肝細(xì)胞肝癌患者血清糖蛋白Dickkopf-1檢測的臨床價(jià)值研究*

褚飛虎,曹亞麗,邵建國,陳 琳△

(1.江蘇省南通市第六人民醫(yī)院普外科 226011；2.江蘇省南通市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 226006)

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·臨床探討·

肝細(xì)胞肝癌患者血清糖蛋白Dickkopf-1檢測的臨床價(jià)值研究*

褚飛虎1,曹亞麗2,邵建國2,陳 琳2△

(1.江蘇省南通市第六人民醫(yī)院普外科 226011；2.江蘇省南通市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 226006)

目的 分析肝細(xì)胞肝癌(HCC)患者血清糖蛋白Dickkopf-l(DKK1)檢測的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 采用化學(xué)發(fā)光法及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)定量檢測HCC患者血清DKK1及甲胎蛋白(AFP)水平，以良性肝病患者及健康體檢者作為對(duì)照。受試者工作特征(ROC)曲線分析血清DKK1與AFP對(duì)HCC的診斷價(jià)值；等級(jí)相關(guān)分析2項(xiàng)指標(biāo)間的相關(guān)性；并分析血清DKK1水平與HCC患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。結(jié)果 血清DKK1診斷HCC的ROC曲線下面積為0.901，95%CI為0.842～0.943，Youden指數(shù)為0.717 7，其診斷靈敏度為79.61%，特異性為92.16%。HCC患者組血清DKK1水平(12.58±3.61) μg/L，顯著高于良性肝病組的(7.62±2.43)μg/L及健康對(duì)照組的(4.05±1.27)μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HCC患者血清DKK1與血清AFP具有一定相關(guān)性(r=0.603 3，P<0.05)。血清DKK1水平與腫瘤累及大小(P=0.028 7)及TNM分期(P=0.008 6)密切相關(guān)，與性別、年齡、HBV感染狀態(tài)、是否伴有肝硬化及腫瘤分化程度等病理參數(shù)無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論 血清DKK1可作為HCC診斷標(biāo)志物，并且在HCC患者病情分析及惡性程度判斷等方面具有一定臨床價(jià)值。

肝細(xì)胞肝癌；糖蛋白Dickkopf-l；甲胎蛋白；臨床價(jià)值

肝細(xì)胞肝癌(HCC)是臨床常見的消化系惡性腫瘤之一，其發(fā)病率占我國惡性腫瘤的第3位，病死率位居惡性腫瘤的第2位。目前臨床診斷HCC多采用影像學(xué)結(jié)合病理學(xué)和血清腫瘤標(biāo)志物檢測，但由于HCC起病隱匿、早期癥狀多不明顯，易誤診、漏診；且發(fā)現(xiàn)時(shí)大多已是晚期并伴有轉(zhuǎn)移，臨床又缺乏有效的療效評(píng)估及預(yù)后判斷指標(biāo)，患者預(yù)后極差[1-2]。因而提高HCC早期診斷率對(duì)改善患者預(yù)后及降低病死率尤為重要。糖蛋白Dickkopf-1(DKKl)是近年來發(fā)現(xiàn)的在Wnt信號(hào)通路中起抑制作用的分子；由于Wnt信號(hào)通路可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及血管形成，在多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用，因此DKKl在腫瘤中表達(dá)情況及其扮演的角色也引起了各國學(xué)者的極大關(guān)注[3-4]。本研究通過檢測HCC患者血清DKKl水平，分析其與血清甲胎蛋白(AFP)及臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，探討DKKl作為HCC血清標(biāo)志物的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月至2011年12月住院、門診及健康體檢者共154例，HCC組為72例，其中男65例，女7例，平均年齡(51.2±8.3)歲。經(jīng)臨床、影像學(xué)及病理確診，診斷和分期符合我國2001年制定的《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》。良性肝病組42例，包括肝硬化患者18例，慢性乙型肝炎患者16例，脂肪肝5例，肝血管瘤3例；其中男31例，女11例；平均年齡(48.7±7.3)歲。健康對(duì)照組40例，其中男27例，女13例；平均年齡(45.6±5.9)歲，均已排除良、惡性肝臟疾病。

1.2 方法 采集受試者清晨空腹靜脈血4 mL，靜置4 h，3 000 r/min離心分離血清，-80 ℃保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)定量檢測血清DKKl，試劑盒購自R&D公司，操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，每次試驗(yàn)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；采用美國雅培i2000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑檢測血清AFP水平，嚴(yán)格室內(nèi)質(zhì)控，待檢標(biāo)本與質(zhì)控品同時(shí)上機(jī)檢測。

2 結(jié) 果

2.1 3組之間血清DKK1水平比較 見圖1。HCC患者組血清DKK1水平為(12.58±3.61)μg/L，明顯高于良性肝病組的(7.62±2.43)μg/L及健康對(duì)照組的(4.05±1.27)μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；良性肝病組血清DKK1水平也明顯高于健康對(duì)照組，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 ROC曲線分析血清DKK1與AFP對(duì)HCC的診斷價(jià)值 見圖2。血清DKK1診斷HCC的ROC曲線下面積(AUC)為0.901，95%置信區(qū)間(CI)為0.842～0.943；Youden指數(shù)為0.717 7；其診斷靈敏度為79.61%，95%CI為70.5%～86.9%；特異性為92.16%，95%CI為81.1%～97.8%。血清AFP用于診斷HCC的AUC為0.870，95%CI為0.807～0.919；Youden指數(shù)為0.718 1；其診斷靈敏度為75.73%，95%CI為66.3%～83.6%；特異性為96.08%，95%CI為86.5%～99.5%。二者各自靈敏度與特異性之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，由此提示DKK1與AFP一樣，可作為HCC血清學(xué)診斷的標(biāo)志物。

圖1 3組血清DKK1水平比較

圖2 血清DKK1與AFP診斷HCC的ROC曲線

2.3 血清DKK1與AFP相關(guān)性分析 Spearman等級(jí)相關(guān)分析72例HCC患者血清DKK1及AFP 2項(xiàng)指標(biāo)有一定相關(guān)性(r=0.603 3，P<0.05)，由此提示二者具有一定相關(guān)性，說明在HCC患者中，血清DKK1與AFP的變化趨勢(shì)基本相似；但在15例血清AFP陰性的HCC患者中，有10例血清DKK1明顯增高，提示血清DKK1檢測可作為AFP的補(bǔ)充，如二者聯(lián)合檢測可提高HCC的診斷價(jià)值。

2.4 血清DKK1水平與HCC患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 見表1。根據(jù)血清DKK1檢測結(jié)果的中位數(shù)進(jìn)行分組，將72例HCC患者分為高表達(dá)組(n=36)及低表達(dá)組(n=36)。血清DKK1水平與腫瘤累及大小(P=0.028 7)及TNM分期(P=0.008 6)密切相關(guān)，而與其他參數(shù)，如性別、年齡、HBV感染狀態(tài)、是否伴有肝硬化及腫瘤分化程度等無關(guān)(P>0.05)，提示血清DKK1水平與HCC患者病情及惡性進(jìn)展相關(guān)。

表1 HCC患者臨床病理參數(shù)與血清DKK1水平之間的關(guān)系(n)

續(xù)表1 HCC患者臨床病理參數(shù)與血清DKK1水平之間的關(guān)系(n)

3 討 論

HCC惡性程度高，多數(shù)患者臨床確診時(shí)已失去有效治療的機(jī)會(huì)，其5年生存率一般不超過15%。目前，臨床上HCC主要診斷手段仍是血清腫瘤標(biāo)志物結(jié)合影像學(xué)的方法，雖然血清AFP檢測已得到廣泛應(yīng)用，但其有效診斷價(jià)值仍不甚令人滿意[5-6]。DKK1是近年來被發(fā)現(xiàn)的與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的標(biāo)志物之一，其在肝癌的作用也受到各國學(xué)者的廣泛關(guān)注。DKKl屬于分泌型糖蛋白Dickkopf家族成員之一，其基因位于人類染色體10q11.2，編碼1段長約為266個(gè)氨基酸、相對(duì)分子質(zhì)量為28.7×103的糖蛋白。DKKl結(jié)構(gòu)中含有1段信號(hào)肽序列及2段富含半胱氨酸的保守性結(jié)構(gòu)域；其羧基端可與低密度脂蛋白受體蛋白6作用，進(jìn)而抑制Wnt通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。另外，DKKl通過與其相應(yīng)受體結(jié)合來調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的生長信號(hào)，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡及遷移等多種生物學(xué)進(jìn)程；并在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[7-9]。有研究表明，血清DKKl水平在包括肝癌在內(nèi)的多種腫瘤中升高，提示其可作為一項(xiàng)新的腫瘤血清學(xué)診斷標(biāo)志物，然而仍需對(duì)其在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中所扮演的角色及詳細(xì)信號(hào)機(jī)制進(jìn)行深入探討[10]。

本研究結(jié)果顯示，HCC患者組血清DKK1水平(12.58±3.61)μg/L，明顯高于良性肝病組的(7.62±2.43)μg/L及健康對(duì)照組的(4.05±1.27)μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清DKK1診斷HCC的AUC為0.901，95%CI為0.842～0.943；Youden指數(shù)為0.717 7；其診斷靈敏度為79.61%；特異性為92.16%。血清AFP診斷HCC的AUC為0.870，95%CI為0.807～0.919；Youden指數(shù)為0.718 1；其診斷靈敏度為75.73%；特異性為96.08%。二者各自靈敏度與特異性之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示DKK1與AFP一樣，可作為HCC血清學(xué)診斷的標(biāo)志物。進(jìn)一步等級(jí)相關(guān)分析顯示，血清DKK1及AFP 2項(xiàng)指標(biāo)間具有一定的相關(guān)性(r=0.603 3，P<0.05)，提示在HCC患者中，血清DKK1與AFP的變化趨勢(shì)基本相似。在15例血清AFP陰性的HCC患者中，有10例血清DKK1明顯增高，提示血清DKK1檢測可作為AFP的補(bǔ)充，如二者聯(lián)合檢測可提高HCC的診斷價(jià)值。

本研究還探討了血清DKK1水平與HCC患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，血清DKK1水平與腫瘤累及大小(P=0.028 7)及TNM分期(P=0.008 6)密切相關(guān)，而與其他參數(shù)，如性別、年齡、HBV感染狀態(tài)、是否伴有肝硬化及腫瘤分化程度等無關(guān)(P>0.05)，提示血清DKK1水平對(duì)于HCC患者病情觀察、惡性程度判斷乃至預(yù)后評(píng)估等方面都具有潛在的重要臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，作為新的HCC診斷標(biāo)志物，血清DKK1在HCC診斷、病情分析及惡性程度判斷等方面已顯示出一定的臨床價(jià)值，如在實(shí)際工作中采用多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測可以彌補(bǔ)單項(xiàng)檢測的不足，提高診斷效率。另一方面，DKK1有望成為新的腫瘤治療靶點(diǎn)，在HCC治療效果評(píng)估及預(yù)后判斷中發(fā)揮重要作用，也可為HCC的診療與防治開辟新的思路。但是，仍需要更深入的研究及臨床試驗(yàn)來確立其在HCC中所能扮演的角色，需要長期大規(guī)模隨訪研究對(duì)其在HCC進(jìn)展及預(yù)后方面的價(jià)值進(jìn)行深入評(píng)估。

[1]Bosetti C,Turati F,La Vecchia C.Hepatocellular carcinoma epidemiology[J].Best Pract Res Clin Gastroenterol,2014,28(5):753-770.

[2]Schutte K,Schulz C,Link A,et al.Current biomarkers for hepatocellular carcinoma:Surveillance,diagnosis and prediction of prognosis[J].World J Hepatol,2015,7(2):139-149.

[3]Zhang J,Zhao Y,Yang Q.Sensitivity and specificity of Dickkopf-1 protein in serum for diagnosing hepatocellular carcinoma:a meta-analysis[J].Int J Biol Markers,2014,29(4):e403-410.

[4]Shen Q,Fan J,Yang XR,et al.Serum DKK1 as a protein biomarker for the diagnosis of hepatocellular carcinoma:a large-scale,multicentre study[J].Lancet Oncol,2012,13(8):817-826.

[5]Rich N,Singal AG.Hepatocellular carcinoma tumour markers:current role and expectations[J].Best Pract Res Clin Gastroenterol,2014,28(5):843-853.

[6]Tabrizian P,Roayaie S,Schwartz ME.Current management of hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroenterol,2014,20(30):10223-10237.

[7]Fatima S,Lee NP,Luk JM.Dickkopfs and Wnt/β-catenin signalling in liver cancer[J].World J Clin Oncol,2011,2(8):311-325.

[8]Yu B,Yang X,Xu Y,et al.Elevated expression of DKK1 is associated with cytoplasmic/nuclear beta-catenin accumulation and poor prognosis in hepatocellular carcinomas[J].J Hepatol,2009,50(5):948-957.

[9]Chen L,Li M,Li Q,et al.DKK1 promotes hepatocellular carcinoma cell migration and invasion through β-catenin/MMP7 signaling pathway[J].Mol Cancer,2013,12(10):157-167.

[10]Liu Y,Tang W,Xie L,et al.Prognostic significance of dickkopf-1 overexpression in solid tumors:a meta-analysis[J].Tumour Biol,2014,35(4):3145-3154.

江蘇省衛(wèi)計(jì)委科技資助項(xiàng)目(H201453)；江蘇省南通市科技局資助項(xiàng)目(HS2014061、HS2011058)；江蘇省南通市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)資助項(xiàng)目(WQ2014065)。

△通訊作者，E-mail:xiaobei227@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.038

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1672-9455(2015)23-3544-03

2015-03-21

2015-06-26)