1例易漏檢的CisAB01/A血清學鑒定和基因分型

黃 嫻，呂麗霞，安仕萍△

(1.天津市血液中心 300110；2.天津市環(huán)湖醫(yī)院 300060)

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1例易漏檢的CisAB01/A血清學鑒定和基因分型

黃 嫻1，呂麗霞2，安仕萍1△

(1.天津市血液中心 300110；2.天津市環(huán)湖醫(yī)院 300060)

CisAB； ABO亞型； 血清學； 基因分型

CisAB血型為ABO血型中罕見的亞型，初檢時常表現(xiàn)為正反定型不符[1]。但在醫(yī)院送檢的ABO正反定型不符的標本中，作者發(fā)現(xiàn)1例患者血樣在室溫下初檢時正反定型均為A型，經(jīng)過進一步血清學鑒定和基因分型檢測后判定為CisAB01/A型，從而避免了血型的誤判，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 標本來自天津市某醫(yī)院2013年7月就診的腫瘤患者，女，52歲，臨床診斷為右乳腫物。無輸血史和妊娠史。

1.2 試劑 抗-A、抗-B、抗-A1和反定型試劑紅細胞均由上海血液生物有限公司提供?？?H血清來自Bio-Rad公司。人源抗-A、抗-B和抗-AB血清由天津市血液中心免疫血液學研究室自行配制。基因組DNA提取試劑盒為北京天根生化科技有限公司產(chǎn)品；基因分型試劑盒來自天津市秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司，包括人類ABO血型-B亞型檢測和人類ABO血型-CisAB、B(A)檢測兩種試劑盒；DNA Marker DL2000購自TaKaRa大連寶生物公司。

1.3 血型血清學檢測 使用外周靜脈血，乙二胺四乙酸 (EDTA)抗凝。試管法進行ABO正反定型，先在室溫下離心看結(jié)果，然后置于4 ℃冰箱10 min后，再次離心判讀結(jié)果。用抗-A1、抗-H血清檢測血型抗原。采用吸收放散試驗檢測弱的抗原，步驟參見文獻[2]。

1.4 基因分型檢測 采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物(PCR-SSP)法。按照說明書進行基因組DNA的提取。在ABO分型PCR反應板中，每孔反應體系為20 μL。反應條件均遵守說明書：96 ℃預溫2 min；96 ℃ 20 s，68 ℃ 60 s，5個循環(huán)；96 ℃ 20 s，65 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，10個循環(huán)；96 ℃ 20 s，62 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，15個循環(huán)；72 ℃延伸，其中人類ABO血型-B亞型檢測為延伸1 min，CisAB、B(A)檢測為延伸3 min。220 V穩(wěn)壓電泳30 min，采用凝膠成像系統(tǒng)觀察。

2 結(jié) 果

2.1 血清學鑒定 在室溫反應條件下，標本的正反定型均為A型，但置于4 ℃ 10 min后，標本紅細胞與單克隆抗B和人源抗B血清均出現(xiàn)弱凝集，如表1所示。標本紅細胞與抗H血清凝集強度為w+(Oc對照：+++；Bc對照：w+)。將標本紅細胞與O型對照紅細胞分別使用人源抗B血清于4 ℃進行吸收試驗，然后進行56 ℃熱放散，放散液與B細胞作凝集實驗，標本紅細胞的放散液凝集強度為++++，O型對照紅細胞的放散液凝集強度為0。血清學分析，標本紅細胞含正常A1抗原，B抗原弱，血清含抗-B抗體，為ABx亞型。

表1 標本正反定型結(jié)果

2.2 基因分型 圖1為CisAB、B(A)檢測，顯示1、2孔為陽性，1、2孔為CisAB01的特異性擴增孔，根據(jù)試劑盒提供的讀板紙判斷含有CisAB01基因。圖2為B亞型檢測，僅第36孔陽性，顯示含有A基因。標本基因分型結(jié)果為CisAB01/A。

圖1 標本CisAB、B(A)基因檢測電泳圖譜

圖2 標本B亞型基因檢測電泳圖譜

3 討 論

1964年，疑似CisAB血型案例最早被報道[3]。CisAB遺傳機制有兩種可能的解釋，一種是染色體不等交換，另一種是糖基轉(zhuǎn)移酶基因的錯義突變，從目前的文獻看后者更常見。已經(jīng)報道的CisAB等位基因有4種，其中本例標本所屬的CisAB01等位基因，據(jù)文獻報道，其基因型是在A*101的基礎(chǔ)上有nt467(C→T)和nt803位(G→C)的點突變[4]。

通常所說的CisAB是指CisAB/O，其血清學特征常被描述為A2Bx[5]或A2B3，B抗原通常表達很弱，H抗原水平很高，血清中通常有弱的抗B，但其A抗原一般比A2B表達多，比A1B表達少[6]。本例CisAB/A的血清學特征與CisAB/O不同，與抗-A1強凝集，與抗B血清反應更弱(僅在4 ℃弱凝集)，而H抗原含量與B型細胞相仿，遠不及O型細胞，疑似ABx。其原因是一條染色體為A基因，另一條染色體為CisAB01基因。2003年，許先國等[7]報道CisAB01等位基因，2013年，于曉麗等[8]報道CisAB01與B等位基因雜合，但CisAB與A等位基因雜合的報道僅見于家系中[9]，尚未有先證者案例報道。

本例標本在室溫條件下初檢表現(xiàn)為正常的A型，但醫(yī)院送檢時標注正反定型不符，謹慎起見，作者采用更豐富的方法鑒定血型，避免了血型誤判。這提醒檢驗人員在血型檢測工作中，應采用多種血清學方法，仔細觀察ABO血型正反定型不一致現(xiàn)象，防止ABO亞型的漏檢，必要時采用分子生物學技術(shù)加以輔助鑒定[10]。若本例標本的患者需要輸血，由于其紅細胞與抗-A強凝集、與抗-B弱凝集，血清中存在抗-B，以輸注O型洗滌紅細胞和AB型血漿為佳[11]。

[1]孫玉芹，吳曉黎，孫迪，等.cisAB血型家系分析1例[J].中國輸血雜志，2013，26(1):81-82.

[2]蘭炯采，贠中橋，陳靜嫻.輸血免疫血液學實驗技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:32-42.

[3]杰夫·丹尼爾.人類血型[M].北京:科學出版社，2007:47-48.

[4]郭忠慧，向東，朱自嚴，等.罕見的CisAB與B(A)血型的基因型研究[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志，2004，21(4):321-324.

[5]王志強，閆學莉，李新新，等.罕見的cisAB血型鑒定及家系調(diào)查[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2012，50(32):119-123.

[6]Hummel K，Badet J，Bauermeister W，et al.Inheritance of Cis-AB in three generations(family Lam) [J].Vox Sang，1977，33(5):290-298.

[7]許先國，洪小珍，朱發(fā)明，等.cisAB亞型第6、7外顯子及側(cè)翼內(nèi)含子序列分析[J].臨床檢驗雜志，2003，21(2):69-71.

[8]于曉麗，趙衛(wèi)軍.對1例罕見CisAB01/B血型的基因?qū)W研究[J].中國輸血雜志，2013，26(7):619-621.

[9]相曉，侯濤，趙廣超，等.罕見cisAB血型家族的遺傳學分析[J].醫(yī)學研究生學報，2013，26(12):1279-1281.

[10]蘭炯采，陳靜嫻，馬紅麗，等.推薦ABO疑難血型三步分析法[J].中國輸血雜志，2010，23(3):165-168.

[11]何子毅，劉赴平，胡應明，等.一例稀有CisAB 血型血清學及遺傳機理分析[J].中國生物制品學雜志，2012，25(11):1524-1526.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.068

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1672-9455(2015)02-0284-02

2014-05-29

2014-11-09)

△通訊作者，E-mail:x-huang04@163.com。