配組篩檢紅細胞不規(guī)則抗體在新生兒溶血病中的應用

張靜思，汪 萍

(1.?？谑械谒娜嗣襻t(yī)院檢驗科，海南 ?？?571100；2.?？谑腥嗣襻t(yī)院檢驗科，海南 ?？?570208)

配組篩檢紅細胞不規(guī)則抗體在新生兒溶血病中的應用

張靜思1，汪 萍2

(1.?？谑械谒娜嗣襻t(yī)院檢驗科，海南 ?？?571100；2.?？谑腥嗣襻t(yī)院檢驗科，海南 海口 570208)

目的 評價配組篩檢紅細胞與混合O型紅細胞篩檢新生兒溶血病患兒的效果。方法收集?？谑械谒娜嗣襻t(yī)院2013年9月至2014年7月間收治并確斷為新生兒溶血癥458例患兒及母體的EDTA-2K抗凝血標本，每組份樣本分成A、B兩份，分別使用配組篩檢紅細胞法和混合O型紅細胞篩檢法對血液樣本進行血型鑒定、紅細胞分散試驗、紅細胞直接抗球蛋白試驗、血漿及紅細胞放散液中抗體的檢測及不規(guī)則抗體特異性鑒定，對比新生兒溶血病患兒不規(guī)則抗體的檢驗結(jié)果，記錄相關數(shù)據(jù)并進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果本組458例新生兒溶血癥患兒的EDTA-2K抗凝血實驗樣本，母嬰ABO血型不合共檢出195例，115例在紅細胞放散液中出現(xiàn)致敏性，98例在新生兒血漿中檢出具有致敏性。A組樣本中檢出抗c 1例，抗D 1例，抗cE 2例，抗E 2例，抗M 8例，共檢不規(guī)則抗體14例，檢測準確率為100%，其中；B組樣本中檢出不規(guī)則抗體8例，檢測準確率為57.1%；A組檢出準確率顯著高于B組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其中抗c 1例，抗D 1例，抗cE 2例，抗E檢出1例，抗M檢出3例；在出現(xiàn)漏檢的抗M中兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論配組篩檢紅細胞檢驗新生兒溶血癥患兒不規(guī)則抗體準確率好、操作簡便，整體效果要優(yōu)于目前常用的混合O型紅細胞篩檢。

配組篩檢紅細胞；混合O型紅細胞篩檢；新生兒溶血；不規(guī)則抗體

新生兒溶血癥(Hemolytic disease of the newborn，HDN)是指由于母嬰血型不合而引起的同族免疫性溶血，可導致胎兒出生后體內(nèi)免疫蛋白破壞紅細胞，出現(xiàn)一系列溶血性貧血、黃疸等疾病[1]。其發(fā)病具體原因是胎兒獲得了父方含有而母方缺乏的ABO血型或稀有血型抗原，通過輸血或妊娠誘導母體產(chǎn)生相應IgG類抗體，若再次妊娠，IgG透過胎盤進入胎兒體內(nèi)通過血液循環(huán)，大量破壞新生兒體內(nèi)的紅細胞，嚴重危害母嬰健康。據(jù)統(tǒng)計，我國溶血患兒病因絕大多數(shù)集中在ABO血型不合，Rh血型不合者所占比例很小，MN、Kell血型不合發(fā)病罕見[2]。本研究通過使用配組篩檢法和混合O型紅細胞篩檢法對于不規(guī)則抗體的篩檢效果進行比較，分析、驗證其臨床應用價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 資料來源 收集海口市第四人民醫(yī)院2013年9月至2014年7月間收治并確斷為新生兒溶血癥的458例患兒及母體的EDTA-2K抗凝血標本5 ml，3000 r×3 min離心備用。

1.2 材料及設備 抗C3d和抗IgG的單克隆抗體試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司生產(chǎn))；血型鑒定試劑盒(武漢致誠信達科技開發(fā)有限公司生產(chǎn))的血型鑒定試劑盒；MK100-4A微孔板恒溫孵育器(上海久世環(huán)?？萍加邢薰旧a(chǎn))；J6HC離心機(美國貝克曼公司生產(chǎn))；抗人球蛋白檢測卡(微柱凝膠法，商品名：基立福DG Gel抗人球蛋白卡，西班牙Diagnostic Grifols,S.A.出品)；篩檢紅細胞和譜紅細胞(上海譜振生物科技有限公司生產(chǎn))；ABO紅細胞(醫(yī)檢科制備)。

1.3 方法 將血液樣本離心后等分為A、B兩份，A組使用配組篩檢紅細胞法進行檢驗；B組使用混合O型紅細胞篩檢法進行檢驗。按實驗所需成分及含量對各組別樣本分別進行血型鑒定、紅細胞直接抗球蛋白試驗、紅細胞分散試驗、放散液抗體的檢測及不規(guī)則抗體特異性檢測。

1.3.1 血型鑒定 使用血型鑒定試劑盒對所有樣本進行血型鑒定，若檢出母親為Rh陰性血(或含有其他不規(guī)則抗體)，則繼續(xù)進行特異性抗體對應紅細胞抗原的檢測。

1.3.2 紅細胞直接抗球蛋白實驗(DAT) 取100 μl血清標本與100 μl 0.2 mol/L巰基乙醇混勻，于MK100-4A微孔板恒溫孵育器37℃孵育1 h，孵育完成后取稀釋液進行倍比稀釋制樣，1:8、1:16二倍比稀釋直至1:1 024，共八個稀釋梯度。每梯度取100 μl進行顯微觀察凝集，以顯微觀察時觀察到+的最高稀釋度作為抗體效價進行記錄。

1.3.3 O型篩選紅細胞的制備 通過血液中心選取健康O型血進行EDTA-2K抗凝血離心，取紅細胞于試管中，生理鹽水3 400 r/min，1 min離心洗滌3次得壓積紅細胞，棄上清液，取30 μl游離紅細胞和1 ml生理鹽水混勻于Ⅰ號的試管中，得Ⅰ號O型3%的篩選紅細胞；同法制備Ⅱ號、Ⅲ號O型3%的篩選紅細胞。

1.3.4 紅細胞放散試驗 將以上所得紅細胞用6℃生理鹽水洗滌5次，在洗滌后的壓積紅細胞中加入等量生理鹽水，置56℃水浴箱中7～8 min，每2 min搖動混勻一次，促使抗體從抗原抗體復合物上分離下來。取出后立即高速離心，3 000 r/min×2 min；取上清液(一般呈櫻紅色)，與已知紅細胞試驗。

1.3.5 血漿及紅細胞放散液中不規(guī)則抗體的檢測 對每個樣本的血清及血漿樣品采用配組篩檢紅細胞檢測和混合O型血紅細胞篩檢檢測[3]，使用微柱凝膠抗球蛋白技術標記不規(guī)則抗體并進行記錄[4]。

1.3.6 不規(guī)則抗體鑒定 對檢出含有不規(guī)則抗體的樣本，進行譜紅細胞反應鑒別。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用PEMS3.1軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

本組458例新生兒溶血癥患兒的EDTA-2K抗凝血實驗樣本，母嬰ABO血型不合共檢出195例，115例在紅細胞放散液中出現(xiàn)致敏性，98例在新生兒血漿中檢出具有致敏性。A組樣本中檢出抗c 1例，抗D 1例，抗cE 2例，抗E 2例，抗M 8例，共檢出不規(guī)則抗體14例，檢測準確率為100%，其中；B組樣本中檢出不規(guī)則抗體8例，檢測準確率為57.1%，其中抗c 1例，抗D 1例，抗cE 2例，抗E檢出1例，抗M檢出3例。A組檢出準確率明顯高于B組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且在出現(xiàn)漏檢的抗M中兩組比較差異也有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3 討 論

血型不規(guī)則抗體是指抗A、抗B以外的血型抗體，主要是經(jīng)輸血或妊娠產(chǎn)生的免疫性抗體(多為IgG抗體)[5]。其在正常人群中的檢出率在0.7%～1.8%之間。由于輸血技術的提高及ABO血型系統(tǒng)快速檢測的普及，ABO血型輸血機制已經(jīng)較為完善，臨床上出現(xiàn)輸血反應的現(xiàn)象已經(jīng)很罕見。有研究表明[6]，多數(shù)輸血反應出現(xiàn)于體內(nèi)含有不規(guī)則抗體的患者中，且不規(guī)則抗體導致的輸血反應已躍居到溶血及輸血事故原因的首位。不規(guī)則抗體會由于配型不合可以誘發(fā)抗原抗體反應，引起自身免疫反應，破壞體內(nèi)紅細胞，產(chǎn)生溶血性輸血反應；且少量輸血不僅起不到治療應有的效果，還可導致患者出現(xiàn)不良反應，若大量輸血極易危及患者生命。有學者認為，如孕婦體內(nèi)存在不規(guī)則抗體，極大增高了新生兒溶血病的發(fā)生概率，不僅影響新生兒臟器的發(fā)育，還可能對新生兒的智力發(fā)育造成影響，嚴重的甚至會導致新生兒的死亡[7]。所以，對孕婦不規(guī)則抗體篩選是必要而且必須的，對于提高新生兒質(zhì)量和對家庭的生活影響意義重大。

本研究對母嬰血型不合的458例新生兒溶血病患兒進行了紅細胞放散液及母嬰血漿不規(guī)則抗體檢測及鑒定，在A組樣本中檢出不規(guī)則抗體14例，檢測準確率為100%，B組在樣本中檢出不規(guī)則抗體8例，檢測準確率為57.1%，A組檢測準確率顯著高于B組(P＜0.05)；且兩組在出現(xiàn)漏檢的抗M中比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)表明前者對抗M的敏感性較高，而后者容易對抗M造成漏檢。我國漢族人群中M的基因頻率一般在40%～48%之間，使用混合O型紅細胞篩檢法進行檢測時隨機3人份放散液混合后M抗原的概率約在87%左右，仍然有13%的情況存在無M抗原的可能性。雖然我們可以通過放散液人數(shù)制備更多人份的混合O型紅細胞的樣品，但這樣做在增加各種紅細胞抗原表達的概率的同時也在一定程度上稀釋了有效抗原的量，相當于對樣本的進一步稀釋，這也會影響到不規(guī)則抗體的檢出。因此，配組篩檢法可避免一些樣本由于采用混合O型紅細胞法出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象的發(fā)生。

通過本研究，筆者認為對不規(guī)則抗體的篩選主要存在以下三個方面的意義：(1)通過對獻血者的血液及血液制品進行抗體篩查，可避免含不規(guī)則抗體的血液輸注給出血或其他原因有輸血需求的孕婦，避免導致孕婦出現(xiàn)溶血反應，在減少醫(yī)療資源占用的同時也避免了孕婦家屬的擔心，同樣也可以減少對寶貴的血液資源浪費?？蓪⒂胁灰?guī)則抗體的血液制備成抗體血清，用于稀有血型的檢測。(2)對有輸血需求的孕婦進行不規(guī)則抗體篩查，可以有助于對血液及血液制品進行選擇，從兩條途徑避免孕婦接觸到異種抗原，防止體內(nèi)產(chǎn)生相應過敏反應或使機體致敏，能夠有效防止妊娠期孕婦突然出現(xiàn)新生兒溶血現(xiàn)象的發(fā)生，保證輸血安全和母嬰安全。(3)在孕婦進行體檢時進行不規(guī)則抗體的篩查，可以盡早發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，在孕期對孕婦和新生兒都能針對新生兒溶血的預防和指導，減少對孕婦和新生兒帶來的傷害，提高新生兒的身體素質(zhì)[8]。

綜上所述，配組篩檢紅細胞準確率好、操作簡便的方法檢驗新生兒溶血癥患兒不規(guī)則抗體的效果整體要好于目前常用的混合O型紅細胞篩檢，對防抗M的漏檢具有預防作用，具有重要的臨床意義。

[1]張東東.不規(guī)則抗體篩查在臨床輸血中的意義[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2011,32(11):1263-1264.

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[3]林華峰,包廣杰.孕婦血型不規(guī)則抗體檢測在新生兒溶血病預防中的意義[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2012,33(6):764-765.

[4]杜忠斌,劉俊紅,李惠霞,等.微柱凝膠不規(guī)則抗體篩查方法的改進[J].實用醫(yī)技雜志,2014,21(1):56-57.

[5]曹文平.配組篩檢紅細胞與混合O型紅細胞篩檢新生兒溶血病患兒不規(guī)則抗體效果對比[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2011,13(8): 68-69.

[6]陳繼芬,馬祥斌.不規(guī)則抗體的檢測和配血方法的探討[J].臨床血液學雜志,2012,25(2):235-236.

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R722.18

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1003—6350（2015）17—2627—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.17.0954

2015-03-31)

張靜思。E-mail：xu9604@126.com