RhD(-)無(wú)親緣關(guān)系獻(xiàn)血者Du和 Del變異型分布調(diào)查*

劉文國(guó)，郭長(zhǎng)義，宋雪冬，宋任浩

(1.河北省廊坊市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 065700；2.河北省

?

·臨床研究·

RhD(-)無(wú)親緣關(guān)系獻(xiàn)血者Du和 Del變異型分布調(diào)查*

劉文國(guó)1，郭長(zhǎng)義1，宋雪冬1，宋任浩2△

(1.河北省廊坊市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 065700；2.河北省

血液中心檢驗(yàn)科，石家莊 050071)

目的 調(diào)查RhD(-)無(wú)親緣關(guān)系獻(xiàn)血者Du和 Del變異型分布情況。方法 對(duì)鹽水法初篩為RhD(-)無(wú)親緣關(guān)系獻(xiàn)血者采用間接抗球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)Du型，采用吸收放散法檢測(cè)Del型。結(jié)果 初篩為RhD(-) 327例標(biāo)本中,檢出Du 20例,占6.12%,Del型51例,占15.59%,確證RhD(-)256例,占78.29%。確證RhD(-)獻(xiàn)血者中ccee表現(xiàn)型最多,占48.32%,其次是Ccee,占23.55%；Du型中ccEe占3.98%,其次是Ccee,占1.53%；Del型中Ccee占10.70%,CCee占1.83%。結(jié)論 常規(guī)檢測(cè) RhD(-)的獻(xiàn)血者應(yīng)采用更為敏感的試驗(yàn)確證是否為Du型或Del型。為保障輸血安全，Du型和Del型獻(xiàn)血者應(yīng)作RhD陽(yáng)性看待，而作為受血者則應(yīng)視為RhD陰性。

RhD(-)血型； Du型； Del型

RhD抗原對(duì)輸血的影響僅次于ABO抗原，具有重要的臨床意義，因此，人們對(duì)RhD抗原的研究較為深入。RhD基因的重組、突變、缺失及mRNA的表達(dá)水平下降，導(dǎo)致了紅細(xì)胞的RhD血型出現(xiàn)許多變異型，其中Du型及Del型最為常見[1]。Du型及Del型由于D抗原表達(dá)較弱，常規(guī)血型血清學(xué)方法檢測(cè)一般為陰性，采用較為敏感的間接抗球蛋白試驗(yàn)和吸收放散法仍可檢測(cè)出D抗原。目前，已有RhD(-)患者因輸入Rh Du或Del型血液后產(chǎn)生了抗-D或抗-D效價(jià)升高的報(bào)道[2]。因此，在RhD(-)獻(xiàn)血者中排除Du、Del的個(gè)體,對(duì)于建立真正的RhD(-)血型庫(kù)以保證安全輸血十分重要。為此作者采用間接抗球蛋白試驗(yàn)和吸收放散試驗(yàn)對(duì)河北地區(qū)初篩RhD(-)獻(xiàn)血者Du和 Del變異型分布調(diào)查,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年5月至2014年5月河北省血液中心鹽水法初篩為RhD(-)無(wú)親緣關(guān)系獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本327份。進(jìn)一步采用間接抗球蛋白試驗(yàn)檢測(cè)Du型，采用吸收放散法檢測(cè)Del型。

1.2 主要試劑與儀器 單克隆IgM抗-D、單克隆IgG抗-D、人源性多克隆抗-D(德國(guó)Biotest公司、上海血液生物公司、北京金豪制藥公司)；單克隆IgG+IgM抗-D(加拿大Dominion公司、德國(guó)Biotest公司、法國(guó)Diagast公司)；單克隆抗-C、抗-c、抗-E、抗-e和抗球蛋白試劑(北京金豪制藥有限公司)。2991型血細(xì)胞洗滌機(jī)(美國(guó)Gambro公司)、80-2 型離心沉淀器(上海手術(shù)機(jī)械廠)、TD4M血細(xì)胞洗滌離心機(jī) (長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司)、BHW 2型水浴箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠)、奧林巴斯CX21BIM-SET5生物顯微鏡(上海皖寧精密科學(xué)儀器有限公司) 和QL-861漩渦混合器(常州杰博森儀器有限公司)。

1.3 方法 RhD(-)初篩及確認(rèn):操作步驟參照文獻(xiàn)[3]。用3批不同來源的單克隆 IgM 抗-D試劑作鹽水法初篩試驗(yàn),凝集者為 RhD(+)，未凝集者為 RhD(-)；未凝集者用單克隆抗-C、抗-c、抗-E和抗-e鑒定其表型，同時(shí)3種不同來源的人源性多克隆抗-D和單克隆IgG+IgM抗-D進(jìn)行間接抗人球蛋白試驗(yàn),凝集者判為Du；未凝集者用單克隆 IgM抗-D試劑及單克隆IgG抗-D試劑作乙醚吸收放散試驗(yàn)，凝集者確定為Del型。

2 結(jié) 果

初篩為RhD(-)標(biāo)本327例中,檢出Du 20例,占6.12%,Del型51例,占15.59%,確證RhD(-)256例,占78.29%。確證RhD(-)獻(xiàn)血者中ccee最多,占48.32%,其次是Ccee,占23.55%；Du型中ccEe占3.98%,其次是Ccee,占1.53%；Del型中Ccee占10.70%,CCee占1.83%。327例初篩為RhD(-)獻(xiàn)血者Rh 系統(tǒng)表型分布見表1。

表1 327例初篩為RhD(-)獻(xiàn)血者Rh 系統(tǒng)表型分布[n(%)]

3 討 論

Rh血型系統(tǒng)是最具多態(tài)性的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，與臨床輸血密切相關(guān)的有D、C、c、E、e等5種抗原，免疫強(qiáng)度依次為D、E、c、C、e，約80%的RhD陰性個(gè)體在接受1 U的RhD陽(yáng)性紅細(xì)胞刺激后即可產(chǎn)生抗-D[4],我國(guó)衛(wèi)生部于2000年頒發(fā)了《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》，明確要求采供血機(jī)構(gòu)在采集、供應(yīng)血制品前必須進(jìn)行Rh 血型檢測(cè)。近年來隨著輸血實(shí)踐的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)部分RhD(-)個(gè)體擁有常規(guī)檢測(cè)方法如鹽水法難以檢測(cè)出的弱D抗原。弱D抗原是由于基因重組、缺失、點(diǎn)突變、無(wú)義突變以及 mRNA 的表達(dá)水平下降而導(dǎo)致的，與D抗原基本上無(wú)區(qū)別,只是比RhD陽(yáng)性的紅細(xì)胞膜上的D抗原位點(diǎn)少,表達(dá)減弱。弱D抗原最為常見的為Du和 Del變異型，只能用間接抗球蛋白試驗(yàn)和吸收放散技術(shù)才能檢出。

調(diào)查顯示，本地區(qū)Du型在初篩陰性獻(xiàn)血者中的分布頻率較低，為6.12%，與有關(guān)調(diào)查結(jié)果相近[5]。Du型紅細(xì)胞在抗人球蛋白介質(zhì)中能夠與IgG抗D血清發(fā)生凝集，說明Du型紅細(xì)胞上含有一定的RhD抗原表位。有研究顯示,Du型紅細(xì)胞可刺激RhD(-)受血者產(chǎn)生IgG 抗D[6]。在RhD(-)獻(xiàn)血者中Del型的檢出率為15.59%，與云南地區(qū)接近[7]，但低于海南地區(qū)29.25%的檢出率[8]，說明Del型的分布存在一定的地區(qū)差異，但還有待于大標(biāo)本量的進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)顯示,Del型紅細(xì)胞在抗人球蛋白介質(zhì)中不能與IgG抗D出現(xiàn)凝集，只能用更加敏感的吸收放散試驗(yàn)才能檢出,說明Del型紅細(xì)胞上含有較少的RhD抗原表位。盡管如此,Del型獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞仍可刺激受血者發(fā)生同種免疫反應(yīng)而產(chǎn)生IgG抗D[9]，因此，為保障輸血安全，Du型和Del型獻(xiàn)血者應(yīng)作RhD陽(yáng)性看待，而作為受血者則應(yīng)視為RhD陰性。由于Del型紅細(xì)胞上抗原表位極少，由此引起同種免疫反應(yīng)的概率較小。因此，若RhD(-)患者要急需用血，此時(shí)又找不到完全適合的血液，這時(shí)可將Del型作為RhD陰性血液來用。不過，這種做法僅限在RhD陰性血液缺乏時(shí)應(yīng)急使用。

調(diào)查還顯示，RhD(-)獻(xiàn)血者的表現(xiàn)型以 ccee型(48.32%)和 Ccee型(23.55%) 所占比重最大,與有關(guān)報(bào)道基本一致[10]。在Du型獻(xiàn)血者中，表現(xiàn)型分布以ccEe型為最多，而在Del型獻(xiàn)血者中，以Ccee型為最多。有研究報(bào)道Del型與C抗原有一定的相關(guān)性[11],但因檢測(cè)的標(biāo)本量較少,還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，常規(guī)檢測(cè) RhD(-)的獻(xiàn)血者應(yīng)采用更為敏感的試驗(yàn)確證是否為Du型或Del型。為保障輸血安全，Du型和Del型獻(xiàn)血者應(yīng)作RhD陽(yáng)性看待，而作為受血者則應(yīng)視為RhD陰性。

[1]李嵐,伍昌林,黨鑫堂,等.Rh陰性血型篩查及不規(guī)則抗體檢測(cè)的臨床意義[J]．中國(guó)生物制品學(xué)雜志,2011,4(5):594-595.

[2]王寶燕,張建耕,徐華,等．Rh陰性個(gè)體輸入Del紅細(xì)胞產(chǎn)生抗-D免疫的研究[J]．中國(guó)輸血雜志,2011,24(7):592-595．

[3]周國(guó)平,謝云崢,向東,等.上海市Rh陰性獻(xiàn)血者D變異型與不規(guī)則抗體調(diào)查[J]．臨床檢驗(yàn)雜志,2009,27(3):233-234.

[4]段福才,曹燕飛,李建華,等.Rh弱D和Del及不規(guī)則抗體的檢測(cè)及意義探討[J]．臨床血液學(xué)雜志,2013,26(6):420-421.

[5]楊珊,孔慶芳,譚慶芬.Rh 弱D、Del 的檢測(cè)及臨床意義探討[J]．海南醫(yī)學(xué),2010,21(16):106-107.

[6]康瓊英，閆國(guó)超.68例初篩RhD陰性患者血清學(xué)陰性確認(rèn)及抗體檢測(cè)的臨床意義[J]．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2013,23(6):1615-1616.

[7]蔡玲君,丁權(quán),陳文仙,等.云南地區(qū)RhD陰性個(gè)體RhD基因研究[J].中國(guó)輸血雜志,2006,19(6):452-453.

[8]葉健忠,楊向萍,蔡于旭,等．海南漢族RhD陰性個(gè)體RHD基因研究[J]．中國(guó)輸血雜志,2005,18(2):97-100．

[9]章旭,林鳳秋,李劍平,等.DEL 型個(gè)體抗體篩選的調(diào)查分析[J]．中國(guó)輸血雜志,2009,22(10):796-799．

[10]邱艷,楊海平,苗天紅,等.北京獻(xiàn)血人群Rh血型抗原的分布[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2006,8(3):230-231.

[11]陳善華,丁琪,楊育紅,等.洛陽(yáng)地區(qū)RhD陰性無(wú)償獻(xiàn)血者表型分布調(diào)查[J].中國(guó)輸血雜志,2009,22(11):921-922.

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20130133)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.030

A

1672-9455(2015)02-0211-02

2014-06-17

2014-09-22)

△通訊作者，E-mail：songrenhao888@163.com。