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    Beclin-1、細(xì)胞周期蛋白D1在腮腺腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義

    2015-03-13 00:24:39田希存劉江
    關(guān)鍵詞:多形性腮腺陽(yáng)性細(xì)胞

    田希存 劉江

    1.河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院CT室,河北唐山063000;2.河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,河北唐山063000

    Beclin-1、細(xì)胞周期蛋白D1在腮腺腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義

    田希存1劉江2▲

    1.河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院CT室,河北唐山063000;2.河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,河北唐山063000

    目的觀察Beclin-1、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)在良惡性腮腺腫瘤組織中的表達(dá),探討其與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。方法對(duì)30例腮腺多形性腺瘤、41例癌在多形性腺瘤中患者的病理標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)SP法染色。觀察Beclin-1、cyclinD1的陽(yáng)性表達(dá)。并取腺瘤旁組織21例作為對(duì)照。結(jié)果癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的陽(yáng)性率分別為58.5%、93.3%、95.2%。腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽(yáng)性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中cyclin D1的陽(yáng)性率分別為80.5%、50.0%、19.0%,腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的cyclin D1的陽(yáng)性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),腮腺多形性腺瘤組織與腺瘤旁比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。癌在多形性腺瘤中組織的Beclin-1、cyclin D1的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤直徑無(wú)關(guān)(均P>0.05);與TNM分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(均P<0.05)。結(jié)論良、惡性腮腺腫瘤組織Beclin-1、cyclin D1均有不同的表達(dá),表明Beclin-1、cyclin D1與腮腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

    腮腺多形性腺瘤;癌在多形性腺瘤中;Beclin-1;細(xì)胞周期蛋白D1

    腮腺多形性腺瘤是腮腺區(qū)最常見的良性腫瘤,在臨床上有2%~3%的復(fù)發(fā)率,并且可以癌變[1]。因此了解多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤中的發(fā)生發(fā)展機(jī)制對(duì)腫瘤的預(yù)防、早期診斷和治療都有著非常重要的意義。近年研究表明,Beclin-1、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[1-2]。在腮腺腫瘤,尤其是腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中組織的Beclin-1、cyclin D1表達(dá)有關(guān)報(bào)道較少。現(xiàn)對(duì)河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱“我院”)2009年10月~2014年10月住院治療的71例腮腺腫瘤患者的臨床資料進(jìn)行分析,旨在探討B(tài)eclin-1、cyclin D1在良惡性腮腺腫瘤組織中的表達(dá),為臨床的診斷、治療及預(yù)后提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    收集2009年10月~2014年10月來(lái)我院住院治療的腮腺腫瘤患者71例,均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)。其中,腮腺多形性腺瘤30例,癌在多形性腺瘤中41例。并取腺瘤旁組織21例作為對(duì)照。71例中男31例,女40例;年齡23~72歲,平均(40.1±5.2)歲。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行任何抗腫瘤治療。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò),患者均知情同意并簽署知情同意書。

    1.2 方法

    1.2.1 主要試劑與儀器Beclin-1單克隆抗體為美國(guó)Santa Cruze公司產(chǎn)品。即用型鼠抗人cyclin D1單克隆抗體與試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。高清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)購(gòu)自武漢千屏影像技術(shù)有限公司。

    1.2.2 免疫組織化學(xué)SP法病理組織以10%福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,4 μm連續(xù)切片。對(duì)標(biāo)本行免疫組織化學(xué)SP法染色。以乳腺癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照,以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。

    1.2.3 陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)Beclin-1陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。判斷標(biāo)準(zhǔn):隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的比率和染色深度進(jìn)行綜合評(píng)定。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):1分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)<10%;2分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)10%~50%;3分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)>50%。染色深度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):0分:無(wú)染色;1分:淡黃色:2分:黃色;3分:棕黃色??傇u(píng)分為2項(xiàng)評(píng)分相乘。0~3分為陰性,4分及以上為陽(yáng)性。cyclin D1免疫組化陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞核出現(xiàn)棕色小顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。陽(yáng)性細(xì)胞與總細(xì)胞數(shù)的比值>10%為陽(yáng)性表達(dá),反之為陰性表達(dá)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或精確概率法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同腮腺組織中Beclin-1、cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)

    Beclin-1陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì)中,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色顆粒。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的陽(yáng)性率分別為58.5%、93.3%、95.2%。腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽(yáng)性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。cyclin D1陽(yáng)性定位于細(xì)胞核,細(xì)胞核中出現(xiàn)棕色小顆粒。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中cyclin D1的陽(yáng)性率分別為80.5%、50.0%、19.0%,腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的cyclin D1的陽(yáng)性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),腮腺多形性腺瘤組織與腺瘤旁比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.2 Beclin-1、cyclin D1在癌在多形性腺瘤中不同臨床特征的表達(dá)

    Beclin-1、cyclin D1的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P>0.05);與TNM分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表2。

    3 討論

    多形性腺瘤又名混合瘤,是腮腺常見的良性腫瘤,其生長(zhǎng)緩慢,呈膨脹性生長(zhǎng),影響容貌,術(shù)后容易復(fù)發(fā),多次復(fù)發(fā)有惡變可能,可危及患者生命。近年來(lái)自噬與腫瘤的關(guān)系逐漸被人們所重視。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤患者體內(nèi)存在自噬活性的改變[3],因此,推測(cè)自噬活性的改變與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。自從酵母模型建立以來(lái),發(fā)現(xiàn)自噬的調(diào)節(jié)是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,需要多種分子的參與,其中Beclin-1是酵母自噬相關(guān)基因ATG6的哺乳動(dòng)物同源基因,是一種雙等位抑癌基因[4],Beclin-1含有12個(gè)外顯子,編碼450個(gè)氨基酸。Beclin-1基因定位于染色體17q21,是自噬的執(zhí)行者。研究表明,Beclin-1參與了自噬體的形成,并促進(jìn)其成熟,具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤增殖的功能[4]。多項(xiàng)研究表明,Beclin-1在多種惡性腫瘤中缺失,如卵巢癌、乳腺癌及前列腺癌等[5]。也有學(xué)者實(shí)驗(yàn)證明,在敲除小鼠的Beclin-1等位基因后,小鼠惡性腫瘤的發(fā)病率明顯高于正常小鼠[6]。李磊等[7]研究表明,Beclin-1在正常腮腺組織、腮腺多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中的陽(yáng)性率分別為100%、92%、63%; Beclin-1在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中表達(dá)下調(diào),自噬功能改變可能在腮腺腫瘤形成中具有一定作用。本研究結(jié)果表明,癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的陽(yáng)性率分別為58.5%、93.3%、95.2%。與腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織比較,癌在多形性腺瘤中組織中Beclin-1的表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期與Beclin-1的表達(dá)有關(guān)(均P<0.05)。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果大致相符。

    cyclin D1是細(xì)胞周期的正調(diào)節(jié)因子,是CDK4/6的活化因子,與其結(jié)合后共同促進(jìn)細(xì)胞周期。研究表明過(guò)度表達(dá)的蛋白加速了細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖[8-11]。在食管、肺、結(jié)腸、肝和胰腺等各種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了cyclin D1異常表達(dá)。Pignataro等[12]于1998年第1次報(bào)道腺樣囊性癌中cyclin D1基因的改變,21.4%的腺樣囊性癌組織出現(xiàn)過(guò)表達(dá)。向國(guó)林等[1]研究表明,cyclin D1在正常腮腺組織、多形性腺瘤初發(fā)瘤、多形性腺瘤復(fù)發(fā)瘤及癌在多形性腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0%、38%、50%、75%,多形性腺瘤與癌在多形性腺瘤中比較有顯著性差異(P<0.05),多形性腺瘤復(fù)發(fā)瘤中陽(yáng)性表達(dá)率高于多形性腺瘤初發(fā)瘤,但無(wú)顯著性差異(P>0.05)。本研究結(jié)果表明,癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中cyclin D1的陽(yáng)性率分別為80.5%、50.0%、19.0%,腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的cyclin D1的陽(yáng)性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),腮腺多形性腺瘤組織與腺瘤旁比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果大致相同。本研究結(jié)果表明,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期與cyclin D1的表達(dá)有關(guān)(P<0.05)。

    綜上所述,不同性質(zhì)的腮腺腫瘤組織Beclin-1、cyclin D1均有不同的表達(dá),表明Beclin-1、cyclin D1與腮腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),隨著對(duì)其致病機(jī)制不斷深入的研究,通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的自噬活性,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬性死亡,使其在腫瘤治療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。

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    Expression and clinical significance of Beclin-1,cyclin D1 in parotid tumor tissue

    TIAN Xicun1LIU Jiang2▲1.CT-Room,Traditional Chinese Medicine Hospital of Tangshan City,Hebei Province,Tangshan063000,China;2.Basic Medical College of Hebei United University,Hebei Province,Tangshan063000,China

    Objective To observe the expression and of Beclin-1,cyclin D1 in parotid tumor tissue,and explore the relation of tumorigenesis and development.Methods The pathologic specimens of 30 cases of parotid pleomorphic adenoma,41 cases of carcinoma in pleomorphic adenoma were the immunohistochemical SP staining.The positive expressions of Beclin-1,cyclin D1 were observed.21 cases of adenoma tissues were as the control.Results The positive rate of Beclin-1 in carcinoma in pleomorphic adenoma,pleomorphic adenoma of parotid gland,adenoma tissues was 58.5%,93.3%,95.2%.The positive rate of Beclin-1 in pleomorphic adenoma of parotid gland,adenoma tissues were compared with which of carcinoma in pleomorphic adenoma,there were significant differences between two groups(allP<0.05). There was no significant difference between pleomorphic adenoma of parotid gland and adenoma tissues(P>0.05).The positive rate of cyclin D1 in carcinoma in pleomorphic adenoma,pleomorphic adenoma of parotid gland,adenoma tissues was 80.5%,50.0%,19.0%.The positive rate of cyclin D1 in pleomorphic adenoma of parotid gland,adenoma tissues were compared with which of carcinoma in pleomorphic adenoma,there were significant differences between two groups(all P<0.05),there was significant difference between pleomorphic adenoma of parotid gland and adenoma tissues(P<0.05).There was nothing to do with age,sex,tumor diameter of Beclin-1,cyclin D1 in carcinoma in pleomorphic adenoma(P>0.05);it had something to do with TNM staging and lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion There are different expression with Beclin-1,cyclin D1 in benign,malignant parotid tumor tissue,Beclin-1,cyclin D1 are closely related to occurrence,development of parotid gland tumor.

    Parotid pleomorphic adenoma;Carcinoma in pleomorphic adenoma;Beclin-1;cyclin D1

    R737.33

    A

    1673-7210(2015)02(c)-0004-04

    2014-11-25本文編輯:衛(wèi)柯)

    河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)11276135)。

    ▲通訊作者

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