番禺地區(qū)小兒下呼吸道感染病原體檢測及意義

彭紅波,龔 亮

(1.廣州市番禺何賢紀(jì)念醫(yī)院檢驗科 510602;2.解放軍458醫(yī)院肝病防治中心臨床實驗科，廣州 510602)

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·論 著·

番禺地區(qū)小兒下呼吸道感染病原體檢測及意義

彭紅波1,龔 亮2

(1.廣州市番禺何賢紀(jì)念醫(yī)院檢驗科 510602;2.解放軍458醫(yī)院肝病防治中心臨床實驗科，廣州 510602)

目的 為了解番禺地區(qū)小兒下呼吸道感染的病原學(xué)流行情況，指導(dǎo)臨床合理預(yù)防。方法 采用間接免疫熒光技術(shù)對1 050例患兒進(jìn)行嗜肺軍團(tuán)菌血清1型(LPS)、肺炎支原體(MP)、Q熱立克次體(QFR)、肺炎衣原體(CPn)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(IFVA)、乙型流感病毒(IFVB)和副流感病毒1、2和3型(PIV1、2、3)等9種病原微生物進(jìn)行檢測。結(jié)果 1 050例下呼吸道感染患兒檢出非典型病原體陽性病例706例。其中以MP和RSV陽性率最高，分別占26.3%和26.0%。不同年齡階段主要陽性病原體有差異。結(jié)論 嬰兒組以病毒感染為主，兒童組以MP感染及混合性感染為主，該結(jié)果表明各種病原體對不同人群的易感性存在差異。嬰兒與兒童的免疫功能成熟程度不同可能是導(dǎo)致易感性差異的根本原因，通過針對不同年齡段嬰幼兒搭配飲食、增加運動量和合理使用抗生素可能是減少小兒下呼吸道感染的有效措施。

下呼吸道感染； 病原體； 兒童

呼吸道感染非典型病原體目前主要是指肺炎支原體(MP)、Q熱立克次體(QFR)、肺炎衣原體(CPn)、腺病毒(ADV)等。國內(nèi)報道兒童肺炎中非典型病原體引起者約占30%[1]。非典型病原體對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素敏感而對β-內(nèi)酰胺類抗生素和氨基糖苷類抗生素耐藥。明確病原體、早期診斷、合理用藥是兒科臨床醫(yī)師高度重視的問題。為了解番禺區(qū)兒童下呼吸道感染狀況，作者對2012年1月至2013年6月來南方醫(yī)科大學(xué)附屬何賢紀(jì)念醫(yī)院就診的1 050例患兒進(jìn)行了9種非典型病原體IgM檢測，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 檢測對象為2012年1月至2013年6月來南方醫(yī)科大學(xué)附屬何賢紀(jì)念醫(yī)院就診的年齡在0～12歲的1 050例患兒，對不同年齡段和不同季節(jié)的非典型病原體感染情況進(jìn)行觀察。按年齡段分為三組：嬰兒組(≤1歲)485例、幼兒組(>1～3歲)332例、兒童組(>3～12歲)208例；對非典型病原體陽性病例按季節(jié)分為春、夏、秋、冬四組。

1.2 檢測方法 兒童非典型肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《諸福棠實用兒科學(xué)》7版急性支氣管炎、支氣管肺炎、毛細(xì)支氣管炎和喘息性支氣管炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。應(yīng)用間接免疫熒光法(IFA)檢測患兒血清標(biāo)本中呼吸道感染主要病原體的IgM抗體，可檢病原體包括嗜肺軍團(tuán)菌血清1型(LPS)、MP、QFR、CPn、ADV、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(IFVA)、乙型流感病毒(IFVB)和副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3)等9種病原體。

1.3 檢測儀器及試劑 BK-FL熒光顯微鏡；非典型病原體聯(lián)檢試劑由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供(生產(chǎn)批號 L201-M229)。

1.4 檢測步驟 抽取患者靜脈血離心，用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)1∶1比例稀釋血清標(biāo)本充分混合，取30 μL稀釋后的血清加入150 μL吸附劑中徹底搖勻，3 500 r/min離心10 min，除去沉淀。在載玻片的每孔中加15 μL吸附劑處理過的血清，同時在另外兩張載玻片中作陰陽對照實驗。將載玻片放入濕盒中37 ℃溫育90 min。用PBS沖洗載玻片后，浸泡在PBS中并放置在水平搖床上輕輕搖動10 min。將載玻片用蒸餾水緩慢沖洗后自然晾干。每孔加入15 μL異硫氰酸熒光素(FLTC)結(jié)合物溶液，放入濕盒37 ℃溫育30 min后重復(fù)上述沖洗步驟，自然晾干后，加封閉介質(zhì)，蓋上蓋玻片，用顯微鏡放大400倍觀察結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料使用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 1 050例下呼吸道感染患兒病原體檢測結(jié)果 1 050例下呼吸道感染患兒檢出非典型病原體陽性病例319例。其中以MP和RSV陽性率最高，分別占26.3%和26.0%。病毒感染約占49.5%。其中嬰兒、幼兒、兒童病毒感染陽性率分別為69.8%(67/96)、46%(65/141)、31.7%(26/82)。其他非典型病原體(包括LPS，MP，QFR，CPn，ADV，RSV，IFVA，IFVB和 PIV 1、2、3)陽性率分別為1.3%、26.3%、0.0%、0.0%、7.2%、26.0%、0.9%、14.1%和1.3%，其中兩項或三項非典型病原體的陽性率分別為20.4%和2.5%。

2.2 呼吸道非典型病原體陽性構(gòu)成及病原年齡分布 319例陽性病例中在各組中的分布為嬰兒組96例(19.79%)、幼兒組141例(42.47%)、兒童組82例(39.42%)，三組陽性病例構(gòu)成比經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=55.67，P<0.05)。三組患兒陽性發(fā)病并且在各組中主要陽性病原體也各不相同，嬰兒組以RSV感染為主，占陽性總數(shù)的47.9%；幼兒組以MP和RSV這兩種病原體感染為主，分別占陽性總數(shù)的32.6%和21.3%；兒童組以MP感染為主，占陽性總數(shù)的26.8%。對照組25例，并沒有檢測出病原體。詳見表1。

2.3 各年齡組患兒非典型病原體混合感染率 如表2所示，患兒下呼吸道病原體聯(lián)檢標(biāo)本中所有混合感染73例，混合感染率為7%(73/1 050)，占陽性感染率為22.8%(73/319)。其中任意兩種病原體混合感染陽性65例，占陽性感染率為20.3%(65/319)，以同時感染MP和IFVB這兩種病原體為主。任意三中病原體感染陽性8例，占陽性感染率為2.5%(8/319)，8例混合感染的病原體感染組合各不相同。

2.4 小兒呼吸道非典型肺炎季節(jié)分布比較 對319例患兒不同病原體導(dǎo)致的非典型肺炎季節(jié)分布進(jìn)行統(tǒng)計分析，顯示春季42例、夏季3例、秋季57例、冬季217例。各類非典型病原體所致肺炎季節(jié)分布存在明顯差異，LPS好發(fā)于夏末秋初，MP好發(fā)于秋冬季，ADV與RSV好發(fā)于冬春季，IFAV與IFVB好發(fā)于冬季，PIV好發(fā)于秋冬季。詳見表2。

表1 非典型支原體肺炎病原體構(gòu)成及病原體年齡分布[n(%)]

表2 各類小兒呼吸道非典型肺炎季節(jié)分布情況比較[n(%)]

注：經(jīng)似然比χ2檢驗，各類小兒呼吸道非典型肺炎季節(jié)分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義，χ2=154.79,P<0.01。

3 討 論

3.1 病毒感染是番禺區(qū)下呼吸道炎感染的主要原因 近年來由非典型病原體感染引發(fā)肺炎逐漸引起臨床醫(yī)師重視，國內(nèi)報道兒童肺炎中非典型病原體引起者約占30%[1]。本次調(diào)查結(jié)果顯示，番禺區(qū)兒童非典型病原體所致肺炎占兒童肺炎的30.4%，與該報道相近；但與另一篇國內(nèi)報道中兒童呼吸道感染以病毒感染為主，約占陽性總體的70%～80%差別較大[3]。本次調(diào)查結(jié)果顯示：病毒(ADV、RSV、IFVA/B、PIV1/2/3)感染約占49.5%(158/319)。盡管差別較大，但病毒感染在總體陽性中仍占較高比例。從數(shù)據(jù)顯示得：嬰兒組的病毒感染陽性率為69.8%(67/96)，幼兒組病毒感染陽性率為46%(65/141)，兒童組病毒感染陽性率為31.7%(26/82)，隨著年齡的增長，病毒感染的概率呈下降趨勢，這可能也與兒童自身免疫系統(tǒng)的發(fā)育有很大關(guān)系。患兒MP的感染率與年齡有關(guān)，5歲以上兒童肺炎中MP感染者可高達(dá)50%以上[6]。番禺區(qū)年長兒童也是MP感染的高發(fā)人群?；旌闲愿腥疽惨訫P及IFVB混合性感染為主。

3.2 嬰兒組下呼吸道感染主要病原體及預(yù)防 新出生的嬰兒免疫功能尚未健全，同時母乳缺乏常見嬰幼兒感染的特異性抗體[4]。因此，嬰幼兒組感染病毒的風(fēng)險比兒童組的大。多種病毒感染中以RSV感染為主，占病毒感染陽性的68%(46/67)。RSV是一種導(dǎo)致世界范圍內(nèi)5歲以下嬰幼兒高致病率和病死率的呼吸道主要病原體[5]。RSV通過噴嚏飛沫或直接接觸感染者分泌物而傳播。RSV在固體表面可存活12 h，人類是RSV唯一的傳染源。RSV感染后通常持續(xù)排毒3～8 d，但在早產(chǎn)兒和免疫缺陷者中排毒時間更長。在RSV流行季節(jié)，RSV是一種重要的醫(yī)院內(nèi)感染源，在擁擠的有RSV感染如兒科病房、ICU、游樂場所、兒童樂園等，通過醫(yī)護(hù)人員、患者、家屬、兒童間相互傳播。隔離是阻斷RSV傳播的有效方法。父母應(yīng)在家里采取簡單的預(yù)防措施如注意與感染嬰兒隔離、日常勤洗手等。醫(yī)護(hù)人員應(yīng)建議高危兒童家長避免帶兒童到人多擁擠地方如日托機構(gòu)等，同時避免在家吸煙及讓嬰兒接觸呼吸道感染患者。

3.3 幼兒組下呼吸道感染病原體及預(yù)防 從數(shù)據(jù)顯示：幼兒組中MP感染占該組陽性率的32.6%(46/141)，RSV感染占21.3%(30/141)，IFVB感染占16.3%(23/141)，任意兩種病原體混合感染占15.6%(22/141)。1～3歲的幼兒處于多種可能性病原體感染的敏感時期。此時的幼兒有一定的免疫功能但尚未成熟，母乳喂養(yǎng)減少，飲食習(xí)慣改變，同時多次的病毒感染損害呼吸道局部防御功能，是導(dǎo)致呼吸道內(nèi)潛伏菌侵入的原因。幼兒組下呼吸道感染沒有以某一種病原為主，需從多方面預(yù)防。如要多做戶外活動，進(jìn)行空氣、日光、水“三浴”鍛煉，以增強體質(zhì)，提高對外界環(huán)境的適應(yīng)能力和抗病能力。食物制作要細(xì)、爛、軟、香、色、味，且經(jīng)常變換口味，以增進(jìn)幼兒的食欲，合理搭配膳食。

3.4 兒童組下呼吸道感染病原體及預(yù)防 從數(shù)據(jù)顯示得：兒童組的任意兩種病原體混合感染占陽性率的37.8%(31/82)。MP感染占陽性感染率的26.8%(22/82)。呂蓉蓉[6]報道年長兒童因多方面的原因會出現(xiàn)抗生素濫用情況，導(dǎo)致菌落生態(tài)失衡，病毒或細(xì)菌?；旌细腥尽Ｍ瑫r，MP是介于病毒和細(xì)菌之間的一種“胸膜肺炎樣微生物”，沒有細(xì)胞壁，阻礙細(xì)胞壁的抗生素對其沒有作用，相反細(xì)菌的蛋白合成抑制劑及MP的免疫血清可抑制菌落生長[6]?，F(xiàn)在有大量的文章提到有關(guān)小兒肺炎支原體感染的治療方案[7-8]，比較常用的方法是使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。原因是肺炎支原體寄生于宿主細(xì)胞外，無細(xì)胞壁，故作用于微生物細(xì)胞壁的抗生素如青霉素、頭孢菌素等對其無效，而四環(huán)素類、喹諾酮類和氨基糖苷類抗生素不可用于小兒，故大環(huán)內(nèi)酯類是目前小兒肺炎支原體感染的首選抗生素。

通過對在番禺區(qū)南方醫(yī)科大學(xué)附屬何賢紀(jì)念醫(yī)院兒科就診治療的小兒進(jìn)行下呼吸道感染病原學(xué)檢測及結(jié)果分析，了解到番禺地區(qū)小兒下呼吸道感染以MP及RSV感染為主，需作遠(yuǎn)離密集人群，合理用膳，對癥用藥，接種疫苗等方式預(yù)防。

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Pathogen detection of child lower respiratory tract infections in Panyu area and its meaning

PENGHong-bo1,GONGLiang2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,HexianMemorialHospitalofPanyuDistrict,Guangzhou,Guangdong511400,China;2.ClinicalLaboratory,HepatopathyTreatmentandPreventionCenter458HospitalofPLA,Guangzhou,Guangdong510602,China)

Objective To understand the prevalence situation of child lower respiratory tract infections in Panyu area for guiding rational drug use in clinic.Methods 9 kinds of pathogenic microorganism,including legionella pneumophila serotype 1 (LPS),Mycoplasma pneumoniae (MP),Q fever Rickettsia (QFR),Chlamydia pneumoniae (CPn),adenovirus(ADV),respiratory syncytial virus (RSV),influenza A virus (IFVA),influenza B virus (IFVB) and parainfluenza virus type 1,2 and 3 (PIV1,2,3) in 1 050 children patients were detected by the indirect immunofluorescence technique.Results Among 1 050 children cases of lower respiratory tract infections,706 positive cases of atypical pathogens were detected out,in which MP and RSV had the highest positive rate,accounting for 26.3% and 26.0% respectively.The main positive pathogens in different age groups were different.Conclusion The viral infection is predominant in the infants group and the MP infection and the mixed infection are predominant in the children group.These results indicate that the difference exists in the susceptibility of various pathogens.The different mature degrees of immune system in infants and children may be the root reasons leading to the susceptibility difference.It may be an effective way to reduce the lower respiratory tract infections by giving proper mixed diet,increasing exercise amount and rational use of antibiotics aiming at different age groups of infants and children.

lower respiratory tract infections; pathogen; children

彭紅波，女，主管技師，本科/學(xué)士學(xué)位，主要從事臨床檢驗工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.022

A

1672-9455(2015)02-0193-03

2014-03-162

2014-08-30)