外周血中CD4+CD25+與CD8+CD28-調節(jié)性T細胞與Graves病的關系研究

韋 巍，林英輝，黃小琪(廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，南寧 530023)

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外周血中CD4+CD25+與CD8+CD28-調節(jié)性T細胞與Graves病的關系研究

韋 巍，林英輝，黃小琪(廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，南寧 530023)

目的 分析Graves病(GD)患者外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-調節(jié)性T(Tr)細胞的變化。方法 選擇該院內分泌科門診或住院部43例GD患者為研究對象，其中內分泌科門診確診的19例GD患者為試驗初發(fā)組。接受治療且甲狀腺功能恢復正常的24例GD患者為治療緩解組；選擇同期健康體檢者20例為健康對照組。采用流式細胞術檢測3組外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr細胞水平。結果 試驗初發(fā)組外周血CD4+CD25+Tr細胞水平為(4.56±4.14)%，明顯低于健康對照組的(8.84±4.45)%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，CD8+CD28-Tr細胞水平為(14.95±5.38)%，與健康對照組的(10.65±6.37)%比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療緩解組外周血中CD4+CD25+Tr細胞水平為(6.99±6.35)%，與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但其CD8+CD28-Tr細胞水平為(20.48±6.07)%，高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 CD4+CD25+Tr細胞水平可能與GD發(fā)病有關，CD8+CD28-Tr細胞可能與GD病程發(fā)展有關。

Graves??； CD4+CD25+； CD8+CD28-； Tr細胞

Graves病(GD)是一種伴甲狀腺激素(TH)分泌增多的器官特異性自身免疫疾病，以高甲狀腺素血癥、彌漫性甲狀腺腫、突眼及甲狀腺自身抗體陽性為特征。一般認為GD以遺傳易感為背景，在感染、壓力等因素作用下誘發(fā)體內免疫功能紊亂，是由于正常免疫耐受功能受損導致免疫細胞及其成分對自身組織結構和功能的破壞，并出現(xiàn)臨床表現(xiàn)的一類自身免疫性疾病，但其導致自身免疫反應的原因尚未明確。本試驗通過對GD患者外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-T淋巴細胞的分析，以探索這些指標與GD患者臨床狀態(tài)的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院內分泌科門診或住院部43例GD患者為研究對象。內分泌科門診確診的19例GD患者為試驗初發(fā)組，其中男3例，女16例；年齡23～48歲，平均35.6歲，診斷參照《內科學》7版的診斷標準，均未接受抗甲狀腺藥物治療。接受抗甲狀腺藥物治療半年以上，甲狀腺功能恢復正常的24例GD患者為治療緩解組，其中男5例，女19例，年齡22～50歲，平均36.2歲。選擇在本院體檢的健康人20例為健康對照組，其中男5例，女15例；年齡24～46歲，平均34.8歲，排除甲狀腺疾病和其他慢性疾病。3組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 外周血淋巴細胞亞群分析 采用流式細胞術測定外周血淋巴細胞，所用試劑包括抗CD4-FITC、抗CD25-PC5、抗CD8-PC5、抗CD28-FITC、IgG1-FITC、IgG1-PE，均由美國Beckman-Coulter公司生產。取2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝靜脈血，吸取100 μL全血于4支測定管，分別加入10 μL IgG1-FITC、IgG1-PE；CD4-FITC、CD25-PE；IgG1-FITC、CD8-PC5；CD28-FITC、CD8-PC5。混勻后室溫避光20 min孵育。加入溶血劑溶解紅細胞后，上機進行測定。全部數(shù)據(jù)采用流式細胞儀和軟件SYSTEM獲取和分析。

2 結 果

與健康對照組相比，試驗初發(fā)組外周血CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(Tr細胞)明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.011)；但CD8+CD28-Tr細胞與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.058)。治療緩解組外周血CD4+CD25+Tr細胞與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.231)，但CD8+CD28-Tr細胞明顯高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.00)。見表1。

表1 3組外周血中CD8+CD28-及CD4+CD25+Tr 細胞測定結果

注：與健康對照組比較，aP<0.05。

3 討 論

Tr細胞是T細胞的一類亞群，此類細胞能抑制其他T細胞的活力，在自身免疫性疾病、腫瘤及移植排斥反應等疾病的發(fā)生中起重要作用，逐漸受到醫(yī)學界的關注[1]。而CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr細胞是Tr細胞的重要組成部分。在免疫抑制機制中，CD4+CD25+Tr細胞能夠抑制那些成功逃避人工誘導耐受機制的自身反應性T細胞的活性和功能[2]。當此類細胞數(shù)量減少，表面分子表達缺陷，抑制功能受損均可導致自身免疫病的發(fā)生。近年來已經有研究表明，1型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力等自身免疫性疾病患者的外周血中，CD4+CD25+Tr細胞表達水平均明顯下降[3-5]。CD8+CD28-Tr細胞可通過細胞間的直接接觸、分泌可溶性的細胞因子和阻止樹突狀細胞的成熟來抑制細胞毒性效應，故CD8+CD28-Tr細胞在免疫系統(tǒng)的自穩(wěn)調節(jié)、自身免疫性疾病和器官移植免疫耐受中發(fā)揮著重要作用。CD8+CD28-Tr細胞在一些自身免疫性疾病中，如強直性脊柱炎、多發(fā)性肌炎、皮肌炎，均可發(fā)現(xiàn)其數(shù)量表現(xiàn)異常[6-8]。

Graves病的發(fā)生是由于對自己或非己識別的控制機制出現(xiàn)了問題，一些自身反應性T細胞能夠逃避克隆清除，識別外周組織抗原并且引起自身免疫反應[9]。在本試驗結果顯示，GD初發(fā)患者CD4+CD25+Tr細胞水平比健康人低，說明在GD發(fā)病過程中存在CD4+CD25+Tr細胞的缺乏，由于這類細胞減少可導致T細胞增殖、機體維持免疫穩(wěn)定基本過程失調。經過一段時間藥物治療后，治療緩解組的CD4+CD25+Tr細胞比試驗初發(fā)組稍增高，但較健康對照組仍偏低，說明雖然GD病患者甲狀腺功能恢復正常，但機體的免疫系統(tǒng)尚未完全恢復；GD初發(fā)患者外周血中CD8+CD28-Tr細胞水平較健康對照組稍升高，治療緩解組患者升高尤為明顯，提示GD病患者體內存在一定比例上升的CD8+CD28-Tr細胞，但處于疾病初發(fā)期時該細胞群可能存在功能缺陷，無法發(fā)揮正常的抑制功能。治療緩解組患者CD8+CD28-Tr細胞數(shù)明顯上升，可抑制體內異?；罨腡細胞和抗原遞呈細胞的功能，減輕免疫損傷。

綜上所述，外周血CD8+CD28-和CD4+CD25+Tr細胞與GD的發(fā)生發(fā)展密切相關。進一步研究Tr細胞生物學特性及其在GD中的致病機制，將有助于GD的免疫治療及防治。

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Study on the relationship between regulatory T cell CD4+CD25+and CD8+CD28-in the peripheral blood between graves disease

WEIWei,LINYing-hui,HUANGXiao-qi

(theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiChineseMedicineUniversity,Nanning,Guangxi530023,China)

Objective To analyze the changes of the levels of CD4+CD25+and CD8+CD28-T cells in the peripheral blood in patients with graves disease(GD).Methods A total of 43 patients with GD were selected as objects in this study,19 cases who were diagnosis in outpatient department were selected into incipience group,24 cases who were treated and the thyroid function return to normal status were selected into alleviation group,meanwhile 20 healthy persons were recruited into control group.The levels of CD4+CD25+and CD8+CD28-regulator T cells in the peripheral blood were detected by flow cytometry.Results The CD4+CD25+regulatory T cell levels in incipience group were (4.56±4.14)%,which was significant lower than(8.84±4.45)% in the control group (P<0.05).The CD8+CD28-regulatory T cell levels in incipience group and control gruop were(14.95±5.38)%,(10.65±6.37)respectively，the difference had no significant difference (P>0.05)，the CD4+CD25+regulatory T cell level in the alleviation group was(6.99±6.35)%,which had no significant difference with the control group (P>0.05)，CD8+CD28-regulatory T cell level in the alleviation group was(20.48±6.07)%,which was significant higher than that in the control group (P<0.05).Conclusion The level of CD4+CD25+regulatory T cell in GD patients indicate that they might play an essential role in the pathogenesis of GD.CD8+CD28-regulatory T cell plays important roles during the development of the disease in patients with GD.

graves disease； CD4+CD25+； CD8+CD28-； regulatory T cell

韋巍，女，碩士，主管技師，主要從事臨床血液檢驗方面研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.016

A

1672-9455(2015)10-1376-02

2014-10-08

2015-01-12)