微生物檢測(cè)中培養(yǎng)基的制備及注意事項(xiàng)

劉榮華

(河北省秦皇島盧龍縣疾病預(yù)防控制中心 066400)

培養(yǎng)基是提供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料，有液體、半固體或固體形式，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基做得好壞，對(duì)微生物檢測(cè)工作是很重要的。培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確都直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的正確與否。

1 培養(yǎng)基制備前期準(zhǔn)備

對(duì)新買(mǎi)的培養(yǎng)基，一定要由專(zhuān)人做好接收工作，應(yīng)仔細(xì)核對(duì)培養(yǎng)基的名稱(chēng)、規(guī)格、數(shù)量、成分、外觀特征、批號(hào)、保質(zhì)期是否符合要求，并做好記錄，過(guò)期的培養(yǎng)基一定不能用。

2 培養(yǎng)基的制備

2.1 調(diào)配按照培養(yǎng)基的配方，準(zhǔn)確稱(chēng)取各種成分于燒杯中。稱(chēng)量時(shí)一定要用專(zhuān)用的角匙，避免交叉污染。干粉培養(yǎng)基易吸潮，應(yīng)注意防潮，用完馬上蓋好瓶口。如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

2.2 溶化制備培養(yǎng)基常用蒸餾水，因蒸餾水不含雜質(zhì)，也可用自來(lái)水，但是用自來(lái)水配制的培養(yǎng)基因水中常含有鈣、鎂等，可與蛋白胨或肉浸液中的磷酸鹽生成不溶解性的磷酸鈣或磷酸鎂，經(jīng)高壓滅菌后，可析出很多沉淀。因此，若用自來(lái)水配制培養(yǎng)基，最好先將水煮沸，使部分鹽類(lèi)沉淀經(jīng)過(guò)濾后方可使用。溶化時(shí)不得用鐵鍋或銅鍋，以防有金屬離子混入培養(yǎng)基中，影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。加熱溶化過(guò)程中應(yīng)隨時(shí)攪拌，容器的大小要適當(dāng)，注意防止燒焦和外溢。燒糊的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被破壞，或可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)燒焦，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基不能使用，應(yīng)重新制備。對(duì)于瓊脂類(lèi)培養(yǎng)基最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。

2.3 矯正PH值PH比色計(jì)應(yīng)準(zhǔn)確可靠，也可用PH試紙來(lái)矯正。微生物必須在適宜的PH范圍內(nèi)才能生長(zhǎng)繁殖，必須按各種不同培養(yǎng)基的要求準(zhǔn)確測(cè)定PH值。培養(yǎng)基配方要求的PH值為滅菌或消毒后的PH值。培養(yǎng)基在高壓滅菌后，其PH值約降低0.1～0.2，故矯正時(shí)應(yīng)比實(shí)際需要的PH值高0.1～0.2。培養(yǎng)基制備過(guò)程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的PH值，應(yīng)用1mol/L NaOH或1mol/L HCL調(diào)整。注意PH不要調(diào)過(guò)頭，以避免回調(diào)或反復(fù)調(diào)，否則會(huì)影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。

2.4 過(guò)濾澄清培養(yǎng)基配成后一般都有沉渣或混濁，需過(guò)濾澄清使其清晰透明方可使用。液體培養(yǎng)基常用濾紙過(guò)濾，固體培養(yǎng)基如系瓊脂培養(yǎng)基，于加熱融化后需趁熱用兩層紗布中夾脫脂棉過(guò)濾，也可采用自然沉淀法。

2.5 分裝根據(jù)不同的需要，可將制好的培養(yǎng)基分裝入不同容量的三角燒瓶、試管等，管口塞上棉塞，用牛皮紙包扎管口。分裝的量不宜超過(guò)容器的2/3，以免滅菌時(shí)外溢。分裝過(guò)程中，注意不要使培養(yǎng)基沾在管(瓶)口上，以免沾污棉塞而引起污染。

2.6 滅菌不同成分、性質(zhì)的培養(yǎng)基，可采用不同的滅菌方法。一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌，即高壓蒸氣滅菌法，通常是121℃15min，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照生產(chǎn)商提供的說(shuō)明滅菌。配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長(zhǎng)繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋要定期進(jìn)行檢定，每次滅菌采用化學(xué)變色紙對(duì)滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。

2.7 檢定(即質(zhì)量的檢查)每批培養(yǎng)基制成后必須經(jīng)檢定后方可使用。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色，一般培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀，檢定時(shí)從每批制備的培養(yǎng)基中選取部分培養(yǎng)基放在37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)后，確定無(wú)雜菌生長(zhǎng)即可待用。同時(shí)用已知菌種檢查在此培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)繁殖及生化反應(yīng)情況，符合要求者方可使用。

3 培養(yǎng)基的保存

制備好的培養(yǎng)基，不宜保存過(guò)久，以少量勤做為宜。滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻，避免長(zhǎng)時(shí)間保存在高壓鍋內(nèi)，造成過(guò)度滅菌，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分。含染料的培養(yǎng)基應(yīng)避光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完，應(yīng)于冷藏保存，如果保存時(shí)間超過(guò)2天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類(lèi)培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過(guò)2個(gè)星期，應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)［2］。每批培養(yǎng)基應(yīng)注明制作日期，平日少量分裝的培養(yǎng)基均宜存放于4℃冰箱內(nèi)。

4 討論

制備培養(yǎng)基是細(xì)菌培養(yǎng)中不可缺少的工作，培養(yǎng)基的好壞，直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，在微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作中舉足輕重。如果在培養(yǎng)基制備過(guò)程中疏忽任何一個(gè)細(xì)小環(huán)節(jié)，都將導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果科學(xué)性、客觀性的偏離。因此，在日常工作中要不斷完善和提高培養(yǎng)基的配制水平，認(rèn)真對(duì)待每一個(gè)環(huán)節(jié)，為檢測(cè)工作提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基，以便于保證檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)有效。

［1］王彩玉.常用細(xì)菌培養(yǎng)基制備及注意事項(xiàng).衛(wèi)生職業(yè)教育.2004，(23)∶102 －102.

［2］饒紅，陳廣全，馮騫，等.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的質(zhì)量保證措施.檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2006，6(4)∶31 ～33.