三種HIV 抗原/抗體檢測方法對HIV 早期感染檢測的診斷研究

?？》?(天水四〇七醫(yī)院，天水 741000)

艾滋病是一種全球性的嚴重危害人類健康的傳染病，其主要通過輸血、性接觸、吸毒等途徑傳播，由于艾滋病會造成全身免疫力的下降，從而引發(fā)多種并發(fā)癥而死亡，目前臨床多用抗原抗體檢查方法對HIV 病毒進行篩查，具有敏感性高、特異性強的特點，但是第三代HIV 抗體檢測試劑對HIV 抗體產(chǎn)生前的感染無法診斷［1，2］，第四代HIV 檢測試劑檢測HIV p24 抗原和抗體，大大地提高了檢測的效能，不同試劑盒有不同的檢測效果，本研究分別使用兩個第四代HIV 檢測試劑盒對檢驗中心懷疑HIV 感染的血液樣本進行檢測，結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010 年1 月至2013 年8 月送至本實驗中心共采集吸毒人員及性服務(wù)工作者的血液標(biāo)本3 863 份，血液標(biāo)本的分離、保存、離心均嚴格按照實驗室相關(guān)規(guī)范進行操作。BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤(購自美國的BBI 公司)4 套，每套含有4～8 份系列樣品。分別使用兩種第4 代HIV 試劑盒(英國Abbott公司生產(chǎn)的Murex HIV Ag/Ab 檢測試劑:編號為A;荷蘭Organon 公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg/Ab 檢測試劑:編號為B)，一種第3 代HIV 試劑盒［英國Abbott 公司生產(chǎn)的Murex HIV-1.2.O 試劑:(編號為C)］及HIV 間接熒光抗體試驗試劑盒［普瑞麥迪(北京)實驗室技術(shù)有限公司］對上述血液樣本和BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤進行檢測。

1.2 試劑與儀器 羅氏ELECSYS 2010 變色龍酶免儀，雅培Axsym 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，Bio-Rad MODEL1575 型洗板機，法國梅里埃公司(bioMerieux)mini-VIDAS 分析儀。

1.3 實驗方法 對所有的血液樣本分別使用兩種試劑盒通過快速法與ELISA 法平行檢測HIV，檢測結(jié)果如果不同，將血液標(biāo)本及陽性血樣進行雙孔復(fù)試，確定HIV 的感染狀態(tài)。檢測完成后，所有樣品使用間接熒光抗體試驗法重新確認，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。對初次檢測出陽性樣本的采樣時間進行統(tǒng)計，比較兩種試劑盒檢測的窗口期的差異，并對BBI 轉(zhuǎn)陽血清盤檢測結(jié)果進行描述。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 在SPSS10.0 中進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料建立四格表并采用χ2檢驗比較幾種試劑盒檢測結(jié)果是否存在差異，檢驗水準(zhǔn)取α=0.05。靈敏度=篩檢試驗陽性人數(shù)/確診陽性人數(shù)×100%，特異度=篩檢試驗陰性人數(shù)/確診陰性人數(shù)×100%，誤診率=1 -特異度，漏診率=1-靈敏度。

2 結(jié)果

2.1 試劑盒A 和B 檢測HIV 的診斷學(xué)評價指標(biāo) P24 檢測3 863 份血液樣本共確診54 份HIV 感染陽性樣本，試劑盒A 和B 對3 863 份樣本進行同步檢測，結(jié)果:試劑盒A、B 均完全檢出54 例HIV 感染陽性的血液樣本，試劑A 檢出的靈敏度=100%，特異度=99.61%，漏診率=0，誤診率=0.39%;試劑盒B 檢出的靈敏度=100%，特異度=99.37%，漏診率=0，誤診率=0.63%。詳見表1、2。

2.2 兩種第4 代試劑檢出結(jié)果比較 試劑A 和試劑B 檢出結(jié)果進行比較，結(jié)果差異不顯著(P ＞0.05)。詳見表3。

2.3 不同試劑對不同BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤檢出窗口期的情況 分別對4 套BBI 陽轉(zhuǎn)血清盤采用A、B、C、P24 進行檢測，不同廠家生產(chǎn)的第4 代HIV 抗體試劑盒A、B，第三代試劑盒C 檢測早期HIV 感染的窗口期存在差別，A 試劑、B 試劑分別較C 試劑的檢測窗口期提前5.5 和3.7 d，但是與P24 抗原試劑盒的檢出窗口期卻滯后4.25 至6.05 d。各種試劑盒檢測HIV 感染的窗口期詳見表4。

表1 試劑A 與P24 檢出結(jié)果的比較Tab.1 Comparison of results of A and P24

表2 試劑B 與P24 檢出結(jié)果的比較Tab.2 Comparison of results of B and P24

表3 兩種第4 代試劑檢出結(jié)果比較Tab.3 Comparison of detection results of fourth two generation reagents

表4 各種試劑盒檢測HIV 感染的窗口期Tab.4 All kits window period of HIV infection

3 討論

艾滋病，又稱獲得性免疫缺陷綜合征，是反轉(zhuǎn)錄病毒HIV 感染導(dǎo)致全身免疫系統(tǒng)的破壞，促成很多疾病的發(fā)生，可以通過接觸黏膜組織的口腔、生殖器、肛門等或者接觸帶有病毒的血液、精液等分泌物物而傳染。艾滋病累及消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等全身多個器官，并且造成病毒、細菌、真菌等多種感染和惡性腫瘤，很多患者因為得不到及時的治療而死亡或者殘疾，病毒感染者不僅自身受到社會的歧視，還可能會造成病毒的繼續(xù)傳播，因此對病毒感染者進行早期診斷是治療和防護艾滋病的重要手段。

1985 年針對艾滋病病毒(HIV)抗體的診斷試劑問世，經(jīng)過不斷的改進已經(jīng)發(fā)展至第四代，診斷試劑的敏感性和特異性不斷提高［3］。涉及的檢測方法主要為HIV 抗體檢測、HIV 抗原抗體聯(lián)合檢測、HIV 核酸檢測等［4］，HIV 檢測的窗口問題依然是技術(shù)人員面臨的難題，也是HIV 早期診斷的難題［5］。第三代試劑使用ELISA 檢測，敏感性和特異性較第一代和第二代有所提高，由于抗體的產(chǎn)生需要有一定的過程，無法檢測到抗體產(chǎn)生前的早期HIV 感染［6］。第四代試劑盒在第三代的基礎(chǔ)上，可以同時檢測抗體和P24 抗原，大大縮短了窗口期，檢測時間較第三代診斷試劑提前了8～10 d［7］。但是不同的公司的診斷試劑的靈敏度和特異性是否存在差別，選擇合適的診斷試劑對患者至關(guān)重要。

目前市場上第四代檢測試劑主要由法國BioMerieux 公司、美國Abbott 公司、荷蘭Organon 公司等生產(chǎn)，在本研究中分別使用英國Abbott 公司生產(chǎn)的Murex HIV Ag/Ab 檢測試劑和荷蘭Organon 公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg/Ab 檢測試劑對血清樣本進行檢測，結(jié)果顯示3 863 份血清樣本，A 試劑、B 試劑和P24 抗原檢測都檢出了54 份陽性血清樣本，A、B 試劑盒檢測的靈敏度都是100%，顯示第四代試劑靈敏度很高，可能原因為:第四代試劑不是抗原和抗體檢測的簡單相加，而是將HIV-1/2 抗體檢測和P24 抗原檢測兩個反應(yīng)集于一個微孔內(nèi)同時反應(yīng)，使得一次實驗可以檢測兩種標(biāo)志物，同時在P24 抗原檢測系統(tǒng)中加入了生物素-鏈親和素放大系統(tǒng)，使得ELISA 的反應(yīng)靈敏度進一步加大，同時不影響P24 抗原的檢測［8］。本研究中顯示B 試劑的漏診率為0.63%，高于A 試劑的漏診率0.39%，但是兩者比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，這種情況可能與第四代試劑盒本身將兩種檢測中和在一個實驗中的設(shè)計有關(guān)，同一個實驗結(jié)合兩類不同的成分，比單獨檢測抗原或者抗體增加了非特異反應(yīng)的潛在風(fēng)險，從而影響了檢測的特異性，不同的公司對抗原-抗體兩種成分的結(jié)合可能存在不同，導(dǎo)致兩者檢測結(jié)果的差異［9］。

HIV 陽轉(zhuǎn)血清盤是評價HIV 早期感染檢測方法的有效工具，可以反映各種試劑檢測的窗口期［10］。本研究結(jié)果顯示第四代試劑盒A、B 的窗口期較第三代試劑盒明顯縮短，卻較P24 抗原檢測延遲4.25～6.0 d，因此說明對于HIV 患者的早期診斷，第四代試劑盒可以檢測到艾滋病毒的早期感染，雖然二者沒有顯著的差異，A 試劑的窗口期較B 試劑的窗口期短，可能A 試劑的檢測效果較好。

綜上所述，采用第四代HIV 檢測試劑盒對早期HIV 感染進行診斷是行之有效的策略，但是隨著艾滋病疫情的蔓延，處于感染早期的被檢者將增多，若此類病例漏檢，將會因為得不到及時的管理而造成二代傳播，因此使用檢測效果好的第四代試劑同時對檢測陰性的患者進行免疫印跡確認是防止漏檢的重要策略。

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