(shuō)明書(shū)操作步驟提取質(zhì)粒并測(cè)定濃度。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染

DF1細(xì)胞用含10%胎牛血清(Life Technologies)的DMEM高糖培養(yǎng)基(Hyclone)在37 ℃、5%CO2的條件下培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)至80%匯合度時(shí)轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染按Lipofectamine?3000試劑(Life Technologies)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用Opti-MEM?培養(yǎng)基稀釋Lipofectamine?3000試劑并充分混勻，用Opti-MEM?培養(yǎng)基稀釋DNA制成DNA預(yù)混液，在DNA預(yù)混液中添加P3000TM試劑，在每管已稀釋的Lipofectamine?3000試劑中加入稀釋的DNA(1∶1比例)，室溫孵育5 min，加入DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物至細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h后倒掉舊培養(yǎng)基，PBS沖洗后加0.25%的胰蛋白酶(Hyclone)于37 ℃培養(yǎng)箱消化5 min，輕晃培養(yǎng)皿顯微鏡下見(jiàn)細(xì)胞游離時(shí)立即加入2倍體積完全培養(yǎng)基終止消化。將細(xì)胞懸浮液加入到15 mL離心管中，1 000 r·min-1、離心5 min，去上清，用PBS重懸細(xì)胞并轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，1 000 r·min-1、離心5 min，去上清，細(xì)胞沉淀用于下游試驗(yàn)。

1.5 蛋白質(zhì)提取

向細(xì)胞中加RIPA裂解液并吹勻，置冰上30 min，每5 min輕彈一次離心管。13 000 r·min-1離心10 min，將上清轉(zhuǎn)入新的離心管后根據(jù)BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒(Thermo scientific，美國(guó))測(cè)蛋白質(zhì)濃度。

1.6 蛋白質(zhì)免疫沉淀

裂解液中加入預(yù)處理過(guò)的Protein G beads(Millipore)20 μL，于4 ℃搖床緩慢振蕩2 h，以去除非特異性雜蛋白質(zhì)，降低背景，離心后收集上清于新離心管中。取1/50裂解液(全蛋白質(zhì))保存至-80 ℃冰箱用作陽(yáng)性對(duì)照(Input)，剩余裂解液用作免疫沉淀(IP)即試驗(yàn)組。向用作IP的裂解液中加入anti-FLAG M2 beads(Sigma)，于4 ℃搖床緩慢振蕩過(guò)夜。離心收集瓊脂糖珠，棄上清，RIPA buffer清洗4次，54K buffer清洗2次后加入上樣緩沖液，96 ℃煮沸10 min，立即置于冰上，簡(jiǎn)短離心后吸取上清進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳。試驗(yàn)以鼠IgG作為陰性對(duì)照。

1.7 Western blot

蛋白經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜(Millipore)上，轉(zhuǎn)膜條件為350 mA恒流40 min。PVDF膜分別用相應(yīng)抗體孵育1 h后顯影。本試驗(yàn)所用抗體如下：抗Flag標(biāo)簽抗體-HRP(Cell Signaling Technology)和抗His標(biāo)簽抗體-HRP(Abcam)。

1.8 PA-N182與COPD蛋白互作鑒定的試驗(yàn)分組方法

將PA-N182和COPD表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置Flag空載體、His空載體、Flag空載體和His空載體、Flag空載體和COPD、PA-N182和His空載體5個(gè)對(duì)照組。

2 結(jié) 果

2.1PA-N182及COPD基因表達(dá)載體的構(gòu)建

以H5N1禽流感cDNA和雞肌肉組織cDNA分別擴(kuò)增PA-N182和COPD基因，所得的PCR產(chǎn)物大小均符合預(yù)期(圖1)。PCR擴(kuò)增所得目的片段用無(wú)縫連接試劑盒連入pcDNA3.1-C-Flag載體。轉(zhuǎn)化后所得陽(yáng)性質(zhì)粒雙酶切結(jié)果如圖2所示。COPD基因經(jīng)PCR擴(kuò)增后連入pcDNA3.1-C-His載體，其陽(yáng)性質(zhì)粒雙酶切結(jié)果如圖3所示。PA-N182和COPD載體插入片段均經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證無(wú)誤。上述載體將分別表達(dá)帶有Flag標(biāo)簽的PA-N182蛋白和帶有His標(biāo)簽的COPD蛋白。

圖1 PA-N182和COPD PCR產(chǎn)物凝膠電泳Fig.1 Gel electrophoresis results of PCR products of PA-N182 and COPD

所用內(nèi)切酶為NheⅠ和BamHⅠ。除載體外切出2條目的條帶是因?yàn)镻A-N182序列內(nèi)部有NheⅠ酶切位點(diǎn)NheⅠ and BamHⅠ enzyme were used.Two target bands were observed because of NheⅠ site in PA-N182 sequence圖2 PA-N182表達(dá)載體雙酶切鑒定Fig.2 Enzyme digestion results of PA-N182 expression vector

圖3 COPD表達(dá)載體的NheⅠ和BamHⅠ雙酶切鑒定Fig.3 NheⅠ and BamHⅠ enzyme digestion results of COPD expression vector

2.2PA-N182基因在DF1細(xì)胞的過(guò)表達(dá)及免疫共沉淀捕獲

將PA-N182表達(dá)載體轉(zhuǎn)染進(jìn)DF1細(xì)胞中，對(duì)照組并沒(méi)有檢測(cè)到目的蛋白質(zhì)，而試驗(yàn)組有PA-N182條帶，表明PA-N182正常表達(dá)(圖4)。以帶有Flag抗體的微珠和細(xì)胞裂解液孵育進(jìn)行免疫共沉淀反應(yīng)，所得產(chǎn)物用Flag抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，Input陽(yáng)性對(duì)照組和IP組都檢測(cè)到PA-N182蛋白，而IgG對(duì)照組則沒(méi)有檢測(cè)到PA-N182的表達(dá)(圖5)，表明成功且特異地捕獲了PA-N182蛋白。

PA-N182表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的DF1細(xì)胞提取蛋白質(zhì)后，取10 μg蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot。ACTB作為內(nèi)參10 μg total protein was used for Western blot，and ACTB was used as loading control圖4 轉(zhuǎn)染細(xì)胞后PA-N182表達(dá)的Western blot檢測(cè)Fig.4 Western blot detection of PA-N182 in transfected DF1 cells

PA-N182表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的DF1細(xì)胞提取蛋白質(zhì)后，以500 ng總蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫共沉淀，所得蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot。10 μg總蛋白質(zhì)用作Input。鼠IgG用于免疫共沉淀的陰性對(duì)照500 ng total protein was used for immunoprecipitation and protein pulled down by flag beads was used for Western blot analysis.10 μg total protein was used as Input.Mouse normal IgG was used as negative control for immunoprecipitation圖5 PA-N182的免疫共沉淀檢測(cè)Fig.5 Immunoprecipitation of PA-N182 in transfected DF1 cells

2.3 PA-N182與COPD蛋白互作的鑒定

試驗(yàn)組PA-N182和COPD表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞，對(duì)照組Flag空載體、His空載體、Flag空載體和His空載體、Flag空載體和COPD、PA-N182和His空載體，于轉(zhuǎn)染48 h收集細(xì)胞并提取蛋白質(zhì)。以帶有Flag抗體的微珠和上述6組樣品的細(xì)胞裂解液孵育后分別進(jìn)行免疫共沉淀反應(yīng)，所得的蛋白復(fù)合物分別用Flag和His標(biāo)簽的抗體進(jìn)行Western blot檢測(cè)。所得結(jié)果如圖6所示。用Flag抗體進(jìn)行的Western blot檢測(cè)結(jié)果中，在Input陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果中PA-N182和His空載體、PA-N182和COPD共轉(zhuǎn)染組中檢測(cè)到了PA-N182的表達(dá)，表明共轉(zhuǎn)染后PA-N182質(zhì)粒在DF1細(xì)胞中有明確的表達(dá)，而在IP組樣品中PA-N182和His空載體、PA-N182和COPD兩個(gè)共轉(zhuǎn)染組的Western blot顯示有清晰的PA-N182條帶，表明帶Flag標(biāo)簽的PA-N182蛋白被成功捕獲。

圖6 禽流感病毒PA-N182與雞COPD基因的蛋白質(zhì)互作Fig.6 Protein interaction between PA-N182 and chicken COPD

用His抗體進(jìn)行的Western blot檢測(cè)結(jié)果中，在Input陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果中檢測(cè)到PA-N182和COPD、Flag空載體和COPD兩個(gè)共轉(zhuǎn)染組有COPD的表達(dá)，表明帶有His標(biāo)簽的COPD表達(dá)載體表達(dá)正常。僅在PA-N182和COPD共轉(zhuǎn)染組的IP產(chǎn)物中檢測(cè)到COPD蛋白的存在，此結(jié)果表明在雞DF1細(xì)胞內(nèi)，COPD和H5N1禽流感病毒的PA-N182蛋白有相互作用。

3 討 論

流感病毒自身并不具有復(fù)制能力，病毒的復(fù)制須借助宿主的細(xì)胞系統(tǒng)。流感病毒侵入細(xì)胞后，病毒基因組進(jìn)入宿主細(xì)胞核，利用宿主細(xì)胞系統(tǒng)完成病毒基因組的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制后進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)利用宿主蛋白質(zhì)翻譯機(jī)制完成蛋白質(zhì)翻譯，隨后形成病毒核糖核蛋白體(vRNP)，再在宿主細(xì)胞內(nèi)完成病毒的包裝和組裝后形成新的病毒粒子并釋放出細(xì)胞[11]。和病毒蛋白質(zhì)有相互作用的宿主蛋白質(zhì)對(duì)于病毒的感染和復(fù)制具有至關(guān)重要的影響。禽流感病毒在感染過(guò)程中與宿主細(xì)胞的多個(gè)信號(hào)通路及蛋白質(zhì)有相互聯(lián)系，如NF-κB信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路和TLR/RIG-I信號(hào)通路等[12]。

本研究在體外共表達(dá)了禽流感病毒PA-N182和雞COPD蛋白，利用親和純化、Western blot技術(shù)檢測(cè)了禽流感病毒PA-N182蛋白和雞COPD蛋白的互作情況，在雞胚胎成纖維細(xì)胞中證實(shí)了PA-N182和COPD的相互作用。真核細(xì)胞的大部分肽段在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核糖體上由mRNA翻譯而成，肽段在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上經(jīng)過(guò)進(jìn)一步加工形成較成熟的蛋白質(zhì)，隨后蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基體進(jìn)行相應(yīng)的修飾后成為成熟的蛋白質(zhì)。COPD是Coatomer復(fù)合物的組成亞基，Coatomer復(fù)合物參與細(xì)胞內(nèi)合成的蛋白從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的運(yùn)輸[13]。研究證實(shí)對(duì)COPD基因進(jìn)行RNA干擾后的細(xì)胞被流感病毒侵染后，細(xì)胞內(nèi)的病毒滴度降低，表明了COPD基因在流感病毒復(fù)制過(guò)程中的積極作用[10]。COPD基因可能參與流感病毒蛋白在宿主細(xì)胞內(nèi)翻譯后從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的轉(zhuǎn)運(yùn)，這一過(guò)程被阻斷后可能會(huì)影響病毒蛋白質(zhì)翻譯后向高爾基體的轉(zhuǎn)運(yùn)、病毒蛋白質(zhì)的翻譯后修飾及病毒蛋白質(zhì)的形成，進(jìn)而抑制病毒的復(fù)制。

本研究證實(shí)了H5N1禽流感病毒PA-N182和雞COPD蛋白在細(xì)胞內(nèi)有相互作用，表明病毒PA-N182可能是COPD所轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白之一。N端缺失的PA-N182并不具備PA基因所具有的RNA聚合酶活性，PA-N182可能并不參與病毒基因的轉(zhuǎn)錄而僅和病毒蛋白的復(fù)制有關(guān)。PA-N182在宿主體內(nèi)的正常翻譯和轉(zhuǎn)運(yùn)與COPD基因密切相關(guān)。COPD對(duì)流感病毒侵染的影響可能通過(guò)其和PA-N182蛋白的互作及影響PA-N182蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)現(xiàn)。PA-N182是新發(fā)現(xiàn)的PA基因的N端缺失形式，對(duì)于其功能的研究報(bào)道較少，本研究揭示了PA-N182和COPD的互作，為揭示PA-N182蛋白的功能提供了新的線索。

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(編輯 白永平)

Identification of the Interaction of Avian Influenza Virus PA-N182 and COPD Protein of Chicken

WANG Qiao，LI Qing-he，LIU Ran-ran，ZHENG Mai-qing，WEN Jie，ZHAO Gui-ping*

(InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China)

Host fators are widely involved in transcription，duplication and translation of influenza virus genome，and host factors are reruired for the infection of influenza virus.PA-N182 is a recently identified trunctated form of influenzaPAgene，and little is known about its host interaction factors.COPD(coatomer protein complex，subunit delta)，with the function of translocation of newly translated peptides from endoplasmic reticulum to Golgi apparatus，has an essential role in duplication of influenza virus and its knock down results in decrease of virus titer.We co-transfected PA-N182 and COPD expression vectors into chicken DF1 cells and found that PA-N182 interacted with COPD by the method of immunoprecipitation and Western blot.Our results reveal that COPD might affect the infection of influenza virus through ineracting with PA-N182 and translating it from endoplasmic reticulum to Golgi apparatus.

chicken；avian influenza virus；PA-N182；COPD；protein interaction；immunoprecipitation

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.10.025

2015-01-21

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS04)；國(guó)家科技支撐項(xiàng)目(2011BAD28B03)；國(guó)家肉雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-42)

王 巧(1991-)，女，山東日照人，碩士生，主要從事家禽抗病育種研究，E-mail：17746516692@163.com

*通信作者：趙桂蘋，研究員，E-mail：zhaoguiping@caas.cn

S813.1；S858.315.3

A

0366-6964(2015)10-1899-06