全自動生化分析儀檢測尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性能驗(yàn)證

高 寧，許 楠，周 挺，張 妮，何 謙

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 710004)

?

·論 著·

全自動生化分析儀檢測尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性能驗(yàn)證

高 寧，許 楠，周 挺，張 妮，何 謙△

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 710004)

目的 對奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀檢測尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)進(jìn)行性能驗(yàn)證。方法 參照CLSI EP5-A2、EP6-A、C28-A2文件和相關(guān)文獻(xiàn)要求，對奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀檢測NAG進(jìn)行精密度、功能靈敏度、線性范圍、臨床可報(bào)告范圍和參考區(qū)間的驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果 NAG的高、低濃度標(biāo)本總變異系數(shù)分別為6.05%和9.50%；功能靈敏度為0.72 U/L；線性范圍為1.5～196.0 U/L；臨床可報(bào)告范圍為0.72～1 960.00 U/L；參考區(qū)間為0.3～12.0 U/L。結(jié)論 奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀檢測NAG的各項(xiàng)分析性能與廠家的聲明基本一致，可用于臨床檢測。

生化分析儀；精密度；功能靈敏度；線性范圍；臨床可報(bào)告范圍；參考區(qū)間

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一種溶酶體酶，相對分子質(zhì)量為(130～140)×103，在腎近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)濃度最高，是反映腎小管早期損害的一項(xiàng)很靈敏、特異性較強(qiáng)的診斷指標(biāo)?！夺t(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》ISO15189和美國臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)均要求臨床實(shí)驗(yàn)室對引進(jìn)或改變的檢測系統(tǒng)做性能驗(yàn)證后方可應(yīng)用于臨床檢測[1-2]。本研究按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)指南中有關(guān)檢測系統(tǒng)性能驗(yàn)證文件，對奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀檢測NAG的精密度、功能靈敏度、線性范圍、臨床可報(bào)告范圍及參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院健康體檢者的首次晨尿，尿液留取后及時送檢，2 h內(nèi)檢測。若2 h內(nèi)不能檢測必須保存于4 ℃冰箱，若6 h內(nèi)不能檢測置于-20 ℃保存。

1.2 儀器與試劑 采用奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀檢測,NAG試劑(批號14-0516)、校準(zhǔn)品(批號13-1226,14-0404)、質(zhì)控品(批號13-1226,14-0404)均由北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 精密度驗(yàn)證 精密度驗(yàn)證根據(jù)CLSI EP5-A2文件[3]的精密度評價(jià)方案進(jìn)行，兩種濃度的標(biāo)本每種濃度每天檢測2批，2批檢測時間至少間隔4 h，每批重復(fù)檢測2次，每次測定至少做一個質(zhì)控，共測定20 d。試驗(yàn)前5 d屬熟悉階段，并進(jìn)行精密度可接受性預(yù)試驗(yàn)，后15 d是主要的試驗(yàn)階段，每隔5 d要重新檢查質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，檢驗(yàn)所有數(shù)據(jù)的可接受性。每種濃度獲得80個可接受的數(shù)據(jù)，對這些數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算批內(nèi)及實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)(CV)。如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV小于廠家的聲明，說明實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)驗(yàn)證了廠家聲明的精密度。

1.3.3 線性范圍驗(yàn)證 根據(jù)CLSI EP6-A文件[4]，取高值(H)和低值(L)尿液各1份，按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L的比例配制成不同濃度的尿液6份，每份重復(fù)測定3次計(jì)算平均值。以預(yù)期值為X，實(shí)測均值為Y做線性回歸分析，得到線性方程Y=aX+b。判定標(biāo)準(zhǔn)：若a在0.97～1.03范圍內(nèi)，r2>0.95，可判斷線性范圍在試驗(yàn)已涉及濃度；若a不在0.97～1.03范圍內(nèi)，b較大，舍去高值或低值組數(shù)據(jù)，另做回歸統(tǒng)計(jì)。直至縮小的分析范圍其回歸方程中a和b的判斷符合要求，該范圍為線性范圍。

1.3.4 臨床可報(bào)告范圍評價(jià) 把NAG質(zhì)控品按照1∶2、1∶5、1∶10、1∶15、1∶20稀釋，分別重復(fù)測定3次并計(jì)算均值，然后計(jì)算預(yù)期值與測量均值的比值，即回收率。以(100.0±10.0)%范圍內(nèi)為判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.5 參考區(qū)間驗(yàn)證 參照CLSI C28-A2文件[5]，選擇20名健康體檢合格者為試驗(yàn)對象，留取首次晨尿進(jìn)行NAG測定，如果20份標(biāo)本的檢測結(jié)果均在試劑說明書提供的參考區(qū)間內(nèi)或僅有2個標(biāo)本超標(biāo)，則驗(yàn)證通過。否則，需要進(jìn)行參考區(qū)間確立試驗(yàn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel 2003進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 NAG精密度驗(yàn)證 見表1。兩種濃度的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)總CV分別為6.05%和9.50%，均小于廠家聲明的10.00%。說明廠家聲明的精密度可以接受。

表1 NAG的精密度驗(yàn)證

2.2 功能靈敏度驗(yàn)證 見表2。低值濃度的混合尿液經(jīng)系列稀釋后的濃度分別為3.60、1.44、0.72、0.48、0.36 U/L，其對應(yīng)的CV分別為8.92%、11.85%、17.15%、23.44%、34.32%。選擇CV小于20.00%時所對應(yīng)的濃度為該檢測系統(tǒng)的功能靈敏度，即0.72 U/L。

表2 NAG的功能靈敏度驗(yàn)證

2.3 線性范圍驗(yàn)證 高、低值尿液按比例配制的預(yù)期濃度值為1.50、40.40、79.30、118.20、157.10、196.00 U/L，測量均值分別為1.37、39.67、77.73、118.53、157.07、197.60 U/L，得到的回歸方程為Y=1.009 3X+1.007 6，r2=0.999 9，見圖1。按照a在0.97～1.03范圍內(nèi)，r2>0.95的判斷標(biāo)準(zhǔn)，此段濃度的線性范圍符合要求，故本系統(tǒng)檢測尿酶NAG的線性范圍為1.50～196.00 U/L。

圖1 預(yù)期值與測量均值的散點(diǎn)圖

2.4 臨床可報(bào)告范圍評價(jià) 濃度為60.90 U/L的NAG質(zhì)控品，經(jīng)系列稀釋后的預(yù)期濃度值分別為20.50、8.20、4.10、2.73、2.05 U/L，重復(fù)測定3次后計(jì)算均值及回收率，結(jié)果見表3。以(100.0±10.0)%范圍內(nèi)為判定標(biāo)準(zhǔn)，可確定NAG的最大稀釋度為1∶10，結(jié)合功能靈敏度0.72 U/L，確認(rèn)奧林巴斯AU2700檢測系統(tǒng)檢測NAG的可報(bào)告范圍為0.72～1 960.0 U/L。

表3 NAG的最大稀釋度測定

2.5 參考區(qū)間驗(yàn)證 20名對象的NAG檢測結(jié)果為0.50～13.30 U/L，其中有2名對象的NAG測定值為12.90和13.30 U/L，超過了參考區(qū)間0.30～12.00 U/L，其余均在參考區(qū)間內(nèi)，因此可判斷現(xiàn)行的參考區(qū)間有效。

3 討 論

精密度是檢驗(yàn)系統(tǒng)重要的分析性能之一，因?yàn)榕R床醫(yī)生和患者最關(guān)心的是檢驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性，并以此作為疾病診斷和治療的依據(jù)。CLSI EP5-A2文件“定量測量方法的精密度性能評價(jià)”指南為臨床實(shí)驗(yàn)室對所有儀器或自建檢測系統(tǒng)的精密度性能驗(yàn)證或評價(jià)提供了方案和數(shù)據(jù)分析[6]。經(jīng)驗(yàn)證，AU2700全自動生化分析儀檢測NAG的精密度與廠家的聲明一致，能滿足臨床測試的需要。

功能靈敏度的定義為以天間重復(fù)CV為20.00%時對應(yīng)檢測限樣品具有的平均濃度，確定檢測系統(tǒng)或方法可定量報(bào)告分析物的最低濃度或其他量值的限值[7]。功能靈敏度是基于低濃度的基礎(chǔ)上，用于區(qū)分檢測系統(tǒng)從有到無的分析能力。對低值濃度的混合尿液進(jìn)行系列稀釋后，確定本檢測系統(tǒng)的功能靈敏度是0.72 U/L。

廠家在試劑說明書中提供的線性范圍，是在一定測量區(qū)間,可提供測量結(jié)果與標(biāo)本中測量物的量值直接呈比例的能力[8]。線性范圍驗(yàn)證是指患者標(biāo)本不經(jīng)任何預(yù)處理，在此范圍內(nèi)，報(bào)道結(jié)果顯示標(biāo)本中確實(shí)含有被測物。根據(jù)EP6-A文件驗(yàn)證NAG的線性范圍為1.50～196.00 U/L，略低于廠家提供的200.00 U/L。原因可能為標(biāo)本選擇的濃度范圍不夠?qū)?，加之臨床實(shí)驗(yàn)室條件和廠家檢測條件存在差異，導(dǎo)致試驗(yàn)得出的分析測量范圍與廠家略有不同。

在臨床檢測中常常會遇到一些高值標(biāo)本，其濃度或活性超過了儀器的分析測量范圍，儀器一般會提示標(biāo)本超出線性范圍，這時一般按要求將標(biāo)本稀釋到儀器的測量范圍內(nèi)進(jìn)行重新測定。為了保證稀釋后結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，就需要確定檢測項(xiàng)目的最大稀釋度[9]。本研究稀釋度驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，NAG的最大稀釋度為1∶10，回收率為91.95%，符合90%～110%的可接受范圍，因此可以確立臨床可報(bào)告范圍為0.72～1 960.00 U/L。

生物參考區(qū)間是指某項(xiàng)檢查結(jié)果在健康人群中的分布范圍，是解釋檢驗(yàn)結(jié)果分析檢驗(yàn)信息的一個基本尺度和依據(jù)。每個新的測試項(xiàng)目開展前或其分析方法學(xué)改變甚至患者人群改變時，都需進(jìn)行參考區(qū)間驗(yàn)證試驗(yàn)[10]。使用AU2700全自動生化分析儀檢測20份來自健康個體的新鮮尿液NAG，僅有2個結(jié)果超出參考區(qū)間0.30～12.00 U/L，符合檢測值在引用參考區(qū)間的參考個體數(shù)與總的參考個體數(shù)的比率r≥90%的可接受標(biāo)準(zhǔn)，因此可以使用現(xiàn)行的參考區(qū)間。

綜上所述，通過奧林巴斯AU2700全自動生化分析儀檢測NAG的性能驗(yàn)證試驗(yàn)，證實(shí)該檢測系統(tǒng)的精密度、功能靈敏度、線性范圍等分析性能與廠家提供的聲明基本一致，符合質(zhì)量目標(biāo)的要求，能滿足臨床的要求。

[1]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則[S].北京:中國合格評定國家認(rèn)可委員會,2008.

[2]韓平治，丁進(jìn)芳，蘭州.尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶連續(xù)監(jiān)測法試劑盒性能評估[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2000,15(3):240-241.

[3]CLSI.EP5-A2 Evaluation of precision performance of quantitative methods;approved guideline[S].2nd,ed.Wayne,PA:CLSI,2004.

[4]CLSI.EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:A statistical approach;approved guideline[S].2nd,ed.Wayne,PA:CLSI,2004.

[5]CLSI.C28-A2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory;approved guideline[S].2nd,ed.Wayne,PA:CLSI,2000.

[6]李婷婷,寧芬,陸雅春.日立7600全自動生化分析儀檢測系統(tǒng)性能驗(yàn)證[J].安徽醫(yī)學(xué)，2013,34(11):1679-1682.

[7]張亞松,謝秋燕.HITACHI7170、7600以及ROCHE Cobas C501全自動生化分析儀分析靈敏度的評價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(9):993-995.

[8]趙建忠.生化分析儀精密度、準(zhǔn)確性以及線性范圍性能驗(yàn)證[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(10):1111-1112.

[9]陳斌鴻,羅恒,李煒煊,等.奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀檢測尿素氮臨床可報(bào)告范圍的建立與評價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(2):117-120.

[10]馮洋,徐上放,魯靜.OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀性能驗(yàn)證[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,32(2):229-232.

Performance verification of NAG detected by automatic biochemical analyzer

GAONing,XUNan,ZHOUTing,ZHANGNi,HEQian△

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

Objective To verify the analytical performance of NAG detected by Olympus AU2700 automatic biochemical analyzer.Methods The precision,functional sensitivity,linearity,clinical reportable range,reference interval were validated,according to Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI) documents(EP5-A2,EP6-A and C28-A2).Results The total coefficients of variation of high and low NAG concentration samples were 6.05% and 9.50% respectively,functional sensitivity was 0.72 U/L,linearity was 1.5-196.0 U/L,clinical reportable range was 0.72-1 960.00 U/L,and reference interval was 0.3-12.0 U/L.Conclusion The analytical performance of NAG detected by Olympus AU2700 automatic biochemical analyzer is consistent with the statement offered by manufacturer,it is usable for clinical testing.

biochemical analyzer;precision;functional sensitivity;linear range;clinical reportable range;reference interval

高寧，女，碩士，副主任技師，主要從事生化檢驗(yàn)與質(zhì)量控制研究?！?/p>

，E-mail:qianh0511@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.017

A

1672-9455(2015)23-3492-02

2015-03-31

2015-06-02)