某地區(qū)女性生殖道念珠菌感染的病原學(xué)調(diào)查

董 晶，楊 虹，吳 波

(北京大學(xué)深圳醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科；2.皮膚科，廣東深圳 518036)

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·論 著·

某地區(qū)女性生殖道念珠菌感染的病原學(xué)調(diào)查

董 晶1，楊 虹1，吳 波2△

(北京大學(xué)深圳醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科；2.皮膚科，廣東深圳 518036)

目的 探討該地區(qū)女性生殖道念珠菌(VVC)感染的病原學(xué)分析。方法 對2013年5月至2014年4月該院體檢女性的陰道分泌物標(biāo)本進(jìn)行KOH懸滴法檢測，復(fù)診時(shí)進(jìn)行真菌培養(yǎng)檢查的標(biāo)本，使用沙保羅培養(yǎng)基分離菌株并鑒定菌種，將分離的白色念珠菌做藥物敏感試驗(yàn)。結(jié)果 15 199例標(biāo)本共檢出真菌陽性標(biāo)本926例。不同年齡組間和不同季節(jié)間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=45.714，P<0.001；χ2=13.784，P=0.003)，老年組患者和冬季陽性率較低。286例真菌標(biāo)本培養(yǎng)出念珠菌197例，其中白色念珠菌78.17%(154/197)，光滑念珠菌10.15%(20/197)，熱帶念珠菌6.09%(12/197)，近平滑念珠菌3.05%(6/197)，克柔念珠菌2.03%(4/197)，釀酒酵母菌0.51%(1/197)。白色念珠菌對制霉菌素敏感率為100.0%，5-氟胞嘧啶敏感率94.2%，氟康唑敏感率94.8%，咪康唑敏感率75.3%，酮康唑敏感率85.1%，伊曲康唑敏感率77.9%。結(jié)論 生殖道念珠菌感染主要是育齡女性，且菌種分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

念珠菌； 外陰陰道念珠菌?。?藥敏試驗(yàn)

為了解該地區(qū)女性生殖道念珠菌(VVC)感染情況，現(xiàn)對該院體檢女性生殖道分泌物進(jìn)行KOH懸滴法鏡檢，體檢后1周內(nèi)來復(fù)診的患者，對其分泌物標(biāo)本中的念珠菌進(jìn)行菌種鑒定，并對白色念珠菌進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn),以探討VCC感染狀況，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年5月至2014年4月該院體檢女性的陰道分泌物標(biāo)本15 199例，年齡18～72歲，平均年齡(33.4±12.6)歲。

1.2 標(biāo)本采集及鏡檢 采用一次性無菌陰道窺器暴露宮頸，無菌棉拭子蘸取后穹窿分泌物置于1 mL無菌生理鹽水試管中，將標(biāo)本均勻涂于玻片上，加1～2滴10%KOH溶液，于顯微鏡下檢查真菌孢子或假菌絲。

1.3 培養(yǎng)與鑒定 通過該院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，調(diào)查體檢后1周內(nèi)來門診就診的體檢者臨床資料，臨床醫(yī)師要求真菌培養(yǎng)檢查者，使用無菌棉拭子蘸取其后穹窿分泌物接種于沙保羅培養(yǎng)基，30 ℃恒溫箱培養(yǎng)24～72 h，觀察菌落生長情況，可疑菌落革蘭染色鏡檢，陽性標(biāo)本挑取生長良好的菌落轉(zhuǎn)種于科瑪嘉顯色培養(yǎng)基，35 ℃恒溫箱培養(yǎng)24～48 h。綠色為白色假絲酵母菌，藍(lán)色為熱帶念珠菌，應(yīng)用法國梅里埃公司生產(chǎn)的API-20C AUX酵母樣真菌鑒定反應(yīng)試劑條鑒定,嚴(yán)格按照操作說明書并判讀鑒定結(jié)果。

1.4 藥敏試驗(yàn) 挑取經(jīng)沙保羅培養(yǎng)基次代培養(yǎng)的新鮮白色念珠菌菌落置于無菌生理鹽水中制備成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙?，再用生理鹽水對倍稀釋后以無菌棉簽蘸取菌懸液均勻涂布于真菌藥敏平板培養(yǎng)基(廣州迪景微生物科技有限公司)，室溫靜置3～5 min，用無菌鑷子將Rosco紙片貼于培養(yǎng)基表面，保持紙片間間距大于24 mm。將培養(yǎng)基放入35 ℃恒溫箱培養(yǎng)18～24 h后測量抑菌環(huán)直徑，根據(jù)制造商說明書判定并記錄藥敏結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同年齡組標(biāo)本真菌陽性率比較 15 199例標(biāo)本中926例檢出真菌孢子或假菌絲，陽性率6.09%。中年組與老年組陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=45.714，P<0.001)，但青年組與中年組陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.033，P=0.855)，老年組陽性率明顯下降。見表1。

表1 3組患者真菌感染結(jié)果比較

2.2 不同季節(jié)真菌陽性率結(jié)果比較 根據(jù)平均氣溫劃分春夏秋冬4季(2～4月為春季，5～9月為夏季，10～11月為秋季，12～1月為冬季)。按季節(jié)對真菌陽性標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示，春夏秋3個(gè)季節(jié)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.683，P=0.058)，冬季與春夏秋3個(gè)季節(jié)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.784，P=0.003)。見表2。

表2 不同季節(jié)真菌陽性率結(jié)果比較

表3 197株念珠菌菌種鑒定結(jié)果比較(n)

2.3 念珠菌的檢出及鑒定結(jié)果 分離培養(yǎng)出念珠菌197株，陽性標(biāo)本中未發(fā)現(xiàn)多種念珠菌感染。白色念珠菌154例(78.17%)，光滑念珠菌20株(10.15%)，熱帶念珠菌12株(6.09%)，近平滑念珠菌6株(3.05%)，克柔念珠菌4株(2.03%)，釀酒酵母菌1株(0.51%)。真菌陽性組與陰性組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.569，P=0.182)。見表3。

2.4 白色念珠菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 藥敏試驗(yàn)提示白色念珠菌對臨床常用的幾種抗真菌藥物有較好的敏感性，制霉菌素敏感率為100.0%，5-氟胞嘧啶94.2%，氟康唑94.8%，咪康唑75.3%，酮康唑85.1%，伊曲康唑77.9%。見表4。

表4 154株白色念珠菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較[n(%)]

3 討 論

念珠菌廣泛存在于自然界，至少75%的女性在一生中都發(fā)生過生殖道念珠菌感染[1]。以往臨床根據(jù)患者有無臨床癥狀將女性念珠菌生殖道感染按念珠菌性陰道炎或念珠菌攜帶者分類，近年來這種分類及命名方式已被外陰陰道念珠菌病(VVC)所取代[2]。念珠菌的逆行性感染導(dǎo)致妊娠女性發(fā)生胎膜早破、早產(chǎn)、新生兒鵝口瘡、產(chǎn)褥感染。有研究表明,感染念珠菌的女性進(jìn)行檢查和治療,能夠減少早產(chǎn)兒和新生兒念珠菌感染的發(fā)生[3-4]。由于生殖道內(nèi)雌激素及糖原水平上升，有60%～90%的帶菌孕婦會(huì)發(fā)展成有癥狀的VVC，故研究普通人群念珠菌攜帶者具有一定意義。但婦科門診一般為典型癥狀的陰道炎患者，念珠菌攜帶者比例相對較低。對體檢人群標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)更符合普通人群念珠菌感染的統(tǒng)計(jì)學(xué)資料。本研究對15 199例體檢人群標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)，顯微鏡檢出率為6.09%，與陳春偉[5]報(bào)道的11.82%，丁勝利等[6]的15.24%均有差異，可能與取樣人群及實(shí)驗(yàn)操作的差異有關(guān)。本組收集門診就診真菌培養(yǎng)資料，將標(biāo)本分成陽性、陰性2組進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.182)，菌種分布與其他研究類似，以白色念珠菌為主[7-8]。隨著抗真菌藥物的廣泛應(yīng)用，白色念珠菌耐藥率有增多趨勢[9]。本研究對白色念珠菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，顯示其對制霉菌素、5-氟胞嘧啶、氟康唑敏感性較高，均為94.0%以上，對咪康唑、伊曲康唑、酮康唑敏感率稍低，分別為75.3%、77.9%、85.1%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果都明顯高于黎小東等[8]的研究，可能與標(biāo)本來源有關(guān)。Rathod等[10]分析大量關(guān)于VVC文獻(xiàn)后認(rèn)為，不少文獻(xiàn)缺乏足夠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，而是引用“經(jīng)驗(yàn)性”的數(shù)據(jù)，VVC的調(diào)查應(yīng)建立在對足量樣本科學(xué)性的實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)基礎(chǔ)上。本組實(shí)驗(yàn)使用了較多樣本進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，但由于體檢者在院停留時(shí)間短，取材少，未進(jìn)行真菌培養(yǎng)；對于門診患者就診成本及時(shí)間考慮，臨床醫(yī)師也只會(huì)對部分癥狀患者進(jìn)行真菌培養(yǎng)檢查，不是所有確診或疑似VVC都會(huì)進(jìn)行真菌培養(yǎng)鑒定，所以目前獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還不足以令人滿意。下一步的研究將考慮規(guī)范及優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程以獲取更多且可信的數(shù)據(jù)。

本組各年齡段患者，18～35歲真菌陽性率最高(6.56%)，其次是36～50歲(6.47%)，50歲以上感染率明顯減少(2.21%)?？紤]為青年組及中年組處于婚育期，雌激素分泌、性生活、生育均為高峰，而老年女性處于絕經(jīng)期，雌激素水平明顯下降。該地區(qū)靠近熱帶，夏季月份較北方長，夏秋交界不明顯，冬季陽性率較夏秋兩季低，可能與冬季氣溫較低有關(guān)。春季陽性率較夏秋兩季，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

國外研究表明，很多患者只是通過臨床癥狀或既往病史被診斷為VVC，并無實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。由于不同病因引起的陰道炎癥狀相似，所以這種診斷的可靠性值得懷疑，而不同病因的陰道炎治療方法有所不同，故實(shí)驗(yàn)室的診斷數(shù)據(jù)非常必要[2]。KOH懸滴法是一種快速、有效的實(shí)驗(yàn)方法，但本組鏡下檢出率為6.09%，相對于普通人群(20%～30%)的感染率[11]，明顯偏低，相當(dāng)部分的感染標(biāo)本鏡下未被檢出，并且197例癥狀典型的標(biāo)本中，也有99例標(biāo)本通過KOH懸滴法鏡檢并未發(fā)現(xiàn)真菌孢子或菌絲。故本組認(rèn)為，真菌培養(yǎng)配合KOH懸滴法鏡檢能降低念珠菌檢測的假陰性率，對VVC的診斷具有臨床意義，尤其對于真菌鏡檢陰性但有VVC癥狀的患者，真菌培養(yǎng)及鑒定是有必要的。

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Pathogeny research of vulvovaginal candidiasis from women with physical examination in Shenzhen*

DONGJing1,YANGHong1,WUBo2△

(1.DepartmentofLaborartory；2.DepartmentofDermatologis,ShenzhenHospital,PekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518036,China)

Objective To investigate the pathogenic information of genital candida infections in women lived in Shenzhen.Methods KOH smear was used to examine vaginal secretions from women with physical examination in PKU Shenzhen hospital from May 2013 to April 2014.When these women subsequent went to our hospital for secretion fungal culture,Sabouraud medium was used to isolate candida strains,which would be identified by using CHROMagar chromogenic medium and API-20C AUX (bioMerieux France).Drug sensitivity tests were made for isolated Candida albicans.Results Total 926 fungal postive samples were detected by microscopic examination from 15 199 samples.There was significant difference in fungal postive rates among different age groups (χ2=45.714,P<0.001) or different seasons (χ2=13.784,P=0.003).the postive rates of the old group were lower.For seasons,lower rate was found in winter.Total 197 strains of candida species were isolated from 286 samples,of which C.albicans was the most frequently species(78.17%,154/197),followed by C.glabrata(10.15%,20/197),C.tropicalis(6.09%,12/197),C.Parapsilosis (3.05%,6/197),C.krusei (2.03%,4/197),Saccharomyces cerevisiae (0.51%,1/197).All the isolates of Candida albicans were susceptible to nystatin．94.2% to 5-flurocytosine,94.8% to fluconazole,75.3% to miconazole,85.1%to ketoconazole，and 77.9% to itraconazole.Conclusion Genital Candida infections mainly occur in women of childbearing age.As for candida species composition,there is no statistical significance between the group of fungal postive samples and the group of negative samples by microscopic examination from.

Candida; vulvovaginal candidiasis; susceptibility test

廣東省深圳市科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(201202007)。

董晶，男，本科，主管技師，主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.12.017

A

1672-9455(2015)12-1702-03

2014-12-25

2015-02-15)