冠心病微生物感染狀況與血清3種炎癥標志物的相關(guān)性研究*

沈云峰,胡遠貴，張洪波

(武漢市第六醫(yī)院檢驗科 430015)

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·論 著·

冠心病微生物感染狀況與血清3種炎癥標志物的相關(guān)性研究*

沈云峰,胡遠貴△，張洪波

(武漢市第六醫(yī)院檢驗科 430015)

目的 探討冠心病患者肺炎衣原體(CPN)、幽門螺桿菌(Hp)、人類巨細胞病毒(HCMV)3種病原微生物的感染狀況與3種血清炎癥標志物[超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、白細胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)]水平的相關(guān)性。方法 選取2012年7月至2013年12月住院的冠心病患者105例作為冠心病組，同時選擇同期住院非冠心病患者76例作為對照組。檢測兩組CPN、Hp、HCMV 3種微生物的IgG抗體，以及血清中hs-CRP、IL-6和TNF-α濃度。結(jié)果 冠心病組CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG 單陽性、雙陽性和三陽性的陽性率分別為33.3%、52.3%、78.1%、41.9%、13.3%，對照組陽性率則分別為14.5%、35.5%、63.2%、23.7%、2.6%，兩組的相應陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CPN-IgG 、Hp-IgG和HCMV-IgG陽性對患冠心病的危險度比值比分別為3.297、2.278、2.352，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。隨著冠心病的病原體感染負荷增加，3種血清炎癥標志物濃度亦增加，每組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論 冠心病患者存在CPN、Hp、HCMV 3種病原微生物的混合感染，長期反復慢性混合感染與冠心病關(guān)系密切，可誘導炎癥標志物之間相互協(xié)同共同參與冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程。感染性因素是冠心病的獨立危險因素，對冠心病的診斷治療有積極意義。

冠心病； 肺炎衣原體； 幽門螺桿菌； 人類巨細胞病毒； 超敏C-反應蛋白； 白細胞介素-6； 腫瘤壞死因子α

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)是一類嚴重危害人類健康、影響生活質(zhì)量的常見病，近年隨著人們生活水平的提高、生活方式的改變，在我國的發(fā)病率呈日益增長趨勢。其病因尚未完全確定，已知的危險因素，如年齡、性別、血脂、血壓、吸煙、糖尿病等不能充分解釋。國內(nèi)外多種研究表明：感染與冠心病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，在冠心病患者中存在微生物的慢性感染，感染與炎癥在冠心病發(fā)病中的作用引起了人們的重視，有很多不同的爭論[1-5]，并且研究其中一種微生物感染與冠心病發(fā)生的相關(guān)性存在局限性。因此本文中選擇了肺炎衣原體(CPN)、幽門螺桿菌(Hp)、人類巨細胞病毒(HCMV)3種在人體中感染率較高的病原體作為研究對象，了解冠心病患者微生物的感染狀況以及單感染率和協(xié)同感染率，以及不同感染狀況的冠心病患者的超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、白細胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)3種炎癥標志物的變化，為尋找冠心病發(fā)病的危險因素、預防及治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年7月至2013年12月在本院心血管科住院治療患者共105例(冠心病組)。冠心病診斷標準：根據(jù)患者癥狀、體征、心電圖表現(xiàn)及心肌酶學檢查，通過冠狀動脈造影[6-8]，左主干、左前降支、左四旋支及右冠狀動脈至少1支狹窄程度大于或等于50%者診斷為冠心病。冠心病組中男65例、女40例，平均(67.9±11.8)歲，41%有吸煙史，48%有高血壓史，17%有糖尿病史，56%有高脂血癥史。對照組76例為同期住院非冠心病患者，其中男46例、女30例，平均(64.6±12.5)歲，37%有吸煙史，46%有高血壓史，16%有糖尿病史，52%有高脂血癥史。所有研究對象均排除近期各種急性感染和糖尿病、甲狀腺功能紊亂，以及肝腎功能異常、腫瘤患者等。兩組患者一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標本收集 所有研究對象均排除近期的各種感染。常規(guī)無菌采集兩組靜脈血,分離血清。貯存于-20 ℃，待測。

1.2.2 標本檢測 應用酶聯(lián)免疫吸附法測定患者血清中抗 CPN-IgG型抗體、抗 Hp-IgG型抗體、抗HCMV-IgG 型抗體，試劑均為北京貝爾有限公司出品。血清hs-CRP采用乳膠增強散射免疫比濁法，采用美國Dade Behring公司生產(chǎn)的特定蛋白分析儀(BN．Prospect)及原裝配套試劑。IL-6、TNF-α采用化學發(fā)光酶分析法，儀器采用西門子公司生產(chǎn)的IMMULITE全自動化學發(fā)光儀，檢測試劑也由西門子公司配套提供。全部操作按儀器規(guī)程和試劑說明書提供的操作步驟進行。

2 結(jié) 果

2.1 冠心病組與對照組的CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG單陽性率及協(xié)同陽性率的比較 冠心病組CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG 單陽性、雙陽性和三陽性的陽性率分別為33.3%、52.3%、78.1%、41.9%、13.3%；對照組陽性率則分別為14.5%、35.5%、63.2%、23.7%、2.6%。兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，結(jié)果見表1。

表1 冠心病組與對照組CPN-IgG 、Hp-IgG、HCMV-IgG 陽性相關(guān)性比較[n(%)]

2.2 3種微生物抗體陽性對冠心病的危險性評價 應用多元Logistic回歸分析危險因素對冠心病的影響情況，統(tǒng)計結(jié)果表明3種微生物抗體陽性對患冠心病存在危險性(P<0.05)，具體結(jié)果見表2。

表2 3種微生物抗體陽性對冠心病的危險性評價

2.3 冠心病組不同微生物感染狀況的hs-CRP、TNF-α和IL-6水平比較 將冠心病組的病例按感染微生物的情況分為4組，第1組為CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG均陽性；第2組為CPN-IgG+Hp-IgG、CPN-IgG+HCMV-IgG和Hp-IgG+HCMV-IgG均陽性；第3組為CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG其中一個陽性；第4組為CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG全陰性，比較各組的hs-CRP、TNF-α和IL-6水平，結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學分析處理表明：1組與2、3、4組，2組與3、4組，3組與4組之間的hs-CRP、TNF-α和IL-6水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 冠心病組不同微生物感染狀況的hs-CRP、IL-6 和TNF-α水平比較

注：與4組比較，△P<0.05；與3組比較，＊P<0.05；與2組比較，★P<0.05。

3 討 論

CPN是人類呼吸道疾病的常見病原體之一，同時CPN感染與動脈粥樣硬化、冠心病的發(fā)生有關(guān)，是一種專性細胞內(nèi)寄生菌，可以在內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和巨噬細胞中繁殖，可以誘導細胞因子和黏附分子的產(chǎn)生，還具有類脂多糖作用，可誘導宿主機體產(chǎn)生明顯的內(nèi)毒素性反應，也可引起機體的持續(xù)性感染,可能是誘發(fā)或加重冠心病的原因之一[9-11]。Hp感染可直接作用于動脈壁，引起局部炎癥，內(nèi)皮細胞損傷，同時能促進脂質(zhì)過氧化，導致膽固醇積聚，促使動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展；引起機體維生素B6、維生素B12和葉酸吸收不良，導致同型半胱氨酸水平升高，導致高同型半胱氨酸血癥，促進冠心病發(fā)生，所以Hp感染可能是發(fā)生冠心病的危險因素。HCMV也是與冠心病有關(guān)的主要病毒。HCMV感染普遍，可在單核巨噬細胞內(nèi)囊胞化以避免病毒降解和從細胞中清除，從而持續(xù)生存在單核巨噬細胞內(nèi)，可誘導內(nèi)皮細胞表達病毒糖蛋白，從而促發(fā)凝血反應；由于病毒感染或炎性反應可損傷內(nèi)皮細胞，影響內(nèi)皮依賴的舒血管功能，從而促使血管痙攣和血栓形成，病毒感染可能是動脈粥樣硬化發(fā)生的始動因子。

本研究選取在同一群體中進行細菌、衣原體和病毒3種與冠心病發(fā)生有關(guān)的微生物感染狀況進行調(diào)查，結(jié)果顯示冠心病組與對照組比較，冠心病組的CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG的感染率分別為33.3%、52.3%、78.1%,均分別高于對照組的陽性率(分別為14.5%、35.5%、63.2%)，兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。冠心病組3種微生物的協(xié)同感染雙陽性率為41.9%，三陽性率達到13.3%，經(jīng)統(tǒng)計學分析比較冠心病組的三陽性感染率和雙陽性感染率高于對照組(23.7%、2.6%)，兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；應用多元Logistic回歸分析，顯示冠心病組CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG陽性對患冠心病的OR分別為3.297、2.278、2.352，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。說明CPN-IgG、Hp-IgG和HCMV-IgG陽性對患冠心病存在危險性。

動脈硬化的形成及發(fā)展涉及許多復雜過程，多種感染引起的炎癥與免疫反應可能是其重要機制之一，且有人推測動脈硬化可能是一種特殊的慢性炎癥性纖維增生性疾病。hs-CRP是一種非特異性急性時相反應蛋白，機體受到炎癥狀態(tài)刺激時由肝細胞大量合成，其本身具有補體作用，是動脈粥樣硬化的啟動因子之一，可促進補體激活導致免疫損傷。hs-CRP直接參與了動脈粥樣硬化的形成和斑塊的破裂，它增高預測斑塊的易損性和促進斑塊的破裂，與未來冠心病事件的風險和易于破裂的易損斑塊數(shù)量有直接關(guān)系，提示hs-CRP在冠心病臨床進展中可作為一個主要的危險預測因子。TNF-α是由激活的單核細胞、巨噬細胞及Th1細胞產(chǎn)生的一種非糖基化轉(zhuǎn)膜蛋白，具有多種生物學效應，參與內(nèi)皮細胞損傷，促進炎性細胞的聚集和炎性遞質(zhì)釋放，可導致炎癥、細胞壞死，引起血管壁的損傷，因而它具有促進動脈硬化形成的作用，從而參與冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程。TNF-α可作為預測冠心病患者病情嚴重程度及動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性指標。IL-6在體時主要來源于活化的單核細胞、纖維母細胞和內(nèi)皮細胞，是肝臟釋放急性期蛋白的最強刺激因子，IL-6是炎性反應的一個中樞性調(diào)節(jié)者，直接促進骨髓造血，增加血小板數(shù)目和活性；促進糖皮質(zhì)激素合成；作為組織損傷及損傷的嚴重程度一直受到極大的關(guān)注。TNF-α、IL-6作為重要的初級炎癥因子，是在損傷反應時由巨噬細胞、單核細胞、內(nèi)皮細胞等釋放的多肽類物質(zhì)。在炎癥期間IL-6與TNF-α可以相互作用，TNF-α可促使IL-6的產(chǎn)生和釋放，但IL-6又可以對它發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，二者高度相關(guān)[12-14]。

本研究表明:冠心病組按感染微生物的狀況分組，病原體感染負荷多少與hs-CRP、TNF-α和IL-6濃度增高呈正比，隨著冠心病的病原體感染負荷不斷增加，3種血清炎癥標志物濃度亦增加，組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明多種炎癥因子相互協(xié)同共同參與了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程。

感染性因素是區(qū)別于其他危險因素的獨立因子，對冠心病的診斷、治療有積極意義。了解人體內(nèi)CPN、HCMV和Hp 3種微生物的感染狀況以及血清hs-CRP、IL-6和TNF-水平的聯(lián)合檢測能為冠心病的發(fā)生、發(fā)展提供實驗室依據(jù)。

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Study on correaltion between microorganisms infectious status with 3 kinds of inflammatory markers in coronary heart disease*

SHENYun-feng,HUYuan-gui△,ZHANGHong-bo

(DepartmentofClinicalLaboratory,WuhanNo.6Hospital,Wuhan,Hubei430015,China)

Objective To explore the correlation between the infection status of Chlamydia pneumoniae(CPN),Helicobacter pylori(Hp),human cytomegalovirus(HCMV) and the levels of serum inflammatory cytokines of high sensitive C-reactive protein(hs-CRP),interleukin-6(IL-6) and tumor necrosis ractor-α(TNF-α) in the patients with coronary heart disease(CHD).Methods 105 inpatients with CHD in our hospital from July 2012 to December 2013 were randomly selected as the CHD group and contemporaneous 76 persons for conducting the healthy examination were selected as the healthy control group.The serum IgG antibodies of CPN,Hp and HCMV;hs-CRP，IL-6 and TNF-α were detected.The serum hs-CRP,IL-6 and TNF-α leves also detected.Results The single,double and triple positive rates of CPN-IgG,Hp-IgG and HCMV-IgG in the CHD group were 33.3%,52.3%,78.1%,41.9% and 13.3% respectively;which in the control group were 14.5%,35.5%,63.2%,23.7% and 2.6% respectively,the diferences among them had statistical differences(P<0.05).The risk degrees of positive CPN-IgG,Hp-IgG and HCMV-IgG for suffering from CHD were 3.297,2.278 and 2.352,the difference had statistical significance(P<0.05).With the increase of pathogenic infection burden in CHD,the levels of hs-CRP,IL-6 and TNF-α were also increased,the diferences among the groups showed statistical significance(P<0.05).Conclusion The mixed infection of CPN,HCMV and Hp exist in the patients with CHD.Their long-term repeated chronic and mixed infection is closely related with CHD,which could induce the inflammatory markers mutually and synergistically participating in the occurrence and development process of CHD.The infectious factor is the independent risk factor and has active significance in the diagnosis and treatment of CHD.

coronary heart disease； Chlamydia pneumoniae; Helicobacter pylori; human cytomegalovirus; high sensitive C-reactive protein; interleukin-6； tumor necrosis factor-α

武漢市衛(wèi)生局臨床醫(yī)學科研項目(WX11B14)。

沈云峰，男，副主任技師，醫(yī)學碩士，主要從事臨床微生物和免疫學工作。

△通訊作者，E-mail：wuhanliuyiyuan@hotmail.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.012

A

1672-9455(2015)02-0169-03

2014-05-22

2014-08-26)